核糖体的发现与认识课件

核糖体大事记核糖体的发现与认识1930s生物学家，在光学显微镜下，发现多种细胞的细胞质中存在的群居的小球，有人称之为“poolball”。核糖体的发现与认识1940s翰墨林（J.Hanmerling）和布拉舍（J.Brachet），通过伞藻和海胆卵细胞的实验，发现细胞质与蛋白质的合成有关。核糖体的发现与认识1941美国希拉切特（J.Brachet）和卡斯伯森（T.Caspersson）,利用组织化学方法和显微紫外分光光度技术，发现微粒体。核糖体的发现与认识1953英国罗宾逊（E.Robinson）和布朗（R.Brown）,利用电子显微镜观察，发现植物细胞中的颗粒状物质。核糖体的发现与认识1955美国帕拉德（G.F.Palade），通过电子显微镜样品固定技术，发现制造酶的小颗粒。核糖体的发现与认识1955帕拉德改进了电子显微镜样品固定技术，发现制造酶的地方是直径仅为20nm左右、富含RNA成分的小颗粒。在细菌细胞里，这些颗粒多达2万个，而在哺乳动物中这种颗粒是细菌的50倍，他敏锐的发现了他们的特殊性。1956年他公布了他的发现。因此一度称这些粒子为“帕拉德粒子”。简略过程核糖体的发现与认识1955美国帕拉德（G.F.Palade），通过电子显微镜样品固定技术，发现制造酶的小颗粒。帕拉德因此在“细胞的结构和功能组织方面的发现”方面与比利时另两位科学家共同获得1974年诺贝尔生理学或医学奖

。核糖体的发现与认识1955扎梅奇尼克（P.C.Zamecnic），通过放射性同位素标记法，发现蛋白质合成和颗粒（即核糖体）有关。扎梅奇尼克用含有放射性14C标记的氨基酸喂养小鼠，不久后将小鼠杀死后取出肝脏细胞分析其化学组成。结果发现大部分14C标记渗入蛋白质，并且与核糖体有联系。简略过程核糖体的发现与认识1958‘微粒体粒子’这个词不能充分传达其意义，但‘微粒体碎片中的核糖核蛋白粒子’又显得太拗口。所以与会期间，‘核糖体’一词被举荐出来，这个词让大家都很满意，而且听起来也比较顺耳。如果‘核糖体’这个词可以用来表示大小介于35S至100S的核糖核蛋白颗粒，那么现在这类物质表述上的混乱便最终得以消除。——理查德·B·罗伯茨《微粒体颗粒与蛋白质合成》美国罗伯茨（R.Roberts）根据微粒的化学成分将它们称为核糖核蛋白体，简称核糖体或核蛋白体。核糖体的发现与认识1960法国雅各布（F.Jacob）和莫诺（J.Monod）综合前几年RNA研究的基础，提出假设核糖体是非专一的蛋白质合成装置。提出的假设：核糖体的RNA不决定氨基酸的序列，核糖体是通过接受特殊的信息上的碱基排列的信息决定蛋白质的合成。核糖体的发现与认识1961英国布伦纳（S.Brenner）和美国梅塞尔森（M.Meselsen），通过T4噬菌体侵染细菌实验，证实核糖体是非专一的蛋白质合成装置。T4噬菌体侵染细菌3min后，在培养基里加入含有放射性的RNA成分。2min之后从侵染的细菌中取出核糖体并进行密度离心分析。结果发现，侵染后合成的RNA附着在核糖体上，并作为信使指导蛋白质合成。简略过程核糖体的发现与认识1960s初Perry使用紫外线微光束破坏活细胞的核仁，发现破坏了核仁的细胞丧失了合成rRNA的能力。提示核仁与核糖体形成有关。Perry进一步发现低浓度的放线菌素D能够抑制3H-尿嘧啶掺入rRNA中，而不影响其他种类的RNA合成。显微放射自显影也显示其能选择性阻止核仁RNA的合成。表明核仁与rRNA的合成，核糖体形成有关。核糖体的发现与认识1960sRich的实验室采用未成熟的红细胞研究蛋白质合成时发现了多聚核糖体。电子显微镜下多聚核糖体核糖体的发现与认识LargesubunitSmallsubunitmRNALargesubunitSmallsubunitCompletedpolypeptide(a)(b)(c)Polyribosomes(a)Schematicdrawingofapolyribsome(polysome).(b)ElectronmicrographofagrazingsectionthroughtheouteredgeofaroughERcisterna.Theribosomesarealignedinloopsandspirals,indicatingtheirattachmenttomRNAmoleculestoformpolysomes.(c)Electronmicrographofmetal-shadowedpolysomesisolatedfromreticulocytesengagedinhemoglobinsynthesis.Mostofthesepolysomeshavebetweenfourandsixribosomes.核糖体的发现与认识1968

MasayasuNomura把拆开的大肠杆菌核糖体的30S小亚基的21种蛋白质与16SrRNA在体外混合后重新装配成30S小亚基，然后把重建的小亚基同50S大亚基以及其他辅助因子混合后，进行蛋白质合成实验，发现重建的核糖体具有生物活性，能催化氨基酸掺入到蛋白质多肽链中。

E.coli

小亚基的装配图E.coli

小亚基的装配图粗箭头表示结合力强，细箭头表示力弱。如S4与16SrRNA之间是粗箭头，表示S4可直接与16SrRNA结合而不需要其他蛋白的存在。而S7与16SrRNA的结合力很弱，并且需要S4、S8、S9、S19、S20蛋白的存在。真核生物核糖体在核仁中装配核糖体是一种自组装(self-assembly)的结构，在组装过程有先后层次。核糖体的发现与认识1970s以色列尤纳斯（Ade.E.Yonath）,对嗜热沙漠细菌进行核糖体纯化，利用X光衍射技术，研究核糖体结构。核糖体的发现与认识1980s尤纳斯首次报道了湿热脂肪芽孢杆菌核糖体50S亚基的结晶体结构。继而又报道了一些30S、50S、70S的高分辨率核糖体晶体结构。50S大亚基的晶体衍射图样核糖体的发现与认识1991尤纳斯报道了核糖体50S亚基3ⅹ10-10m分辨率结构。largeribosomalsubunit(50S)ofHaloarculamarismortu核糖体的发现与认识1992英国拉马克里希南（V.Ramakrishnan）小组和尤纳斯小组，利用X射线衍射技术，分别报道核糖体30S亚基5.5ⅹ10-10m和4.5ⅹ10-10m分辨率的结构。30Ssubunit,viewoftheintersubunitinterface

核糖体的发现与认识1998美国施泰茨（ThomasA.Steiz），利用电镜观察和X衍射结构分析结合，解读了核糖体大亚基的结构图。核糖体的发现与认识1998死海盐盒菌（Haloarculamarismortui）的50S亚基的三维分子结构图。分子中的淡蓝色部分为蛋白质，淡橙色及黄色部分为RNA单链。分子核心的亮绿色部分为亚基的活性中心。嗜热栖热菌（Thermusthermophilus）的30S亚基的三维分子结构图。分子中的淡蓝色部分为蛋白质，淡橙色部分为RNA单链核糖体的发现与认识2000s拉马克里希南和尤纳斯解读了核糖体小亚基的结构图。为此，拉马克里希南、施泰茨和尤纳斯共同分享了2009年的诺贝尔化学奖。核糖体的发现与认识核糖体的发现与认识核糖体的发现与认识核糖体的发现与认识典型的原核细胞和真核细胞质核糖体的化学组成核糖体的发现与认识2000s拉马克里希南还对核糖体合成蛋白质的机制进行了研究，合理解释了细胞内蛋白质翻译过程中的高保真性、第3位碱基的摇摆性和蛋白质合成过程中30S亚基的构象变化。核糖体的发现与认识2000sA位点：即氨酰基位点，是与新掺入的氨酰tRNA结合的位点，又叫受位，主要位于大亚基。P位点：即肽酰tRNA位点，又叫供位，主要位于大亚基，在肽基tRNA移交肽链后肽酰tRNA所占据的位置，即与延伸中的肽酰tRNA结合位点。E位点：脱氨酰tRNA离开A位点到完全从核糖体释放出来的一个中间停靠点，只是作暂时的停留。核糖体中肽链延长及蛋白质被分泌入内质网的过程的示意动画核糖体的发现与认识晶体X射线衍射技术X射线晶体衍射是指利用晶体对X射线的衍射作用,获得晶体中电子密度的分布情况,再从中分析并获得原子位置的信息，即晶体结构。由于所有的原子都含有电子。并且X射线的波长范围为0．001～10纳米，其波长与成键原子之间的距离(1-2埃附近)相近，因此X射线可用于研究各类分子的结构。晶体(一般为单晶)中含有数量巨大的方位相同的分子，X射线对这些分子的衍射叠加在一起就能产生足以探测到的信号。从这个意义上说，晶体就是一个X射线的信号放大器。“X射线衍射技术”与“晶体学”联系在一起形成“X射线晶体衍射技术”(X—raycrystallography)，可以对各类晶体，特别是蛋白质晶体结构进行分析。核糖体的发现与认识晶体X射线衍射技术这幅图所显示的是晶体的X光衍射花样，所用晶体为一蛋白质晶体。图中的每一个黑点反映为一个衍射点，这些衍射点是由被晶体散射的X光相互干涉而形成。核糖体的发现与认识theRamakrishnanLabwebpagehttp://www.mrc-lmb.cam.ac.uk/ribo/homepage/mov_and_overview.htmlThekeytolifeattheatomic