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文档简介

第八章免疫应答细胞凋亡与免疫主要内容：

1、细胞凋亡的概念与特征

2、细胞凋亡的检测

3、细胞凋亡与免疫

细胞凋亡即细胞程序性死亡（programmedcelldeath，PCD)。PCD与细胞凋亡是同义语，它是一个主动的过程，是多细胞生物生长发育、协调体内环境，及完成某种生理功能的需要，凋亡和生长两者是辩证统一的。细胞凋亡(apoptosis)细胞凋亡的特征细胞凋亡的检测

应用多种方法如形态学、生物化学和分子生物学方法、免疫学方法都可以将凋亡的细胞与活细胞及坏死的细胞区分开来，部分方法可以对调亡细胞进行定量分析。1、细胞凋亡的形态学检测方法

普通光学显微镜观察法：用染料拒染试验，如台盼蓝可使死细胞着色，活细胞不着色，观察细胞大小、形态、细胞器、凋亡小体及核染色质结构等。

流式细胞术：PI可以使死细胞染色，但不染活细胞和凋亡细胞，并能在紫外光下发出红色荧光。而二乙基荧光素和Ho，则可以被活细胞及凋亡的细胞吸收，水解后二乙基荧光素在紫外光下发出绿荧光，Ho发出蓝色荧光，流式细胞仪分析，可以将PI和Ho染色分开，从而分析凋亡细胞和坏死细胞。2、细胞凋亡的生物化学检测方法

DNA梯度片段法：由于凋亡时染色质发生浓缩，染色质DNA在核小体单位之间连接处被核酸内切酶切断，形成相差180-200bp长度左右的DNA梯度片段，用琼脂糖电泳，再用溴化乙啶染色后，在紫外光下可以观察到典型DNA梯度片段。

放射法：先以3H一TdR在细胞培养时掺入标记DNA，再将细胞处理，用离心法将大分子DNA和小分子DNA分开，分别测放射活性，计算凋亡细胞百分率。

ELlSA法：先将抗组蛋白抗体包被(吸附于)酶标测定板，然后加入待检细胞裂解物的上清液，让核小体与抗组蛋白抗体结合，洗去末结合的各种分子，最后加入酶交联标记的抗DNA抗体(通常用过氧化物酶标记)，此抗体与核小体上DNA结合，再加入过氧化物酶的底物如二氨基联苯(DAB)，过氧化物酶可以催化其脱氢氧化并显示棕色，用酶标仪检测。3、细胞凋亡的免疫学检测方法

对细胞凋亡的检测方法还有许多，但基本原理主要有以下凡方面:1）形态学改变;2）细胞通透性改变，如细胞内标记分子的释放，染料的排阻试验等;3）DNA梯度降解分析;4）细胞凋亡相关的膜表面分子的检测等。4、细胞凋亡的其他测方法

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