新教材2023版高中生物第1章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用第1课时微生物的基本培养技术课件新人教版选择性必修3

第1课时微生物的基本培养技术课前自主预习案课堂互动探究案课前自主预习案知识梳理·填准记牢——自主·预习·先知一、培养基的配制1．培养基人们按照微生物对_________的不同需求，配制出供其__________的营养基质。2．培养基的种类营养物质生长繁殖凝固剂琼脂3．培养基的营养组成各种培养基一般都含有________、________、________和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对________、特殊营养物质以及________的需求。水碳源氮源pHO2二、无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止_________。2．消毒和灭菌

消毒灭菌概念使用较为________的物理、化学或生物等方法杀死物体________或内部一部分微生物使用________的理化方法杀死物体内外________的微生物，包括____________常用方法________消毒法、巴氏消毒法、________消毒法、紫外线消毒法________灭菌、干热灭菌、________灭菌适用对象操作空间、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等杂菌污染温和表面强烈所有芽孢和孢子煮沸化学药物湿热灼烧3.具体操作(1)对实验操作的________、操作者的衣着和手进行清洁和________。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行________。(3)要注意避免已经灭菌处理的材料用具与____________接触。(4)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____________附近进行。空间消毒灭菌周围的物品酒精灯火焰三、微生物的纯培养1．纯培养：在微生物学中，将接种于________内，在合适条件下形成的含______________的群体称为培养物。由____________所获得的微生物群体称为纯培养物，获得_________的过程就是纯培养。2．微生物纯培养的步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、________、________、分离和培养等步骤。培养基特定种类微生物单一个体繁殖纯培养物灭菌接种3．酵母菌的纯培养(1)菌落：分散的微生物在适宜的__________表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的____________。(2)获得单菌落的方法：____________法和________________法。固体培养基子细胞群体平板划线稀释涂布平板(3)酵母菌的纯培养步骤葡萄糖琼脂湿热干热50酒精灯火焰接种环稀释分散一个未接种倒置恒温培养箱知识应用·强化落实——效果·检测·定向判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．液体培养基含有水，而固体培养基不含水。(

)2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。(

)3．用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行消毒。(

)×

提示：液体培养基和固体培养基都含有水，它们的区别为是否含有凝固剂。√×

提示：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行灭菌。4．培养基分装到培养皿后进行灭菌。(

)5．平板冷凝后应将平板倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。(

)6．转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。(

)×

提示：培养基分装到培养皿之前要进行灭菌。√√课堂互动探究案课程标准1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。2．阐明无菌技术是在操作过程中保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。3．概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。素养达成1.根据微生物的代谢类型分析培养基的组成。(科学思维)2．讨论并掌握无菌技术的实验操作方法；讨论并掌握微生物的纯培养的方法。(科学探究)设疑激趣同学们，右图中正在进行科学研究的老人是谁？他是法国微生物学家和化学家巴斯德！19世纪中期的法国，葡萄酒酿成后的变酸问题，一直困扰着酿酒业主。巴斯德研究证明，酒质变酸是发酵液体中的细菌在捣鬼。他经过一次又一次试验，最终发现把葡萄酒加温到55摄氏度，既消灭了细菌，又保持了酒的美味不变，一个困扰酿酒业的难题终于解决了。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保其他微生物无法混入。本节课我们将通过酵母菌的纯培养实验，学习微生物培养的基本技术。夯基提能·分层突破——互动·探究·智涂学习主题一培养基的配制活动1下表是培养两种细菌的培养基的配方，据此回答问题。表一培养基A表二培养基B(牛肉膏蛋白胨固体培养基)成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂含量/g1.42.10.210.01.015.0将上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL成分牛肉膏蛋白胨NaCl含量/g5.010.05.0将上述物质溶解后，添加蒸馏水，定容至1000mL，调节pH为7.0～7.2，并加入15～20g琼脂1.表一中的碳源是________，氮源是________。表二中的氮源是_______________，琼脂________(填“提供”或“不提供”)营养成分，其作用是作为________。

2．由上表可以看出，虽然培养不同微生物的具体配方不同，但一般都要有________、________、________、________这四类物质。

3．不同培养基还要满足不同微生物生长对________、______________以及________的要求。

4．牛肉膏蛋白胨培养基是一种常见的细菌培养基，其中牛肉膏、蛋白胨能够提供哪些营养成分？葡萄糖尿素牛肉膏、蛋白胨不提供凝固剂水碳源氮源无机盐pH特殊营养物质O2提示：牛肉膏、蛋白胨能够提供碳源、氮源、维生素(生长因子)和无机盐。活动2阅读教材P9－10，思考回答下列问题：1．能够利用无机碳源的微生物的同化作用类型是什么？

2．为什么各种培养基的具体配方不同，但一般都有水、无机盐、碳源和氮源？提示：能利用无机碳源的微生物的同化作用类型是自养型。提示：培养的微生物不同，对营养物质的需求不同，营养基质的具体配方就不同。而水、碳源、氮源、无机盐是微生物生命活动的主要营养物质，因此培养基中一般都有。[易错提醒]有关培养基营养物质的四点提醒(1)培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。①自养型微生物的培养基中可不添加有机碳源，因其可利用CO2等无机碳源。②异养型微生物的培养基中必须添加有机碳源。(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源、能源。(3)微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成生长因子所需要的酶或合成能力有限。(4)微生物需要量最大的营养物质是碳源。能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。1.培养基的配制原则(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。(3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用K2HPO4－KH2PO4。2．培养基的成分及功能营养物质作用功能主要来源碳源能为微生物的代谢提供碳元素构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等氮源能为微生物的代谢提供氮元素合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水是生命活动所必需的不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分；生理调节物质；某些化能自养菌的能源；酶的激活剂无机化合物3.几种微生物的营养和能量来源

4.培养基的类型分类标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基加凝固剂，如琼脂微生物的分离与鉴定、活菌计数、保藏菌种半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定液体培养基不加凝固剂工业生产化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类、鉴定1．(学业水平一、二)下列关于微生物营养物的叙述中，正确的是(

)A.凡是碳源都能提供能量B.碳源物质不可能同时是氮源C.无机氮源也能提供能量D.除水以外的无机物只提供无机盐答案：C解析：无机物碳源不提供能量，A错误；同一种物质可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，B错误；自然界中一些微生物如硝化细菌，可以以无机氮源合成细胞物质，同时通过氧化外界无机氮源获得生长所需能量，叫做化能合成作用，C正确；无机物也可提供碳源和氮源，如碳酸盐和硝酸盐，D错误。2．(学业水平一、二)关于培养基的配制，说法不正确的是(

)A.配制培养基时要注意各种营养物质的浓度和比例B.合适的培养基可实现分离、鉴定微生物等不同目的C.不同微生物培养基的pH相同，都在7.0左右D.不同培养基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和无机盐答案：C解析：配制培养基时，营养要协调，注意各种营养物质的浓度及比例，A正确；培养基通过调整各种营养物质的组成等可实现分离、鉴定微生物等不同目的，B正确；不同微生物生长所需要的最适pH不同，如细菌为7.0～8.0，酵母菌为3.8～6.0，C错误；虽然各种培养基的配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，D正确。3．(学业水平三)有关培养基配制原则的表述正确的是(

)A.任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水以及无机盐B.碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C.有的培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求D.营养物质的浓度越高越好答案：C解析：培养基一般都含有碳源、氮源、无机盐和水等营养物质，而分离自生固氮菌的培养基中，不需要加入氮源，A错误；碳源和氮源必须具有一定比例，但碳元素的含量不一定最多，如自养型微生物的培养基不需要加入碳源，B错误；营养物质的浓度过高可能会造成微生物渗透失水死亡，D错误。4．(学业水平三，不定项选择)下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是(

)A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至50℃左右时倒平板D.待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置答案：BCD解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却至50℃左右，开始倒平板，C正确；培养基冷却凝固后需将平板倒置，D正确。学习主题二无菌技术活动1阅读教材P10内容，思考回答下列问题：1．无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

2．用于生物消毒的微生物具有什么特点？提示：无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。提示：用于生物消毒的微生物能产生杀死其他微生物的代谢产物或是寄生性的微生物。活动2阅读教材P10－11内容，思考回答下列问题：1．消毒和灭菌的原理是什么？

2．消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？

3．消毒和灭菌是否适用于所有的生物和物品？

提示：都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。提示：灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。提示：不是，无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力。例如，活体生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能灭菌。4．选择以下材料或用具所需的无菌技术。①吸管②培养细菌用的培养基③培养皿④实验操作者的双手⑤烧瓶⑥接种针⑦试管⑧接种环⑨玻璃棒消毒：______________________________________________灼烧灭菌：__________________________________________干热灭菌：__________________________________________湿热灭菌：__________________________________________④⑥⑧①③⑤⑦⑨②

5.注射药液前，常用酒精擦拭注射部位，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？提示：酒精擦拭属于消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。[名师提醒]有关消毒和灭菌的几点提醒1．酒精消毒液中酒精浓度对杀菌效果的影响：70%的酒精杀菌效果最好。原因是浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。2．无菌技术措施的选择原则。(1)考虑效果：灭菌的效果比消毒要好。(2)考虑操作对象的承受能力：接种环或接种针等金属用具一般用灼烧灭菌；培养皿等玻璃器皿用干热灭菌；培养基用湿热灭菌。操作者双手一般用酒精擦拭，即化学消毒。牛奶用巴氏消毒法。1.无菌技术的重要性防止杂菌污染是获得纯净培养物的关键。防止外来杂菌污染培养物，离不开无菌技术；要防止培养物污染人体和环境，也离不开无菌技术。2．常用灭菌与消毒方法的比较灭菌和消毒的种类主要方法应用范围灭菌湿热灭菌100kPa、121℃维持15～30min培养基及多种器材、物品干热灭菌干热灭菌箱160～170℃加热1～2h玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧微生物接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中的试管口或瓶口等消毒煮沸消毒法100℃煮沸5～6min家庭餐具等生活用品巴氏消毒法63～65℃消毒30min或72～76℃处理15s或80～85℃处理10～15s牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体紫外线消毒30W紫外灯照射30min接种室空气化学药物消毒用体积分数为70%～75%的乙醇、碘酒涂抹，来苏尔喷洒等皮肤、伤口、动植物组织表面和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等1．(学业水平一、二)获得纯净培养物的关键是(

)A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵答案：D解析：将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌只是无菌技术的一个方面，不是无菌技术的全部；接种纯种细菌是获得纯净培养物的前提；适宜条件下培养只能提供微生物生长的条件，不能防止杂菌污染；防止外来杂菌的入侵是获得纯净培养物的关键。2．(学业水平一、二)高温灭菌的原理是(

)A．每种微生物生长的最适温度是一定的B．微生物对于高温环境不适应C．高温破坏了微生物的蛋白质等生物大分子，影响其生命活动D．高温降低了环境中氧的浓度答案：C解析：高温灭菌主要是使微生物的蛋白质等生物大分子发生不可逆转的变性。3．(学业水平三)关于灭菌和消毒的不正确的理解是(

)A．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.消毒和灭菌实质上是相同的C．接种环用灼烧的方法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌等答案：B解析：消毒是指用温和的理化方法杀死体表或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是用强烈的理化因素杀死体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。4．(学业水平三，不定项选择)微生物的实验室培养要进行严格灭菌和消毒。下列关于灭菌和消毒的叙述，正确的是(

)A．灭菌和消毒均可以杀死环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子B．无菌操作时，对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌C．灼烧法灭菌的对象是金属器具，也可以是玻璃器具D．消毒和灭菌的原理都是使微生物的核酸或蛋白质变性答案：CD解析：灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，消毒只能杀死物体表面或内部的部分微生物，不能杀死芽孢和孢子，A错误；无菌操作时，对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行消毒，B错误；灼烧法灭菌的对象可以是金属器具和玻璃器具，C正确；消毒和灭菌的原理相同，都是使微生物的核酸或蛋白质变性，D正确。学习主题三微生物的纯培养活动1阅读教材P11～13内容，结合下图，回答问题。1．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

2．从防止杂菌污染的角度思考，培养基冷却凝固后将培养皿倒置的原因是什么？

提示：对瓶口进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。提示：培养基冷却凝固后，培养皿的皿盖上会凝结水珠，将培养皿倒置，可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。3．采用平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？

4．在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

提示：(1)接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。(2)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰。(3)划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内，划线后及时盖上皿盖。(4)每次划线结束后，灼烧接种环，冷却后再进行下一次划线。(5)整个接种过程要在酒精灯火焰旁进行。提示：划线末端含有的菌体数目较少，每次从上一次划线的末端开始划线能够使菌体的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的菌体。5．接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？

提示：划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。活动2思考回答下列问题：1．培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

2．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。提示：不能用这个平板培养微生物。因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生而导致污染。3．接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养？未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落生长，说明了什么？提示：作对照培养基被杂菌污染[方法技巧]单细胞菌落的获得(1)利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取。(2)利用稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。

[归纳提升]倒平板操作的注意事项(1)培养基灭菌后需要冷却至50℃左右时才能倒平板。温度过高，培养基凝固后皿盖上冷凝水过多，落入培养基，造成污染；温度过低，培养基又会凝固。(2)将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。(3)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板应弃用，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。(4)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。1.平板划线法平板划线操作及培养结果：接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。平板划线示意图(A)及培养后菌落分布示意图(B)如下图所示。2．稀释涂布平板法(1)主要操作环节：系列稀释和涂布平板。(2)系列稀释和涂布平板后培养结果如图所示：3．平板划线法与稀释涂布平板法的注意事项(1)平板划线法：①接种环的灼烧：a．第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物。b．每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端。c．划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。②灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基。(2)稀释涂布平板法：①稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。②涂布平板时：a．涂布器浸在体积分数为70%的酒精中，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b．不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。c．酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不接触任何物体。4．两种纯化细菌方法的比较项目优点缺点平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延1．(学业水平一、二)如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1→2→3→4→5，下列说法不正确的是(

)A．操作前要将接种环在酒精灯火焰上灼烧B．划线操作须在酒精灯火焰附近进行C．只有在5区才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌答案：C解析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法是在酒精灯火焰上灼烧；接种时划线操作是在酒精灯火焰附近进行；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落；每次划线前都要灼烧接种环，目的是杀死接种环上原有的微生物(第一次划线前)和上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，划线结束后灼烧接种环以防止污染环境和感染操作者。2．(学业水平二)某同学运用划线法纯化酵母菌。下列叙述正确的是(

)A．灭菌时，高压蒸汽灭菌锅压力达到1kg/cm2后，需持续15minB．制平板时，需将培养基均匀地倒在培养皿的整个底部C．接种时，每次划线前，接种环均需蘸一次菌液D．培养时，需将培养皿倒置于4℃的冰箱中答案：A解析：灭菌时，高压蒸汽灭菌锅压力达到1kg/cm2后，需持续15min，A正确；制平板时，将培养基倒在培养皿中，并轻轻摇匀即可，B错误；接种时，每次划线前，接种环均需灼烧灭菌，C错误；培养时，需将培养皿倒置于恒温培养箱中，D错误。3．(学业水平三、四)下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(

)A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养答案：B解析：由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，B错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，可以避免培养基中的水分过快地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。4．(学业水平三、四，不定项选择)将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常保存西瓜的办法。有这样一种说法：盖上保鲜膜保存的西瓜中细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组针对上述说法进行探究，他们用盖上保鲜膜保存了两天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。下列说法正确的是(

)A．应该采用稀释涂布平板法进行接种B．瓜瓤浸出液是液体，因此培养时平板不用倒置C．仅需要设置盛有培养基的空白平板作对照D．可通过平板上菌落的特征初步判断细菌的种类答案：AD解析：为了达到研究细菌的种类和数量，需要采用稀释涂布平板法进行接种才能计数，A正确；接种时需要将瓜瓤浸出液接种在固体培养基上，培养时平板需要倒置，这样可以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染，还可防止培养基表面的水分挥发，B错误；该实验是比较两种不同处理方式下西瓜上菌体的种类和数量，所以除需要设置盛有培养基的空白平板作对照，还需要设置不盖保鲜膜同样条件保存两天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液后接种的平板做对照，C错误；不同菌体的菌落特征不同，所以可通过平板上菌落的特征初步判断细菌的种类，D正确。强化落实·学业达标——归纳·提升·素养网络建构主干落实1.各种培养基都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。3．消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。4．灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。5．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。6．菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。高效课堂·实践运用——随堂·巩固·达标1.不同培养基的具体配方不同，但一般都含(

)A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素答案：C解析：培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。2．采用干热灭菌、灼烧灭菌、湿热灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌(

)A．接种环、吸管、培养基、接种室B．吸管、接种环、培养基、接种箱C．培养基、吸管、接种环、接种箱D．培养皿、吸管、培养基、双手答案：B解析：干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃下加热2～3h，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；湿热灭菌是用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，维持15～30min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，使用前用紫外线照射约30min。3．下列有关平板划线操作的描述，错误的是(

)A．将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红B．接种环在平板上划线的位置是随机的C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰D．最后一区的划线不能与第一区相连答案：B解析：接种环在平板上划线的位置并不是随机的：将蘸有菌种的接种环伸入平板内，划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。4．下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是(

)A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养基被污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基答案：A解析：接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A错误；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C正确；分离菌种可以用平板划线法或稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D正确。5．广泛用于牛奶、奶酪、啤酒等产品的消毒方法是(

)A．湿热灭菌

B．巴氏消毒法C．酒精消毒

D．火焰灼烧答案：B解析：湿热灭菌不属于消毒，A错误；对牛奶、啤酒等进行消毒宜采用巴氏消毒法，原理是高温灭菌，既能达到消毒的目的，又不会过多的破坏营养物质，B正确；牛奶、奶酪、啤酒等产品如果采用酒精消毒，达不到消毒的目的，并且会导致酒精残留，C错误；火焰灼烧属于灭菌，不属于消毒，D错误。6．下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是______________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。组分牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5g10g5g20g1000mL氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌温度酸碱度解析：(1)培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。(2)配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和________；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质________，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________和_____