TNAIA 0254-2023 牛羊巴氏杆菌病分型诊断与防控技术规程

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T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0254-2023牛羊巴氏杆菌病分型诊断与防控技术规程TechnicalspecificationfortypingdiagnosisandcontrolofPasteurellosismultocidaincattleandsheep2023-12-18发布 2023-12-31实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0254-2023T/NAIA0254-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏农林科学院动物科学研究所、宁夏大学、宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、宁夏回族自治区兽药饲料监察所、平罗县高庄畜牧兽医工作站、宁夏农业学校。本文件主要起草人：郭亚男、王建东、王秀琴、纪鹏、刘凡、王琨、王世博、费媛媛、赵娜、李知新、梁小军、李昕、谢建亮、杨萌萌、闫背背、曹晓真、王小龙。本文件为首次发布。牛羊巴氏杆菌病分型诊断与防控技术规程范围本文件规定了牛场和羊场巴氏杆菌病分型诊断与防控措施的术语和定义、流行病学、病理变化、分型诊断的技术规程。本文件适用于牛羊巴氏杆菌病分型检测和防控。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程GB18596畜禽养殖业污染物排放标准NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T5030无公害农产品兽药使用准则术语和定义下列术语和定义适用于本文件。多杀性巴氏杆菌Pasteurellamultocida,P.multocida是指主要存在于动物口腔、鼻咽和上呼吸道，可引起多种家畜、野生动物及人类的感染的一种重要的人畜共患疾病病原体。诊断流行病学临床症状急性呼吸道疾病，伴有高热、流鼻涕、大量流涎，随后迅速出现呼吸窘迫、脓毒性休克，伴有爛 爛100%。病理变化样品采集及病原分离样品采集及运输按照NY/T541规定执行。将采样物接种于5%脱纤维羊血固体培养基的样品在37℃恒温培养箱中培养24h珠状小菌落，无溶血现象。菌落形态参见A.1。革兰氏染色呈阴性、短小杆菌或球杆菌。巴氏杆菌分型巴氏杆菌不同分型的基因序列见附录B.1。PCR反应体系为20µL体系，反应体系见附录B.2。PCR反应程序：95℃5min；95℃10s；59℃30s收集荧光信号，39Cycles。结果判定符合5.1、5.2的特征判断为疑似病例。符合5.4、5.6和5.7的特征判断为确诊病例。4.5中出现hyaC-hyaD扩增带的为A型巴氏杆菌，bcbD扩增带为B型巴氏杆菌，Cpa和Cpb扩增带的为C型巴氏杆菌；dcbF扩增带的为D型巴氏杆菌，ecbJ扩增带的为E型巴氏杆菌，fcbD扩增带的为F型巴氏杆菌。防控技术疫苗免疫100kg62mL196个月免疫一次。药物治疗NY/T5030规定。无害化处理废弃物按GB18596的规定进行处理。病死动物按GB16548的要求进行无害化处理。爛 爛附录A（规范性）巴氏杆菌菌落形态A.1巴氏杆菌菌落形态附录B（规范性）序列与反应体系分型基因特异性引物和探针序列列表表1分型不同基因特异性引物和探针序列列表目的基因引物名称引物序列片段长度（5′→3′）（bp）hyaC-hyaD-FGGGCATCACAAGGTATGTTTATGhyaC-hyaDhyaC-hyaD-RTCAATTGACTGGCAGGATGT99hyaC-hyaD-PTAATCGTCAGAAGCTCATGCGCTAGCbcbD-FCTGAGTGTGGATGCGTTACTbcbDbcbD-RGGCAGCTGCAACATTCTTC114bcbD-PATAACGACTCTGCTGGTTTACCGTGGdcbF-FGGTATCCTGCTGACTACATAAAdcbFdcbF-RCTTGTTGACTCTACTTGGGAATA107dcbF-PAGCAGCAATTGGATTACATGGTGTTecbJ-FGCTATGCCAATGGTAGCTTATecbJecbJ-RTCAGCTTTGCCAACCATATC121ecbJ-PACAACTATTTAGCGGATATGGCTCTGCCfcbD-FGGGTACGCATCATGTCTAAAfcbDfcbD-RCTGCATCAGGCTCAAGATAA123fcbD-PTGGCGGAATAGCCTCAGCATCAAATGPCR反应体系五重qPCR反应体系为20μL：Taq-HSProbeqPCRPremix10μL，hyaC-hyaD、fcbD上下游引物（10µmol/L）各0.4µL，bcbD、dcbF、ecbJ上下游引物（10µmol/