SN-T4280-2-2016国境口岸德国小蠊形态及DNA条形码鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4280.2—2016国境口岸德国小蠊形态及DNA条形码鉴定方法2016-08-23发布ISN/T4280《国境口岸德国小蠊形态及DNA条形码鉴定方法》共分为以下4个部分：——SN/T4280.1——SN/T4280.2——SN/T4280.3——SN/T4280.4国境口岸红头丽蝇DNA条形码鉴定方法；国境口岸德国小蠊形态及DNA条形码鉴定方法；国境口岸澳洲大蠊形态及DNA条形码鉴定方法；国境口岸美洲大蠊形态及DNA条形码鉴定方法。本部分为SN/T4280的第2部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。1国境口岸德国小蠊形态及DNA条形码鉴定方法SN/T4280的本部分规定了德国小蠊[Blattellagermanica(Linnaeus,1767)]的形态和DNA条本部分适用于国境口岸对德国小蠊成虫的形态和对肢体不全的成虫，以及卵夹、若虫等非成虫标本的DNA条形码鉴定工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程下列术语和定义适用于本文件。前足股节刺式frontfemurtype用数字表示，标记在类型的后面。如A型具2或者3个大端刺，则表示为A2或A3型，如B型具2或者3个大端刺，则表示为B2或B3型。参见附录A。由雄性蜚蠊腹部第10背板或雌性蜚蠊第8背板特化而成，两后侧端着生尾须。其形状，是否特化，由雄性蜚蠊腹部第9腹板或雌性第7腹板特化而成，它的形状多样，特化形式多，后缘是否凸出，是2雄性外生殖器malegenitalia由左阳茎(leftphallomere)、中阳茎(medianphallomere)、右阳茎(rightphallomere)组成。雄性外4形态鉴定德国小蠊的成虫依照其形态特征进行鉴定。其分类地位、生态习性和国内外分布参见附录C。姬蠊科分类检索表见附录D。4.2标本的制作和保存标本的制作和保存见SN/T1876。4.3形态鉴别要点体小型，黄褐色。前胸背板具两条黑色纵条纹。腹部第8节背板腺体近圆形。4.4.1体小型，黄褐色，前胸背板长×宽2.1mm～2.7mm×2.6mm～3.6mm,前翅长7.6mm~11.2mm,体连翅长10mm～13.5mm。头黄褐色块，部分个体额及唇基红棕色。触角基节浅褐色，其余黑褐色(参见附录E中的图E.1～图E.4)。4.4.2头顶两复眼间距略小于触角窝间距(参见图E.2和图E.4)。前胸背板略呈梯形，前缘近平直，后缘中部略突出，中域具2条纵向的黑褐色斑纹，两纵纹上窄下宽，间距随之也上窄下宽(参见图E.1和图E.3)。雄虫前后翅未达腹部末端，仅达肛上板中部(参见图E.1)。前足股节内缘刺式B型，具端刺3根(参见图E.2和图E.4),为B3型。跗节具爪垫，前跗具中垫节，爪对称，不特化。雄虫腹部背板第1背板不特化；第7、第8背板特化，第7节背板中域两凹槽半遮，第8节背板近前缘两腺体近圆形(参见图E.5箭头所示)。4.4.3雄性外生殖器肛上板对称，舌状，端部钝圆(参见图E.6)。下生殖板端部平截，左侧角具斜“U”较近，约等于左尾刺的长度(参见图E.7)。钩状阳茎位于下生殖板左侧，钩状部位内缘光滑(参见蜚蠊成虫形态符合4.3～4.4者，判定为德国小蠊成虫。5DNA条形码鉴定5.1仪器及试剂耗材3比对见SN/T4278。5.4参比序列TAGGGACATCCTTAAGAATATTAATTCGAGCTGAATTAAATCAACCCGGCTCATTAATTGGAGATGATCAAATTTATAATGTTATTGTAACAGCACATGCCTTTGTAATAATTTTCTTTATAGTTATACCAATTTTAATTGGGGGATTCGGAAATTGGTTAGTACCTTTAATATTAGGAGCTCCTGATATAGCATTTCCTCGAATAAATAATATAAGTTTTTGGCTTCTACCTCCCTCTCTTTCTCTCTTACTAGCTAGTAGTTTAGTCGAAAGAGGGGCTGGGACTGGTTGAACCGTATACCCACCGTTAGCAAGAGGTATTGCCCATGCCGGAGCTTCAGTAGATTTAGCTATTTTTTCCCTTCACCTTGCTGGAGTATCTTCAATTTTAGGTGCTGTAAATTTTATTTCAACAATTATTAATATAAAACCAATTAATATAAGACCTGAACGAATTCCCTTATTTGTATGATCAGTAGGAATTACTGCATTATTACTATTATTATCATTACCTGTCCTTGCGGGTGCAATTACAATACTATTAACAGATCGAAACTTAAATACATCATTCTTTGATCCTGCAGGTGGTGGAGATCCAATTT注：粗斜体为引物序列，序列分析时不包含引物部分(德国小蠊DNA条形码BOLD系统参比序列号为GBMIN12722-13)。5.5结果判定目标序列与BOLD数据库中德国小蠊序列相似度大于或等于99.0%者，DNA条形码方法鉴定为德国小蠊。大于98.0%小于99.0%者.需结合外部形态特征进行综合判断，小于或等于98.0%者，不予以DNA条形码种类判断。4(资料性附录)蜚蠊足及前足股节刺式蜚蠊足及前足股节刺式见图A.1～图A.5。图A.1蜚蠊足结构示意图图A.2前足股节内缘刺式A型图A.3前足股节内缘刺式B型图A.4前足股节内缘刺式C型图A.5前足股节内缘刺式D型5(资料性附录)蜚蠊跗节及爪式蜚蠊跗节及爪式见图B.1～图B.5。图B.1蜚蠊前跗节示意图图B.2前跗节爪对称，不特化图B.3前跗节爪不对称，不特化图B.4前跗节爪对称，特化图B.5前跗节爪不对称，特化6(资料性附录)德国小蠊分类地位、生态习性及分布C.1分类地位德国小蠊Blattellagermanica(Linnaeus,1767)隶属于蜚蠊目(Blattodea),姬蠊科(Ectobiidae),姬蠊亚科(Blattellinae),小蠊属(Blattella)。C.2生态习性易随火车、轮船、飞机等交通工具四散传播。能携带和传播数十种病原体，对人类的生命健康造成严重危害。每头雌虫能产卵夹3个～7个，每个卵夹含卵35粒～45粒，在常温下经4周～6周孵化成若虫，若虫蜕皮6次羽化为成虫；成虫寿命5个～8个月，成虫与若虫均群栖性。C.3分布C.3.1国内分布全国均有分布。除南极洲没有报道外，其余六个洲均有分布。7SN/T4280.2—2016(规范性附录)姬蠊科检索表D.1姬蠊科Ectobiidae分亚科检索表1钩状阳茎位于下生殖板右侧 拟叶蠊亚科Pseudophyllodromiinae钩状阳茎位于下生殖板左侧 22唇基与额分界明显，唇基凸出；体型微小；中阳茎和右阳茎复杂 褶翅蠊亚科Anaplectinae唇基与额分界不明显唇基不凸出；体形较大；中阳茎和右阳茎相对简单 姬蠊亚科BlattellinaeD.2姬蠊亚科Blattellinae分属检索表1雄虫下生殖板无尾刺 2雄虫下生殖板具尾刺 32前足股节腹缘刺式B3 毡蠊属JacobsoninaHebard,1929前足股节腹缘刺式A3 新叶蠊属NeolobopteraPrincis,19533后翅端具附属区 4后翅端不具附属区 64后翅肘脉仅具1条分支，附属区约占40% 微蠊属AnaplectellaHanitsch,1928后翅肘脉局多条分支，附属区占25% 55后翅肘脉具4条～8条伪完全脉和不完全脉 卷翅蠊属AnaplectoideaShelford,1906后翅肘脉具0条～4条伪完全脉和不完全脉 玛啦蠊属MalaccinaHebard,19296爪对称，特化 齿爪蠊属SymplocodesHebard,1929爪对称，不特化 87后翅顶三角区较大，中阳茎具分支 拟截尾蠊属HemithyrsoceraSaussure,1893不如上述 88尾刺圆柱形，背板不特化 亚蠊属ParcoblattaHebard,1917尾刺不如上述 99后翅中脉和肘脉呈“S”形弯曲，肛上板对称 刺板蠊属ScalidaHebard,1929不如上述 10第1背板不特化，前胸背板常具2条纵向黑带 小蠊属BlattellaCaudell,1903不如上述 11第9背板不特化，下生殖板左侧缘端部不上卷 歪尾蠊属SymploceHebard,1916第9背板特化，少有不特化，下生殖板左侧缘端部上卷 拟歪尾蠊属EpisymploceBei-Bienko,1950D.3小蠊属Blattella分种检索表1下生殖板左侧凹陷处具1个尾刺 单尾小蠊B.singularisWang,Che&.Feng2010下生殖板左侧凹陷处具2个尾刺 28SN/T4280.2—20162左右尾刺明显不等长，左尾刺球状，着生于下生殖板左侧凹陷的后部；右尾刺较左尾刺小，或几乎退化消失。腹部第7背板或第7、第8背板特化 3尾刺刺状，左右尾刺等长或稍不等长，尾刺不呈球状，不退化消失。仅腹部第7背板特化 83腹部第8背板两腺体间具一条纵向的凹槽，或平坦不具凹陷 4腹部第8背板两腺体间具一条狭窄的纵向隆线 54腹部第8背板中部凹槽明显，向下延长至两腺体中间。两腺体呈圆形 德国小蠊B.germanica(Linnaeus,1767)腹部第8背板中部平坦，不具凹槽，或凹槽不明显。如果具凹槽，则凹槽不向下延长至两腺体间。两腺体近矩形，向两侧延伸，后缘不向前弯曲 阿氏小蠊B.asahinaiMizukubo,19815腹部第8背板两腺体间隆线纵向向后延伸且逐渐变窄的。两腺体向前弯曲，延长至第8背板前缘 拟德国小蠊B.lituricollis(Walker,1868)腹部第8背板两腺体间隆线向后延伸，贯穿整个第8背板，不变窄 66腹部第7、第8背板均特化。第8背板两腺体向两侧延伸，不触及第8背板前缘 双纹小蠊B.bisignata(BrunnervonWattenwyl,1893)仅腹部第7背板特化。第8背板腺体不如上述 77前后翅短，后翅仅达腹部第3背板 卡氏小蠊B.karnyiPrincis,1969前后翅长度超过腹部末端 台湾小蠊B.formosana(Karny,1915)8肛上板后缘中部具凹陷 索氏小蠊B.sauteri(Karny,1915)肛上板后缘中部不具凹陷 99肛上板后缘横截。尾刺圆柱型，端部钝圆 褐纹小蠊B.biligata(Walker,1868)肛上板后缘圆弧形。尾刺圆锥形，端