NY-T 4360-2023 饲料中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.120ICS65.120CCSB46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T4360—2023饲料中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的测定 液相色谱-串联质谱法Determinationofstreptomycin,dihydrostreptomycinandkanamycininfeeds—

Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2023-08-01实施2023-04-112023-08-01实施中华人民共和国农业农村部发布NY/T4360—2023NY/T4360—2023NY/T4360—2023NY/T4360—2023本文件按照GB/T1.l-202(X标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起苹規则》的規定起草，请注意本文件的某咚内容对能涉及专利.本文件的发布机构不承拘识别专利的责任.本文件由农业农村部布牧再医局提出，本文件由全国饲料T：业标准化技术委员会(SAC/TC76)!U口.本文件起草单位:江苏宵农业科学院。本文件主要起草人:魏瑞成、栾枫婷、王冉、贵兰、何涛、朱磊、讲敏敏.饲料中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的测定液相色谱-串联质谱法1范围本文件描述了词料屮链霉索、双氣链霉索和I：•那痗素的液相色诺-串联质谱测定方法.本文件适用于配合例料、浓缩W枓，格料补充料和添加剂预浞合饲料中链葙紊、双氯链毎索和卡那梅素的测定，+文件的检出限为0.05mg/kg,定量限为0.1mg/kg。2規范性引用文件下列文件中的内容通过文中的規范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中.注日期的引用文件.仅该H期对府的版本适用于丰文件;不注U期的引用文件，其嚴新版本(包括所有的焓改单＞适用f本文件.GB/T6682分析实验室用水規格和试辁方法GB/T20195动物饲料K样的制备3术语和定义本文件没打笛要界定的术语和定义.4原理试样中的链霉岽、双氢链霉菜和卡那贡索用混合提取溶液提取，经亲水亲脂平衡甩固相萃取杜净化，用液相色浒串联质谱仪检测，基质匹配标准溶液校准，外标法定®.5试剂或材料除非另有规定.仅使用分析纯试剂.与链霉家，双氢链霉索和P那S索溶液接触的容器应使用聚内烯材质，5,1水-GB/T6682.—级.5.2甲醇:色谱纯。5.3乙陆:色谱纯。5.4甲酸:色涪纯。5.5乙酸铵:色谘纯.5.6异丙醇:色谙纯，5.7磷酸二氢钾溶液(0.2mol/L)；称取2.72K磷酸二氢钾.加水溶解并稀释至100mL„混匀.5.8乙二胺四乙酸二钠溶液(0.2mol/lJ：称取6.72g乙二胺四乙酸_钠，加水溶解并稀释至100mL.混匀.5.920%三a乙酸溶液：称取200g三氯乙酸，加水溶解并稀释至1000mL混匀.5.10混合提取溶液:姆取50mh磷酸二氧钾溶液(5.7)、10mL乙二胺四乙酸二钠溶液(S.S)和500mL三氯乙酸溶液(5.9),加水至900m匕混匀.用铒水调甘pH至7.50士0.20,用水稀杼，定容至1000mL.混匀.5.1110%甲醇溶液:取10mL甲醇(5.2)，加水稀释至100mL，混匀.5.12乙酸铵溶液(0.1md/L):称取0.77g乙酸铵(5.5).加水溶解并稀择至100mL,混匀，NY/T4360—2023NY/T4360—2023#NY/T4360—20235.13乙酸铵溶液(0.002md/Lh移取2mL乙酸铵溶液(5.12)，加水稀释至100混匀.5.14洗脱溶液:取10mL甲酸(5.4＞、5mL异丙醇＜5‘幻和85mL乙酸铵溶液(5.13〉混合，用甲酸调节pH至0.肋土0.10,棍匀.5.15乙酸铵屮酸溶液:移取10mL乙酸铵溶液(5,12).5mL甲酸(5.4＞,用水稀釋并定容至500mL,混匀•5,16乙酸铵甲酸乙脑溶液:移取10mL乙酸铵溶液(5.12).5mL甲酸(5.4),用乙腈(5.3)稀择并定容至500mL，混匀.517标准储备溶液(1 准:确称取硫推链裎求(CAS号:381介74-0,纯度+低于99^).硫酸《氢链霉索(CAS号:5490-277，纯度不低于97%)和箏硫解卡那痗索＜CAS号:25389-940.卡那霉衰A纯度不低标准品或对照品各10(以有效成分计,粘确至0-0]mg),分别于10mL聚丙烯容嫩瓶中，用水溶解，定容.混匀.储存于聚内烯瓶屮,21C-8TC保存.有效期1个月。518混合标准中间溶液(10Mg/mL)：准确称取硫酸链甫累、硫酸双氣链莅索和申硫酸长那窃素标准储缶溶液(5.17)1mLf100mL聚丙烯容M瓶中，用洗脱溶液(5.14)稀释全刻度，混匀.储存于聚丙烯瓶中.2 r保存，有效期1周。19混合标准系列工作溶液：准确移取适迓体积的混合标准中问溶液(5.18＞于10mL聚丙烯荇帝瓶中，用洗脱溶液(5.14)稀释配制成浓度分别为100ng/mL,200ng/mL,500ng/mL,l000ng/mL,2500ng/mL,5000ng/mL混合标准系列工作溶液.临用现配.20凼相萃取小柱:亲水-亲脂(HLB)平衡烟凼相萃取柱.500mg/6mL.5.21尼龙敞孔滤膜：0.22 。6仪器设备1液相色谱申联质谱仪fft!有电喷雾离f-源。6.2分析天平:精度0.1mg和O.Oltng。6-3涡旋混合器-6.4超卢波済洗器.6-5肉心机:转速不低子10000r/min.6,6尚相萃取装酋.6.7眾吹仪.8酸度计:枏度0.01。7样品按GB/T20195的规定制备样品，至少200ff,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀.装人密闭容器中.济用，选取与待测样品类型相M,均匀一•致，且在待»物保留时间处仪器响应值小于方法定S限30%的饲料样品，作为基质空白样品.8试验步•8.1提取平行做2份试验.称取2g(枋确至0.丨mg)试样于50mL聚丙烯离心竹中，准确加人30mL混合提取溶液(5.10),涡旋混合1min,超声提取15min,其间ft分摇动2次，于10COOr/min离心10min，准确移取15mL上淸液.用20%三筑乙酸溶液(5,9)岡节pH至6.50±0.10,备用.8.2净化依次用5mL甲醇(5.2)和5mL水活化固相萃取小柱(5.20),将备用液(8.1)全部过柱，用5mL水、5mb10%甲醇溶液(5.II)分别淋洗，茛空负抽F,准确移取5ml.洗脱溶液(5.14)进行洗脱.收集洗脱液.W次真空负压抽干.涡旋混合］min.过微孔滤膜(5.21).待渊。8.3基质匹S标准系列溶液的制备取基质空白试样，按8.1和8.2处理拊到空A基质溶液.准确移取混合标准系列工作溶液(5.19)科100ML分别背于l.SmL聚丙烯进样瓶.用氮气吹十.准确加人1tnL空A基质溶液.涡旋混合30s,配制成浓度为10ng/mL，20ng/mL,50ng/mLJOOng/mL,250ng/mL,500ng/niL的基质匹K标准系列溶液，待脚.8-4困定8.4.1液相色谱参考条件色谱杆:酰胺柱，柱长100mm.内径2.1mm,粒度1.7Mmt或者性能相当者。柱温:35V.流速:0_3mL/min.进样嫩pU流动相:A相为乙酸铵中酸溶液(5.15)fB相为乙酸铵甲酸乙骑溶液(5.16).梯度洗脱:洗脱程序见农1.表1梯度洗脱程序时间fininA,%0.020802.520803.565355.59010fi.790107.520BO12.0208084.2质谙参考条件电离方式:电喷莠电离，正离子模式CESD.检測方式:多反应监測(MRM).喷英电压:5.5kV。雾化温度:550r.多反何监測(MRM)离子对、去簇电压及碰撞能键见表2.表2多反应监测离子对、去簇电压及破撞能量的参考值被w物名称监澜离f对i縝电压,v链霱*582,4>22L427049582.0263.2-27044M狃链甫家584,4>246.224457584.4>263.V24440卡那霉家A4S5.2>324.35024485.2>1G3,2B5033-为定世离了.84.3基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的坡洼条件下.分別取基质匹配标准系列溶液(8.3)和试样溶液(8.2)上机测定.榣质匹配标疳溶液的定莆离子色谱图见附录A.8.<4定性在相同试验条件下，试样溶液与基质K配标准系列溶液中待测物的保留吋间相对偏差应在士2.5%之内.根据表2选择的定性离子对，比较试样进图中待测物定性离子的相对离子丰度与浓度抜近的堪质匹ny/t4360—2023K标准系列溶液屮对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过衣3规定的范闺，则可判定为样品屮存在对应的待测物.表3定性測定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对W子度>50>20—50>10—20<10最火允许鴒差±20±25±30土508.^.5定量以浓度为横坐标、色透峰命积(响应值)为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与革质匹配标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检劂的线性范阑内.如超出线性范凼，垛将试样和基质空白样品净化(8.2)得到的溶液用洗脱溶液作同比例稀粋后.从“8.3”开始按步骤茧新测定。中点校准定贵时，试样溶液中待測物的峰而积与其质匹配标准溶液的峰曲积相差不超过30%.9试验数据处理试样中链霉索.双氢链毐紊.R那痗素A的含坫以质贵分数w,计.单位为毫克付千克(mR/kg)t标准曲线校准按公式(1〉计箅;单点校准按公式(2)计算。_p,XV,XVXw W,~V2XmX1000 式屮：p. 由基质匹配标准曲线得到的试样溶液中待测物质货浓度的数值，单位为纳克毎奄升(ng/mL)；V一混合提取溶液体积的数値，笮位为毫升(mL)tV| -最终洗脱休积的数值，单位为奄升(mL)；n 试样净化液稀释后的倍数；v2——固相萃取净化时备用液体积的数值，单位为奄升(mLhm-试样质S的数值.单位为克(g).A.XP.XV,XVXW ”、W,_<XV:XmX鵬 -式中：A.——试样溶液中待测物的色谱吟面积；p, 瑤质匹配标准溶液中待测物质坩浓度的数值，单位为纳克毎奄升(ng/mL);V——混合提取溶液体积的数值，单位为毫升<mL)；V,——最终洗脫体积的数值，单位为奈升(mL)；n 试样净化液稀释后的倍数tV,-—固相萃取挣化时备用液体积的数值，单位为毫升(mL)iAn-革质匹0(!标准溶液中待测物的色谱峰面积；m一试样质®的数依，单位为克(g).脚定结果以平行測定的算水平均值表水.保留3位奇效数宇，10精密度在巫虹性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对左位不大T该筇术平均依的20%.附录A(资料性)

链霉素、双氢链霉素和卡那番素A基质匹配标准溶液定堡离子色谱图基质匹配标准溶液定莆离子色谱图见阁A.1，pu»E5K.4OtK263JDOIh取判」&«■ 62(SIV.l)420220«22.1^_4_1^1»«*|11(TwkSpr»lM»m_Max4467,0cp*(97链蒋*

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