SN 1419-2004疖疮病细菌学诊断操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准疖疮病细菌学诊断操作规程Protocolofbacterialdiagnosisforfurunculosis国家质量监督检验检疫总局本标准的附录A和附录B是规范性附录。|疖疮病细菌学诊断操作规程2.2培养基和试剂氏染色液I、Ⅱ、Ⅲ、IV、V-P试剂(培养基和试剂的配制见附录A)。4.2临床症状和病理变化减少到30条鱼。菌采集脏器。1L26.1细菌的初分离(两种方法任选一种)灭鲑气单胞菌在PBG培养基上形成较小的黄色菌落。在TSA培养基上形成水溶性褐色色素菌需作下一步试验。每个PBG培养皿上选取三个典型菌落，三个以下时全部接至FA斜面，每个菌落分TSA培养基直接挑取典型菌落，或用接种环刺破表面的琼脂层从PBG培养基取挑典型菌落，接种到FA斜面；置于25℃培养箱内培养72h,观察有无水溶性褐色色素产生。取一于净的脱脂载玻片，滴1滴～2滴无菌水，从培养20h～72h、产生水溶性褐色素的FA斜面，用接种环挑取少许菌苔涂片，干燥后火焰上通过三次固定；病变部位组织涂片用同样的方法干燥固定。革兰氏染色液I液染色1min,Ⅱ液染色2min,Ⅲ液脱色至酒精不出现紫色为止，IV液染色1min~2min,用油镜观察染色特性和形态。菌体呈红色表示革兰氏阴性；菌体呈紫色表示革兰氏阳性。灭鲑气单胞菌为革兰氏阴性短杆菌，菌体大小为(0.8μm～1.2氏阳性菌(如鲑鱼肾细菌、鱼乳酸杆菌、链球菌等),革兰氏阴性长杆菌(如柱状曲挠杆菌等)和革兰氏阴性短杆菌但两端浓染的巴氏杆菌。7.2细菌运动性观察(两种方法任选一种)取另一干净的脱脂载玻片，滴1滴～2滴无菌水，从同一FA平板，用接种环挑取少许菌苔涂抹在水滴中，加盖玻片于400倍～600倍暗视野显微镜观察是否运动。细菌能快速运动和产生位移的，为有运动性；细菌在原地来回颤动的(即布朗运动),为没有运动性。灭鲑气单胞菌无运动性。可以排除运动7.2.2半固体培养基培养法用接种环挑取少许菌苔于氧化酶试纸上，5s内观察结果。菌苔呈红色表示氧化酶试验阳性，不变色表示氧化酶试验阴性。灭鲑气单胞菌氧化酶阳性。可以排除氧化酶阴性的柠檬酸杆菌、爱德华氏菌、3高压灭菌的O/F基础培养基加入滤过灭菌的10%的葡萄糖溶液，使葡萄糖的第二管不用灭菌矿物油或液体石蜡覆盖表面，25℃培养24h～48h。7.3.4.4O/F试验结果判定发酵管氧化管发酵产酸或产气产酸或产气氧化无变化产酸或产气无反应无变化——无变化7.3.5水杨苷产酸试验7.3.8阿拉伯糖和麦芽糖发酵试验8.1初步诊断4(规范性附录)蛋白胨糖原氯化钠(分析纯)肉浸汁十二烷基磺酸钠(分析纯)溴百里酚蓝蒸馏水上述成分充分混合、加热溶解，用10%的氢氧化钠溶液或2mol/L的盐酸校正pH为7.2~7.5,在116℃下高压灭菌20min。A.22%琼脂A.3蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA培养基)上述成分充分混合、加热溶解，用10%的氢氧化钠溶液或2mol/L的盐酸校正pH为7.3,在121℃下高压灭菌20min,分装于无菌试管中，制作斜将琼脂粉末加入到肉汤中，加热溶化，用10%的氢氧化钠溶液或2mol/L的盐酸校正pH为7.0,5各成分相加放在60℃左右水浴中，待完全溶化后，使之沸腾一次。用10%的氢氧化钠溶液或A.7葡萄糖蛋白胨水氯化钠(分析纯)琼脂0.2%溴麝香草酚蓝溶液除指示剂0.2%溴麝香草酚蓝溶液外，混合各成分，加热溶解，用10%的氢氧化钠溶液或2mol/L6(规范性附录)疖疮病细菌分离鉴定流程接种病变部涂片G染色PBG或