医学知识一农药

第七章农药及代谢产物的测定第一节有机磷农药有机磷农药绝大多数为杀虫剂，如常用的对硫磷、内吸磷、马拉硫磷、乐果、敌百虫及敌敌畏等，近几年来已先后合成杀菌剂、杀鼠剂等有机磷农药。有机磷农药多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类，其结构式中R1、R2多为甲氧基（CH3O-）或乙氧基（C2H5O-）；Z为氧（O）或硫（S）原子：X为烷氧基、芳氧基或其他取代基团。

一、理化性质有机磷农药大多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，除敌百虫和敌敌畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏，敌百虫例外，敌百虫为白色结晶，能溶于水，遇碱可转变为毒性较大的敌敌畏。二、代谢和生物监测指标接触途径：农药的生产过程中，特别是出料、分装。施用农药以及装卸、运输、供销、保管过程中。吸收：有机磷农药中毒的途径可通过皮肤进入人体。在喷洒过程的气雾可由呼吸道吸入；误服者由消化道吸收。分布：吸收后经血液和淋巴系统很快分布到全身，肝脏最高，还可以结合人蛋白质。代谢：氧化：脱硫作用、脱烷基、脱烷酰基、硫酯基的氧化。毒性增强。水解：降低毒性。结合：氧化产物，水解产物结合羧酸、醇、酚等而排泄，避免了抗胆碱酯酶活性。与蛋白质共价结合：迟发性神经毒性。正常生理情况：

胆碱酯酶+乙酰胆碱（神经传递介质）↓乙酰胆碱酯酶↓胆碱酯酶+乙酸+胆碱有机磷农药中毒：抑制了胆碱酯酶的活性，造成组织中乙酰胆碱的积聚，其结果引起胆碱能受体活性紊乱，而使有胆碱能受体的器官功能发生障碍。

生物监测指标1、血液中胆碱酯酶活性作为接触生物指标或效应性生物标志物。轻度中毒：全血胆碱酯酶活性降至正常人的70%～50%中度中毒：正常人的50%～30%重度中毒：正常人的30%以下2、血液中有机磷农药：接触性生物标志物三、样品采集1.血液中有机磷农药测定：准确采取肘静脉血2.5ml，立即置于盛有0.1mol/L盐酸溶液7.5ml的试管中，冰冻贮存。2.血液中胆碱酯酶活性测定：末梢血。四、血液中有机磷农药的测定1.原理：血液中有机磷农药在酸性条件下，环己烷萃取，气向色谱测定。2.仪器条件：色谱柱：2m×3.2mm；ChromsorbW-HP，80~100目；固定液：SE-30柱温：200℃；汽化室温度：240℃；检测室温度：240℃；载气为高纯氮气，流量：50ml/min。燃气：氢气。3.样品处理和测定①绘制标准曲线：0.4,2.0,4.0μg/ml.②用环己烷萃取：取8ml+2ml环己烷振荡，离心。③PT-C18色谱预处理柱净化：上清液。④定容：氮气流挥发至0.1ml。⑤进样：1~5ml。五、全血胆碱酯酶活性的测定（一）三氯化铁分光光度法1.原理红棕色羟肟酸铁配合物520nm（1）.绘制标准曲线①用ph=7.20的磷酸缓冲液配置乙酰胆碱标准系列，0~4.00μmol。②各管+碱性羟胺溶液4ml，振摇3min;③加1+2盐酸2ml，振摇1min；④加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤。⑤520nm处，测定吸光度，绘制标准曲线。2、样品处理和测定（2）.样品处理和测定①取A和B两管,各加入水0.96ml及耳垂血40u1,摇匀,置于37℃水浴中,预热5~10min.②向样品管A中,加乙酰胆碱标准液1ml,准确计时,于37℃±0.5℃水浴30min后，立即加碱性羟胺4ml,振摇3min终止反应。2、样品处理和测定③向对照管B中，先加碱性羟胺4ml，振摇3min，再加乙酰胆碱标准液1ml。④向A和B两管中,各加1+2盐酸2m1,振摇1min,然后各管加10％三氯化铁溶液2ml,摇匀,过滤。于520nm处测定吸光度。（3）.结果计算被水解乙酰胆碱的吸光度＝B管吸光度－A管吸光度被水解乙酰胆碱的量（μmol）40u1血

胆碱酯酶活性绝对值（C）全血胆碱酯酶活性值(µmol/ml)＝C/0.04正常人全血胆碱酯酶活性值胆碱酯酶活性百分数：接触者全血胆碱酯酶活性值×100%＝3.注意事项①采血时不应过度挤压耳垂。如果过度挤压耳垂，采得的血液中血清或组织液占比例过多，结果偏低。②氯化乙酰胆碱在空气中极易潮解，称量速度要快。③水浴温度和时间对酶作用有明显影响，温度控制在37±0.5℃，时间控制在0.5min内。④加三氯化铁显色后，棕红色配合物易褪色，必须在5~10min比色。⑤计算胆碱酯酶活性百分数需要健康人群全血胆碱酯酶活性值作标准。可用本地区的未接触健康人作测定，求得正常人胆碱酯酶活性值，一般正常人数不少于30名。（二）DTNB分光光度法1.原理：黄色v412nm(CH3)3NCH3CH2SCOCH3+H2OOH胆碱酯酶¸(CH3)3NCH3CH2SH+CH3COOHOH(CH3)3NCH3CH2SHOH+NO2SS(CH3)3NCH3CH2SSNO2COOHHSNO2COOHNO2COOHOHCOOH+2.样品处理和测定（1）绘制标准曲线1.0μmol/mol的巯基标准0、0.1、0.2、0.3、0.4ml+水至0.5ml，+磷酸缓冲液1.5ml，+DTNB溶液0.5ml412nm处测定吸光度。1ml1.0mmol/mol的巯基标准≈1.0μmol谷胱甘肽≈1.0μmol硫代胆碱胆碱酯酶活力：0、20、40、60、80μmol/ml。（2）样品的测定①取血样10μl放入盛有3ml磷酸缓冲液的小试管中;②取出1.50ml作为测定样，原管为对照样；③对照管中加入一滴抑制剂（毒扁豆碱溶液）；④向两管中各加DTNB0.50ml，37℃水浴预温5min;⑤分别向两管加入乙酰胆碱0.50ml，记时；⑥37℃水浴准确反应6min后，向测定管加1滴抑制剂终止反应；⑦离心除去血细胞，取上清液于比色管中，412nm测定吸光度。测定管吸光度为A，对照管吸光度为A’.(3)结果计算根据测得的A-A’，得到吸光度差值ΔA，即为酶水解产生的硫代胆碱的显色深度，查标准曲线得到胆碱酯酶活性单位。3.注意事项（1）红细胞中，乙酰胆碱酶全部存在于细胞膜表面，测定不需要红细胞溶解。如有溶血的血红蛋白在414~415nm处有吸收峰。为防止溶血，本法所用