T-SHZSAQS 00209-2023 绵羔羊超数排卵及体外胚胎生产技术规程

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65.020.30学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载CCS

B

41 T/SHZSAQS

—2023绵羔羊超数排卵及体外胚胎生产技术规程 石河子市质量标准化协会 发

布学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 前言

................................................................................

II1

..............................................................................

12 规范性引用文件

....................................................................

13 术语和定义

........................................................................

13.1

绵羔羊超数排卵技术................................................................

13.2

绵羔羊体外胚胎生产................................................................

14 绵羊羔羊供体的选择

................................................................

15 超数排卵

..........................................................................

15.1

所需激素..........................................................................

15.2

所需耗材和试剂....................................................................

25.3

激素剂量..........................................................................

25.4 超排方法

........................................................................

25.5

羔羊手术..........................................................................

26 幼羔体外胚胎生产

..................................................................

26.1

所需器材与试剂....................................................................

26.2

卵母细胞获取......................................................................

26.3

卵母细胞筛选......................................................................

26.4

卵母细胞体外成熟培养..............................................................

36.5

精液处理..........................................................................

37 体外受精

..........................................................................

38 体外培养

..........................................................................

3附录

A （资料性） 羊活体采卵主要器械与设备..........................................

4附录

B （规范性）....................................................................

5学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 本文件参照

GB/T1.1-2020《标准化工作导则

第

1

部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。本文件起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。刘长彬、卢守亮、郭延华、代蓉、刘倩、刘伟俊、王定国。II兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1 范围本文件规定了绵羔羊超数排卵及体外胚胎生产的术语与定义及绵羔羊供体的排卵及体外胚胎生产。2 规范性引用文件适用于本文件。NY/T1571 羊胚胎移植技术规程DB65/T4073 成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1

绵羔羊超数排卵技术4周龄～83.2

绵羔羊体外胚胎生产体外培养等一系列操作的技术。4 绵羊羔羊供体的选择出生4周龄至8周龄绵羔羊，作为幼羔体外胚胎生产的供体。5 超数排卵5.1

所需激素促卵泡生成素（FSH），孕马血清促性腺素（PMSG兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023兔学兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5.2

所需耗材和试剂具体见附录A。5.3

激素剂量每只羔羊注射180IU

FSH和330IU

PMSG。5.4

超排方法羔羊每隔FSH20～30IU6180IU注射时同时肌内注射

PMSG，如图。5.5

羔羊手术参考NY/T1571，全麻剂量按照体重确定剂量。6 幼羔体外胚胎生产6.1

所需器材与试剂器材与试剂见附录B。6.2

卵母细胞获取用。6.3

卵母细胞筛选捡卵时挑选具有三层颗粒细胞及以上的卵丘卵母细胞复合物进行后续成熟实验，如图。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6.4

卵母细胞体外成熟培养6.4.1

1h

将加有体外成熟培养液的四孔板、含有采卵液的培养皿，放置于

38.55%CO2、饱和湿度的培养箱中预热。6.4.2

次，按每孔

60～80

枚卵母细胞放入提前预热好的四孔板内，放入二氧化碳培养箱中培养

24～26h。6.5

精液处理6.5.1

在容器中调制

42℃的温水。6.5.2

将精液细管从液氮中取出，在空气中轻微晃动，把表面的液氮挥发掉，放到温水中进行解冻

1min

左右，期间将精液细管在水中来回晃动，取少量精液进行涂板观察精子活力以及精子密度。6.5.3

将

缓慢的从倾斜的玻璃离心管的侧面加入到

90%percoll中，将精液吹入到离心管中，

0

分钟。6.5.4

第一次离心后取下层的云雾状沉淀转移到

液中进行

10min

的二次离心。6.5.5

留

～300

取少量精液进行涂板观察精子活力以及精子密度以备用。7 体外受精对体外成熟培养～的羔羊卵母细胞进行体外受精操作，体外受精操作应符合DB65/T4073相关要求。8 体外培养对体外受精胚胎进行体外培养操作，体外培养应符合NY/T1571

、DB65/T4073相关要求。序号项目名

称规

格单位数量1手术器械毛剪16cm～24cm把22外科剪圆头、尖头把4～63其他活动刀柄4号把24刀片20#～个若干5解剖刀14cm～18cm把26止血钳弯头、直头把4～67持针器专用把28手术镊带齿、不带齿把2～49缝合针直型、1/2弧型、3/8弧型和半弯型个若干10缝合线丝线、肠线盒若干11创巾30cm×70cm个若干12移动保定架120cm×60cm×80cm台3～513液氮罐YDS-30个114鼓风干燥箱80cm×80cm×100cm台115高压灭菌锅HVE-50

台116塑料细管0.25

mL个若干17恒温台20cm×20cm×30cm台118药品及试剂0.9

%的NaCl500mL瓶5～1019孕酮海绵栓或阴道栓（CIDR）含35mg氟孕酮个若干20速眠新1.5mL×10盒121鹿醒宁1.5

mL×10盒122青霉素2.5g×20盒123链霉素2.5g×20盒124破伤风药0.75mL×10盒125盐酸利多卡因10mL×10盒126肾上腺素1mL×盒1下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载T/SHZSAQS 00209—2023下准ｏｍ标．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔学载AA附

录 A（资料性）羊活体采卵主要器械与设备表A.1表A.1

羊活体采卵主要器械与设备学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SHZSAQS 00209—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载BB附

录 B（规范性）B.1

空怀期

(妊娠前期)7%5%1%，小苏打1%；全日粮配方：精料0.4kg，玉米秸秆0.3kg，青干草

15kg，青贮1.8kg。代谢能12.6MJ/d1.26kg/d3.2g/d2.5g