TGDPPS 007-2023 水稻稻曲病菌分离鉴定与稻曲病抗性鉴定技术规范

ICS65.020.20CCSB15团 体 标 准T/GDPPS007—2023水稻稻曲病菌分离鉴定与稻曲病抗性鉴定技术规范TechnicalspecificationforisolationUstilaginoideavirensandevaluationofresistanceagainstricefalsesmut2023-12-22发布 2023-12-22实施广东省植物保护学会  发布T/GDPPS007T/GDPPS007—2023前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省植物保护学会提出并归口。本文件起草单位：广东省农业科学院植物保护研究所。I水稻稻曲病菌分离鉴定与稻曲病抗性鉴定技术规范范围（系（系等材料对稻曲病抗性的室内鉴定和抗性评价。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。NY/T3625 稻曲病抗性鉴定技术规程DB35/T1575 水稻稻曲病菌分离鉴定技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。ricefalsesmut由病原真菌无性态为稻绿核菌Ustilaginoideavirens(Cooke)Takahashi，有性态为绿糙棒菌Villosiclavavirens]所引起的一种水稻穗部病害。该病菌主要为害谷粒，且在水稻灌浆乳熟期表现症状。3～4isolate从发病部位分离获得，并经过科赫氏法则验证的纯培养物。inoculum用于人工接种水稻的病菌孢子悬浮液。试验品种（系）testingvariety（line）抗病性鉴定参试的水稻品种（系）。susceptiblecontrolvariety抗病性鉴定时选定的当地相应熟期的感病品种。resistanceidentification1稻曲病菌分离鉴定标样的采集与保存培养基SA200g1000mL水煮沸20mn，1000mL20g20g，搅拌均匀，121℃20min。（PSB）200g1000mL20min，1000mL20g，搅拌均匀，121℃20min。水琼脂培养基（WA）20g1000mL，121℃20min。病原菌分离培养以常规组织分离法从稻曲球上分离病原物。在超净工作台上切除稻曲球外层组织，将最内层的0.2cm0.3cm75%153PSA28℃培养。7dPSA培养基上。10d～15d后菌落mL1×104个100μLWA28℃培养至分生孢子萌发。病原菌鉴定病原菌形态学鉴定选取质地致密、直径2mm～3mm的黄色或白色小菌落，用灭菌接种针从菌落边缘挑取菌丝块，在光学显微镜下镜检观察厚垣孢子和分生孢子的形态。病原菌分子鉴定按照DB35/T1575中4的规定。病原菌中长期保存PSA28℃恒温培养10d后，保存于4℃冰箱中，保存备用。PSA保存。稻曲病抗性评价2接种体繁殖与准备5mm3块，接100mLPSB28℃150rpm/min5d～7dPSBmL5×105个分生孢子，作为接种体。接种用分离物应采用当地致病力较强、致病性较稳定的优势菌株。抗病性鉴定鉴定材料的种植与管理3%1d40粒～506片～7101棵～216.6cm20.0cm3次51行感病对照品种。3cm～5cm175kg/hm2。参试材料在全生育期内不使用杀菌剂，1次井冈霉素。接种时期水稻破口前5d～8d（约幼穗分化第Ⅶ期）。避开高温时段，16：00～18：00进行接种为宜。接种方法接种期管理90%。13h124h142次。若条件允许，宜安装小型气象自动记录仪。调查时间水稻腊熟期至黄熟期。调查方法与病情记载对参试材料进行调查，每个重复连续调查10穴，每穴调查最严重的稻穗，记录1个数据，共调查1次。原始数据记载采用附录表A.1。抗病性评价3评价标准稻曲病病情分级标准描述见表1。表1 稻曲病病情级别分级标准病情级别稻曲球数（个/穗）00113253～576～99≥10病情指数计算计算各参试材料相应的病情指数（DI）。计算公式见式（1）：式中：DI-病情指数；Bi-各级病情级别病穗数；Bd-各级病情级别代表值；M-调查总穗数；

DI=ΣM×Md

×100···················································(1)Md-病情级别最高级代表值（即9）。评价结果据参试材料3次重复的病情指数（DI）的平均值评价其抗病性水平。参NY/T3625，评价标准见表2。表2 稻曲病抗性评价标准病情指数（DI）抗性水平0.0～5.0高抗5.1～10.0抗10.1～20.0中抗20.1～40.0中感40.1～60.0感60.1～100.0高感鉴定有效性判别当设置的感病对照品种病情指数（DI）大于40时（即感至高感），该批次稻曲病抗性鉴定视为有效。评价报告格式抗性评价结果记载参附录表格A.2，保存原始记录资料。4试验后材料的处理接种后剩余的接种体应作灭菌处理。调查后的稻株应进行无害化处理。5附 录 A（资料性附录）稻曲病抗性评价记载表表A.1稻曲病抗性鉴定调查记载表编号品种名称稻曲球数（个/穗）水稻穴号12345678910重复I重复II重复III重复I重复II重复III注1：播种日期：注2：接种菌株编号：注3：注4：调查人：；接种