集中空调通风系统微生物检验技术讲义

集中空调通风系统微生物检验技术

主题室内空气中的微生物微生物在空气中的传播集中空调通风系统微生物卫生指示菌的检测室内空气中的微生物1、来源人的生命活动人的劳作活动室内环境地面来源2、传播附着于尘埃附着于鼻腔和口腔喷出的飞沫小滴上附着于飞沫表面蒸发后所形成的“飞沫核”上3、种类分类举例细菌革兰氏阴性细菌耶尔森氏菌属鼠疫耶尔森氏菌军团菌属嗜肺军团菌肠杆菌科克雷伯氏菌，枸橼酸杆菌，变形杆菌鲍特菌属百日咳杆菌革兰氏阴性厌氧无芽孢杆菌无菌性肺炎立克次氏体Q热立克次氏体衣原体鹦鹉热衣原体革兰氏阳性细菌葡萄球菌属金黄色葡萄球菌链球菌属肺炎链球菌分枝杆菌属结核分枝杆菌棒状杆菌属白喉棒状杆菌需氧芽孢杆菌属炭疽杆菌支原体肺炎支原体真菌（酵母菌、霉菌）青霉属、枝孢菌属、曲霉属、金黄担子属、链格孢属等病毒RNA病毒小RNA病毒科柯薩奇病毒埃克病毒鼻病毒冠状病毒科人呼吸道冠状病毒正粘病毒科流感病毒副粘病毒科腮腺炎病毒，麻疹病毒，副流感病毒DNA病毒腺病毒科腺病毒动物尘螨等原生动物、昆虫肢体残留物植物花粉集中空调通风系统微生物卫生指示菌的检测冷却水、冷凝水中的嗜肺军团菌空调送风中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌空调风管表面细菌总数、真菌总数中央空调与军团病世界上的多起军团病的暴发与中央空调冷却塔有关。冷凝水同样为军团菌的生长提供一个适宜的环境。军团菌伯杰氏细菌分类最新归为一个科，一个属，共有42个种，60多个血清型。其中有22种是从病人分离的。嗜肺军团菌占22种引发病例的绝大多数（90%）。米克戴德军团菌占6-8%，其它约占2%。另外较主要的还有博兹曼军团菌、杜莫夫军团菌、长滩军团菌、约旦军团菌、高尔曼军团菌、非利军团菌、阿尼沙军团菌、詹姆斯敦军团菌、红光军团菌及橡树岭军团菌等。嗜肺军团菌目前已发现有15个血清型，从病人分离最多的是1型。军团菌分布

极其广泛，但都与水有关。野外的池、溪、河、泉水都能分离出此菌，在生活环境中的自来水、贮水箱水、淋浴水、桑拿浴水、锅炉房排气管的冷凝水中都有此菌存在。特别是空调系统冷却塔、循环贮水池、冷凝水几乎是此菌的“长住地”。军团菌抵抗力

在无芽孢细菌中此菌属对自然环境因素抵抗力较强。能在自然水体和空调、水暖设备的水中长期存活。在普通自来水中可存活400天以上，在60℃左右甚至在火山口附近的水塘里都能发现军团菌的踪迹。波恩大学的研究人员发现该菌是医院下水道的“生物膜”组成成分之一。对常用消毒剂敏感。军团菌生物学性状革兰氏染色阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，菌体大小为0.3-0.9X2-20微米，有一至数根极或次极鞭毛，其细胞壁中侧链脂肪酸占有高比例（80%-90%，一般为20%），这点与其它革兰氏染色阴性杆菌不同。军团菌培养物特性1、军团菌的生长繁殖，除一般细菌要求的营养外，需要半胱氨酸和铁盐。2、钠对其生长不利。3、对PH的要求严格，培养接种前培养基的PH要控制在6.9～7.0。（有机缓冲剂ACES，PH很稳定，不用调都可以。）4、最适生长温度35℃，生长温度范围25～42℃。培养物特性5、专性需氧6、代谢很慢7、菌落特点通常在3天（72小时）可见小菌落，4天（96小时）则发育成圆形，边缘整齐，表面稍隆起，光滑、湿润，在黑色培养基的背景下，呈乳白色微带蓝灰的典型军团菌菌落，此时菌落直径一般可达2～３mm。菌落有光泽，粘稠，用接种环可拉起粘丝。培养物特性军团菌属的典型生物学共性有8项：BCYE琼脂上生长；血琼脂上不生长；革兰氏染色阴性；生长需要L-半胱氨酸；硝酸盐还原阴性；脲酶阴性；不发酵糖；过氧化氢酶阳性军团菌的检验程序

采样样品富集样品处理

BCYEα或GVP琼脂平板上两天以后生长的菌落作G染色次日生长的菌落弃去球菌和G+杆菌都不是军团菌G-杆菌

缺半胱氨酸的BCYEα琼脂BCYEα琼脂

生长的不是军团菌不生长生长

极可能是军团菌,应作玻片凝集及全面鉴定

军团菌的检验程序1、采样2、富集：膜过滤法、离心法3、处理：直接涂布、酸处理、热处理4、镜下观察：（菌落形态、革兰氏染色）5、菌落验证6、鉴定显微镜观察菌落生长情况，初步在BCYE琼脂培养基上生长的菌落为毛玻璃样，具有多型性，一般革兰氏染色不易着色的阴性小杆菌。军团菌病的流行病学传染源：被污染的各种水源。传播途径：含军团菌的气溶胶通过空气由人直接吸入肺泡发病，这是传播军团菌病最主要的形式。但只<5um的气溶胶微粒才能进入肺泡引起发病。能产生气溶胶的情况有许多，较重要的是空调冷却塔，已证明这是多次军团菌病爆发流行的污染源。生活饮用供水系统带菌也已证明是许多医源性爆发流行的来源。因军团菌病从人到人的传播从未发生过，故本病无需隔离。军团菌病的流行病学易感人群：一般来说，生活用水中污染了军团菌，对于免疫力正常的健康人，其感染军团菌的危险性是很小的。但如果菌株的毒力增强，或者年老体衰者或有慢性消耗性疾病等抵抗力低下的人，尤其是细胞免疫力低下者（如各种癌症、肾衰、器官移植患者、爱滋病等），即引起发病或流行。

现认为军团病是人畜共患病。

流行季节：夏、秋季（６－１０月）军团菌病的流行病学发病率：WHO估计为12/10万，医源性肺炎占第二位，25%，CAP欧盟资料约10%。

死亡率：未经正确治疗时高达20%。

本病分布于全世界，但流行和散发病例多见于美、欧各国。军团菌病军团菌病，共有2种临床类型a、轻型Pontiacfeverb、重症肺炎型军团病的一般临床症状特征咳嗽90%发热99%呼吸困难50%胸痛35%头痛35%肌肉疼痛35%腹泻35%神经症状35%军团菌病的预防和治疗

特效药：红霉素、利福平、阿奇霉素等脂溶性高的抗生素

只有能穿透细胞膜而达到胞内高浓度的抗生素才有治疗作用。

预防措施唯有加强水源管理，因为没有疫苗，空气传播也难以控制。

化学消毒剂：长期高浓度才有效，但易腐蚀管道，只消毒表面。如二氧化氯等。物理消毒：如紫外照射法，热冲洗法等。生物消毒剂：目前最好方法，其消毒效果好，但费用高。一些国家关于军团军控制值的规定各类标准水中军团菌安全值的规定欧洲E.W.G.L.标准冷却塔系统：军团菌≤1，000cfu/l总菌数≤10000cfu/ml荷兰自来水标准自来水系统：军团菌≤50cfu/l新加坡标准冷却塔、喷泉系统：军团菌≤10，000cfu/l日本厚生劳动省标准温泉水标准：军团菌≤100cfu/l澳大利亚标准冷却塔系统：军团菌≤10，000cfu/l总菌数≤100000cfu/ml中国大陆卫生部标准冷却水、冷凝水：嗜肺军团菌不得检出β-溶血性链球菌定义：经（35~37）℃，（24~48）h培养，在血平板上形成呈灰白色，表面突起直径的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；菌落周围有明显的（2~4）mm界限分明、完全透明的的无色溶血环。镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列。β-溶血性链球菌β-溶血性链球菌属链球菌属，血清型为A、B、C、E、F、G、H、K、L、M、O、P、Q、R、S、T（C多糖体分型），其中对人致病菌约90%属A群。注意与甲型和丙型链球菌的区分。空调送风中的细菌总数定义用仪器法采集集中空调通风系统送风中的细菌，计数在营养琼脂培养基上经35~37℃、48小时培养所形成的菌落数，以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m3)报告。空调送风中的真菌总数定义用撞击式空气采样器法采集室内空气，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃(5~7)天培养所形成的菌落数，换算为每立方米室内空气中真菌总数，以cfu/m3报告。空调风管细菌总数和真菌总数检测原理：通过擦拭法或机器人采样法，采集风管表面单位面积(50cm2)的微生物，得出空调风管细菌总数和真菌总数，以cfu/m2报告空调风管细菌总数和真菌总数检测样品分析1、刮拭法：将采集的积尘样品无菌操作称取1g，加入到0.01%Tween-80水溶液中,做10倍梯级稀释,取适宜稀释液1mL倾注法接种平皿。2、擦拭法：将擦拭物无菌操作加入加入到0.01%Tween-80水溶液中,做10倍梯级稀释,取适宜稀释液1mL倾注法接种平皿。公共场所集中空调通风系统卫生规范