性病实验室规章制度

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篇一：性病实验室操作手册

第一章

淋病的实验

淋病(gonorrhea)是指由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖道的化脓性感染，如尿道炎、宫颈炎和直肠炎等。如不及时治疗，淋球菌可侵入泌尿生殖器的其他部位，引起附睾、前列腺、输卵管及盆腔等器官的炎症，甚至可经血液传播到全身其他部位，形成淋菌性关节炎、腱鞘炎、心内膜炎、脑膜炎等合并症。但另一方面，也有5%-20%的男性和60%的女性病人呈现无症状经过。淋球菌好侵犯人类泌尿生殖道的柱状上皮细胞，凭借特异的结构和粘膜表面与之相匹配的部位粘附。继而侵入细胞内增殖，使粘膜上皮破坏，形成炎症，出现一系列症状。

一、淋病诊断步骤

人类尿道上皮尤其是柱状上皮细胞对淋球菌相当敏感。在感染淋球菌后，经过一段时间的潜伏期(平均3天~5天)。由于细菌和毒素的作用，粘膜坏死、脱落、神经末梢暴露、炎症浸润、组织液渗出，病人会出现尿急、尿痛和尿道流脓等急性尿道炎症状。

淋球菌感染男性病人，常会出现尿痛和尿道流脓等临床症状。这时取尿道分泌物作涂片，经革兰染色后，如见到有符合淋球菌形态特征的革兰阴性细胞内双球菌，则初步诊断阳性，可对病人进行治疗；如涂片查菌阴性，应从尿道取标本进行淋球菌培养。淋球菌感染的女病人，常仅有脓性宫颈分泌物或无症状。对女病人不推荐用涂片法检查，而主张直接从宫颈取材进行培养。标本经培养后，菌落形态典型、氧化酶试验阳性，菌体为革兰阴性双球菌，则初步诊断为阳性培养物，如有某些性状不符合，则可进一步用糖发酵试验及直接免疫荧光法等作鉴定加以确诊。

二、标本的采集和运送

在取材作涂片时，应先用灭菌等渗盐水洗净尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，用棉拭或白金耳蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后作染色。

如由男性病人前尿道取材作培养时，应用白金耳或藻酸钙拭子深入尿道2cm~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女病人的宫颈取材时，应将棉拭插入宫颈口1.5cm，稍转动并停留10s~30s，让棉拭充分吸附分泌物。从肛门取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，从紧靠肛环边的隐窝中取材。检查淋菌性咽炎时从扁桃体或扁桃体窝或咽后壁取材。

淋球菌对外环境因素如干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养成功，应尽量缩短标本离体时间。在医院门诊部，从病人取材后，应立即接种到培养基上进行培养。如取材本处离实验室较远时，可将标本置于无营养性的stuart或Amies运送培养基或选择性生长培养墓如Trmlsgrow中运送到实验室。标本在无营养运送培养中(在室温25℃条件下)，12h对分离率无影响，在24h内分离大于90%。如需时再应使用生长运送培养基，但即便如此，也不应超过2天。

淋病的涂片检查

【原理】

急性淋菌性尿道炎病人常有大量黄色脓性分泌物。在有些脓细胞内可有许多淋球菌。淋球菌革兰染色呈阴性反应，具有特殊的菌体形态。因此，取病人尿道分泌物制成涂片后做革兰染色，检查有无典型细胞内革兰阴性双球菌，可作初步诊断的依据。

【方法】

1．先用灭菌等渗盐水的拭子揩洗尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后加热固定，染色，镜检。常用革兰染色，也可用美蓝染色。

2．涂片后，待自然干燥后火焰固定，

革兰氏染色：结晶紫染色1min。

碘媒染液染色1min。

乙醇丙酮脱色1min左右。

石炭酸复红复染1min。

晾干后油镜镜检。

【结果】

在急性病人的尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞。在有些细胞中吞噬有淋球菌。淋球菌为革兰阴性，呈卵圆形或圆形，常成对排列，接触面扁平或稍凹。菌体长约0.7μm，宽约0.5μm。但两菌大小可有差异。多数多形核细胞中并不含淋菌，但不少脓细胞中常含有一至数对，甚至20对30对淋球菌，淋球菌常存在于细胞浆内。

在病期较长的淋病病人的涂片中淋球菌比较少，有时呈单个、四联和八叠状，位于细胞外。对有些菌有时难以下结论，需进行培养和鉴定。

【注意事项】

1．涂片时不要用力涂擦，而应将棉拭在玻片上轻轻滚动，因急性病人诊断标准为见到“细胞内革兰阴性双球菌”。涂擦过劲，细胞破裂或变形，菌从细胞内逸出，会造成诊断上的混淆。

2．涂片厚薄要合适。涂片过厚，加之染色过程中脱色时间不足，革兰阴性菌也会呈现紫色。因此，脱色时间要视涂片厚薄而定。在大量染片时，最好用一已知的革兰阳性菌(如葡萄球菌)和阴性菌(如大肠杆菌)作对照。

3．固定涂片，只要将涂片迅速通过火焰2~3次，避免加热过度使细胞变形扭曲。当把加热的涂片放到手背上时应不感到太烫。

4．不推荐用涂片检查来诊断淋菌性直肠和咽部的感染，也不推荐用作判愈。

【临床意义】

涂片检查方法简便、有效、价格低廉且有一定的敏感性和特异性。但其特异性随着取材部位的不同而有所不同。例如，从男性尿道取材特异性高，而从女性宫颈取材特异性低。因女性宫颈分泌物中杂菌很多，有的在形态上很像淋球菌。因此，世界卫生组织不推荐用涂片法来检查女性病人。

淋球菌的分离培养

【原理】

如果标本中有淋球菌，则在合适的培养基上经培养后可长成菌落。各种细菌在培养基上生长成的菌落形态各不相同。根据菌落的大小、表面高起或扁平、光泽、色素和边缘的情况等，作为细菌鉴定的标准。

【方法】

1．取材

培养要获得成功，取材的部位和方法要准确。由男性病人前尿道取材时，应该用细小棉拭子或藻酸钙拭子或白金耳伸入尿道口2cm~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女病人的宫颈取材时，应先用温水湿润扩阴器(不要用液体石蜡等润滑油)。应将棉拭插入宫颈口1.5cm处，稍转动并停留10s~30s，让棉拭充分吸附分泌物。从直肠取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，如果棉拭碰到粪便，应换一个棉拭重取。检查淋菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。为了提高阳性率，可同时取二份标本进行培养。

2．培养基

由于淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。为抑制杂菌，在培养基中可加入少量抗菌物质如多粘菌素b(25μg/ml)和万古霉素(3.3μg/ml)等。所用血液如羊血、兔血和人血均可，浓度为8%~10%。但避免血液中加入抗凝剂等药物。培养基的ph值以7.4为好。目前国外常用的培养基有Thayer-martin(T-m)培养基、newYorkcity(nYc)培养基和martin-Lewis(mL)培养基等。T-m培养基是在gc基础培养基中，加入血红蛋白(1%)、抗生素(万古霉素3μg/ml、粘菌素

7.5μg/ml和制霉菌素12.5μg/ml)和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。

3．培养条件

淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。取材处离实验室距离较远时，应将标本接种于smart或Amies运送培养基或1%葡萄糖肉浸液中，并注意在运送过程中保温。接种的血平皿应先放在37℃温箱中预温。培养的最适温度为35℃~36℃，超过38.5℃或低于30℃便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。为保持一定的湿度，可在培养缸中放些浸水棉球。

【结果】

淋球菌在血平皿上经24h~48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落。边缘呈花瓣状，直径为0.5mm~1.0mm。用白金耳触之有粘性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出现皱缩。若从菌落上取材作涂片，可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，约有25%的菌为典型的双球菌，其他75%为单球菌、四联形或八叠形。

淋球菌在液体培养基中生长于液体表面，或稍有轻度混浊和颗粒沉淀。

【注意事项】

1．培养要获得成功，取材是关键之一。取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。男性尿道前端包括舟状窝都为复层鳞状上皮覆盖，所以要深人到尿道内2cm~4cm处，并蘸取少量粘膜，阳性率才高。女性病人取材时，要求将棉拭插入宫颈管，转动并停留10s~30s也是这个道理。有些人只在阴道口取少量分泌物作分离培养，阳性率当然会降低，因为有生活力的菌从宫颈随分泌物由阴道流出需一定时间，阴道内ph值低，又因各种杂菌的作用，到阴道口时淋菌的生活力较低，再加(:性病实验室规章制度)上培养过程中各种因素的影响，培养成功的机会就会减少。

2．对症状不典型的男病人取材，最好是在晨起排尿前或排尿后2~3h之后。另外，

篇二：性病实验室sop

东莞市高埗医院作业指导书第1页共1页

第1版第0次修改主题：性病实验室质量控制制度颁布日期：20XX年11月

性病实验室质量控制制度

1目的

规范性病实验室质量控制制度，保证实验室安全、顺利进行。

2适用范围

适用于性病实验室试剂、仪器、操作过程的质量控制。3职责

检验科性病实验室技术人员负责实验室质量控制与记录。

4性病实验室质量控制制度

4.1对实验室仪器：水浴箱，冰箱，高压锅，显微镜进行功能监测。

4.2做好对培养基的配制，外观检查，灭菌试验，培养基的功能检测及保存工作。4.3做好染色液，血清学诊断试剂的质量控制。

4.4做好标本的管理，检测的记录，结果的存档，报告的完整性的质量工作。4.5每批检测阴阳性对照与标本一起检测。

4.6若有超控现象一定要做失控分析，处理意见。4.7并做好质控原始记录。

东莞市高埗医院作业指导书第1页共2页

第1版第0次修改主题：LDZ5-2离心机颁布日期：20XX年11月

LDZ5-2离心机

1目的

规范LDZ5-2离心机的正确操作。

2适用范围

适用于检验科人员对LDZ5-2离心机的使用。

3职责

检验科性病实验室技术人员负责LDZ5-2离心机的维护与保养。

4工作原理

根据离心力的作用原理，密度大的成份向下沉，以至液体成份与固体成份达到分离的目的。

5使用方法

5.1三眼安全插座，使用前应接地线。工作时应放置在平整而坚实的台面上。5.2电源开关，指示灯亮，电源即接通。

5.3打开盖板，选择合适的离心护管将试管小心放置在护管内。5.4合上盖板。

5.5先调节转速开关至所需转速，后调定时器至所需时间。5.6开启启动开关离心机开始工作。

5.7工作一这定时间后，离心机自动停止工作，盘停止旋转之后，方可打开盖板，取出试管。5.8本机使用完毕后，须关闭电源开关，熄灭指示灯。将本机放于干燥，通风处，并保持其清洁。

6注意事项

6.1对称的离心护管内要放同样重量有试管，以免重量偏太大而产生严重晃动。6.2一定要等到转盘完全停止转动，才能打开盖板。

7相关性文件

《LDZ5-2离心机使用说明书》

东莞市高埗医院作业指导书第1页共1页

第1版第0次修改主题：pYx—Dhs-4000恒温培养箱颁布日期：20XX年11月

pYx—Dhs-4000隔水式恒温培养箱

1目的

规范pYx—Dhs-4000隔水式恒温培养箱的操作。

2适用范围

适用于检验科人员对pYx—Dhs-4000隔水式恒温培养箱的使用。

3职责

检验科性病实验室技术人员负责pYx—Dhs-4000隔水式恒温培养箱的维护与保养。

4操作方法

4.1在恒温培养箱后面右侧孔加水至左侧浮起止水标志。

4.2把电源开关拨至“开”处，此时电源指示灯亮，调节温度，直到温度在35℃，批示灯灭，控制进入恒温状态。可以使用。

5注意事项

5.1每次注水要用蒸馏水。

5.2每日保持箱内的干净，做好箱面的清洁工作。5.3培养箱外壳必须有效接地，以保证使用安全。5.4水位降低应及时加水。

5.5箱内物品切勿过挤，必须留出空间。

5.6开门操作完成后要及时关上门，保证箱内温度流失。

6相关性文件

《pYx—Dhs-4000隔水式恒温培养箱使用说明书》

东莞市高埗医院作业指导书第1页共1页

第1版第0次修改主题：TL-2000c型自动旋转振荡仪颁布日期：20XX年11月

TL-2000c型自动旋转振荡仪

1目的

规范TL-2000c型自动旋转振荡仪的操作。

2适用范围

适用于检验科人员对TL-2000c型自动旋转振荡仪的使用。

3职责

检验科性病实验室技术人员负责TL-2000c型自动旋转振荡仪的维护与保养。

4工作原理

利用稳定的旋转速度，使试剂与标本得到充分的混合作用。

5操作步骤

5.1打开后面电源开关；5.2选择“V1”或“V2”，V1：慢速，V2：快速；5.3放好需旋转混合的标本混合液在旋转盘上；5.4调节定时器到所需时间；

5.5调节所需的旋转速度；

5.6旋转时间到终点，仪器会自动停止；5.7及时观察结果。

6注意事项