仪器分析第八章 气相色谱分析法液相和离子色谱

第八章气相色谱法第一节概述一、GC分类1.按固定相分：气－固色谱、气－液色谱2.按别离原理分：吸附色谱、分配色谱3.按柱子粗细分：填充柱色谱、毛细管柱色谱二、气相色谱仪的组成

载气→减压→净化→稳压→→色谱柱→检测器→记录仪

进样载气系统进样系统别离系统检测系统记录系统三、气相色谱法的特点和应用占有机物20%

适于分析气体、易挥发的液体及固体不适合分析不易气化或不稳定性物质样品的衍生化使应用范围进一步扩大第二节气相色谱法的根本原理一、根本概念二、塔板理论〔平衡理论〕三、速率理论热力学理论：塔板理论——平衡理论根底动力学理论：速率理论——Vander方程理论根底1．色谱峰的区域宽度：色谱柱效参数峰宽W：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距标准差σ：正态分布色谱曲线两拐点距离的一半σ→对应0.607h处峰宽的一半注：σ↓小，峰↓窄，柱效↑高半峰宽W1/2：峰高一半处所对应的峰宽

注：除了用于衡量柱效，还可以计算峰面积2．流出曲线图二、塔板理论

色谱柱每个H高度内有一块塔板,共有假设干块塔板组分,在每块塔板两相间分配达平衡，K小的先出柱屡次分配平衡，K有微小差异组分仍可获较好别离〔一〕塔板理论四个根本假设〔二〕色谱峰的二项式分布〔三〕色谱峰的正态分布〔四〕理论板数和理论塔板高度的计算假想：〔一〕塔板理论的四个根本假设1．在柱内一小段高度内组分分配瞬间达平衡〔H→理论塔板高度〕2．载气非连续而是间歇式〔脉动式〕进入色谱柱，每次进气一个塔板体积3．样品和载气均加在第0号塔板上，且忽略样品沿柱方向的纵向扩散4．分配系数在各塔板上是常数〔二〕色谱峰的二项式分布〔N较少〕→逆流分布萃取法→利用物质在互不相溶两相中溶解度的不同〔三〕色谱峰的正态分布〔N>50次〕→近似对称分布讨论：

〔四〕理论板数和理论塔板高度的计算理论塔板高度H——为使组分在柱内两相间到达一次分配平衡所需要的柱长。理论塔板数N——组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配的总次数。小结1．塔板理论的奉献：从热力学角度解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大点的位置，说明了保存值与K的关系，提出了评价柱效上下的n和H的计算式。在比较相似柱的柱效时有用；须在给定条件，指定组分测定时才有意义。2．

例:在柱长为2m的5%的阿皮松柱、柱温为1000C，记录纸速度为2.0cm/min的色谱条件下，测定苯的保存时间为1.5min，半峰宽为0.20cm，求理论塔板数。解：三、速率理论

〔一〕塔板理论优缺点〔二〕VanDeemteer方程式〔一〕塔板理论优缺点成功处：解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大值对应的tR说明了保存值与K的关系评价柱效〔n，σ〕存在问题:1〕做出了四个与实际不相符的假设忽略了组分在两相中传质和扩散的动力学过程2〕只定性给出塔板高度的概念，却无法解释板高的影响因素3〕排除了一个重要参数——流动相的线速度u，因而无法解释柱效与流速关系更无法提出降低板高的途径〔二〕VanDeemteer方程式吸收了塔板理论的有效成果——H，并从动力学角度较好地解释了影响柱效的因素涡流扩散项纵向扩散项传质阻抗项流速与柱效的关系第三节气相色谱柱色谱柱组成

一、气液分配色谱柱二、气固吸附色谱柱柱管填充剂填充柱：2~4米柱长，2~6mm内径毛细管柱：几十米~几百米柱长0.1~0.5mm内径固体吸附剂——气-固吸附色谱柱载体+固定液——气-液分配色谱柱一、气-液分配色谱柱固定相：载体+固定液〔一〕载体〔二〕固定液〔一〕载体1．作用：承载固定液的作用2．要求：比外表积大〔多涂渍固定液〕无吸附性〔不吸附被测组分〕化学惰性〔不与固定液发生化学反响〕热稳定性好一定的机械强度3．分类：〔1〕硅藻土类：具有一定粒度的多孔性固体微粒红色：吸附力强，与非极性物质配伍白色：吸附力弱，与极性物质配伍〔2〕非硅藻土类：玻璃微球，石英微球，氟塑载体，含氟化合物〔二〕固定液1．要求：〔1〕操作柱温下固定液呈液态〔易于形成均匀液膜〕〔2〕操作条件下固定液热稳定性和化学稳定性好〔3〕固定液的蒸气压要低〔柱寿命长，检测本底低〕〔4〕固定液对样品应有较好的溶解度及选择性2．分类：化学分类法极性分类法一、化学分类法A．烃类：烷烃，芳烃例角鲨烷——标准的非极性固定液B．硅氧烷类：（a）甲基硅氧烷：弱极性甲基硅油（n﹤400）甲基硅油Ⅰ——2300C

甲基硅橡胶（n﹥400）SE30，OV1——3500C（b）苯基硅氧烷：极性稍强（随苯基↑，极性↑）甲基苯基硅油（n﹤400）

甲基苯基硅橡胶（n﹥400）：按苯基含量不同分

低苯基硅橡胶SE52——含苯基5%，3500C

中苯基硅橡胶OV17——含苯基50%，3500C

高苯基硅橡胶OV25——含苯基75%，3500C（c）氟烷基硅氧烷：中等极性（d）氰基硅氧烷：强极性C．醇类（氢键形固定液）非聚合醇聚合醇聚乙二醇（PEG-20M——2500C）D．酯类：中强极性固定液非聚酯类聚酯类丁二酸二乙二醇聚酯（PDEGS或DEGS）

二、极性分类法a．相对极性法b．固定液常数法〔罗氏特征常数法和麦氏常数法〕3．固定液的选择：〔1〕按相似相溶原那么选择〔2〕按组分性质的主要差异选择〔1〕按相似相溶原那么选择a．按极性相似原那么选择：固定液与被测组分极性“相似相溶〞，K大，选择性好非极性组分——选非极性固定液，按沸点顺序出柱，低沸点的先出柱中等极性组分——选中等极性固定液，根本按沸点顺序出柱强极性组分——选极性固定液按极性顺序出柱，极性强的后出柱注：对于中等极性组分，假设沸点相同，那么按极性顺序出柱，极性较强的后出柱b．按化学官能团相似选择：

固定液与被测组分化学官能团相似，作用力强，选择性高酯类——选酯或聚酯固定液醇类——选醇类或聚乙二醇固定液〔2〕按组分性质的主要差异选择组分的沸点差异为主——选非极性固定液按沸点顺序出柱沸点低的先出柱组分的极性差异为主——选极性固定液按极性强弱出柱极性弱的先出柱例：苯〔80.10C〕，环己烷〔80.70C〕选非极性柱——分不开；选中强极性柱——较好别离，环己烷先出柱二、气-固吸附色谱柱固定相：1〕吸附剂——硅胶，AL2O3〔极性，吸附力强〕活性炭〔非极性〕2〕分子筛：吸附+分子筛3〕高分子多孔微球——GDX有机合成高分子聚合物吸附+分配机制装柱过程：1〕空柱管→酸洗，碱洗，乙醚洗2〕固定液〔<20%〕→溶解在有机溶剂→载体3〕静态老化4〕动态老化第四节检测器检测器：是将流出色谱柱的被测组分的浓度转变为电信号的装置。一、气相色谱检测器分类二、常用检测器的特点和检测原理三、检测器的性能指标一、气相色谱检测器分类：按检测原理分浓度型检测器：测量组分浓度的变化响应值与组分的浓度成正比〔TCD〕质量型检测器：测量组分质量流速的变化响应值与单位时间进入检测器的组分质量成正比〔FID〕二、常用检测器的特点和检测原理〔一〕热导检测器〔TCD〕〔二〕氢焰检测器〔FID〕〔一〕热导检测器〔TCD〕1．特点2．结构3．检测原理4．影响因素及本卷须知1．特点：浓度型检测器优点：1〕通用型，应用广泛2〕结构简单3〕稳定性好4〕线性范围宽5〕不破坏组分，可重新收集制备缺点：与其他检测器比灵敏度稍低〔因大多数组分与载气热导率差异不大〕2．结构

测量臂——接在色谱柱后通样品气体+载气，电阻为R1惠斯通电桥参比臂——接在色谱柱前只通载气，电阻R2两个等阻值电阻R3=R43．检测原理

依据组分与载气的热导率差异进行检测1〕进样前：两臂均通载气时2〕进样后：测量臂通样品气体+载气参比臂通载气时4．影响因素及本卷须知〔1〕桥流↑，灵敏度↑灵敏度足够时，桥流应尽可能小〔100~200mA〕先通载气，再给桥流〔2〕⊿λ↑，灵敏度↑，选λ大的做载气λ载>λ组，出正峰λ载=λ组，不出峰λ载<λ组，出倒峰λH2>λHe>λN2——选氢气做载气〔3〕T池↓，池体与热丝温差↑，灵敏度↑保证T检>T柱，以免造成检测器污染〔4〕浓度型检测器，A∝1/u，以A定量，应保持u一定〔峰面积定量依据〕〔二〕氢焰检测器〔FID〕1．特点2．结构3．检测原理和离子化机理4．操作条件选择和本卷须知1．特点：质量型检测器优点：专属型检测器〔只能测含C有机物〕灵敏度高〔>TCD〕响应快线性范围宽缺点：燃烧会破坏离子原形，无法回收〔制备纯物质，不采用〕2．结构3．检测原理和离子化机理

检测原理：利用组分在氢焰中产生离子流进行检测有机化合物→离子对→离子流→流向阴、阳极→放大→记录

离子化机理：化学电离理论氢焰→自由基→正离子4．操作条件选择和本卷须知1〕载气的选择：载气——N2气燃气——H2气助燃气——空气2〕使用温度：高于柱温50~1000C3〕注意问题：质量型检测器，h∝u，以h定量，应保持u恒定〔峰高定量依据〕三、检测器的性能指标〔一〕噪声与漂移〔二〕灵敏度〔三〕检测限〔一〕噪声与漂移1．噪声：无样品通过时，由仪器本身和工作条件等偶然因素引起基线的起伏称为~〔以噪声带衡量〕2．漂移：基线随时间向一个方向的缓慢变化称为~〔以一小时内的基线水平变化来表示〕〔二〕灵敏度〔响应值，应答值〕

1．浓度型检测器的灵敏度〔Sc〕灵敏度越高，噪音越大2．质量型检测器的灵敏度〔Sm〕〔三〕检测限

组分峰高为噪音二倍时的灵敏度

检测限↓小，仪器性能↑好质量型检测器浓度型检测器第五节别离条件的选择一、别离度〔分辨率〕及影响因素二、实验条件的选择一、别离度〔分辨率〕及影响因素1．别离度定义式2．影响别离的因素〔别离方程，别离度计算式〕1．别离度定义式别离度：相临两组分间峰顶间距离是峰底宽平均值的几倍〔衡量色谱别离条件优劣的参数〕讨论：2．影响别离的因素〔计算式〕前提:定义式根底上，相邻两组分的n一致〔假设〕柱选择项柱容量项柱效项a．柱效项及其影响因素影响色谱峰的宽窄主要取决于色谱柱性能及载气流速讨论：增加柱效是提高别离度的一个直接有效手段提高柱效、改善别离的途径：增加柱长；降低板高根据速率理论，降低板高、提高柱效的方法是：1〕采用粒度较小、均匀填充的固定相〔A项↓〕2〕分配色谱应控制固定液液膜厚度〔C项↓〕3〕适宜的操作条件：流动相的性质和流速，柱温等等〔B项↓〕选用分子量较大、线速度较小的载气——N2气，控制较低的柱温b．柱选择项及其影响因素影响峰的间距主要受固定相性质，以及柱温影响讨论：

增大柱选择性是改善别离度的最有力手段气相色谱中，柱选择性取决于固定相性质和柱温选择适宜的固定相使与不同组分的作用产生差异才能实现别离一般说，降低柱温可以增大柱的选择性c．柱容量项及其影响因素影响峰位主要受固定相用量、柱温和载气流速的影响讨论：

综合考虑别离度、别离时间和峰检测几项因素控制k的最正确范围2~5GC中，增加固定液用量和降低柱温可以增加kk影响峰位n影响峰宽窄α影响两峰间距如何根据具体情况改进别离度？α太小，两组分未分开应改变固定相极性，降低柱温k太小，n也太小，应增大固定液用量，降低柱温n太小，许多组分未分开应设法降低板高，提高柱效二、实验条件的选择色谱条件包括别离条件和操作条件别离条件是指色谱柱操作条件是指载气流速、进样条件及检测器1．色谱柱的选择2．柱温的选择3．载气与流速的选择4．进样条件的选择1．色谱柱的选择〔以气液分配色谱为主〕〔1〕固定相的选择〔2〕柱长的选择〔1〕固定相的选择固定液的选择:1〕按“相似相溶〞原那么：极性相似或官能团相似2〕按组分性质主要差异：沸点相差大的选非极性固定液沸点相差小的选极性固定液3〕柱温<固定液最高使用温度——防止固定液流失载体的选择：种类，粒度，分布固定液配比的选择：高沸点组分→比外表积小的载体低固定液配比〔1%~3%〕低柱温低沸点组分→高固定液配比〔5%~25%〕加大k值，到达良好别离难别离组分→毛细管柱〔2〕柱长的选择注：根据R>1.5选择L，一般较短(0.6~6m)不可以无限延长柱子例：两组分在1m长柱子上的别离度为0.75，问使用多长柱子可以使它们完全别离？解：2．柱温的选择原那么：1〕在能保证R的前提下，尽量使用低柱温，但应保证适宜的tR及峰不拖尾，减小检测本底2〕根据样品沸点情况选择适宜柱温柱温应低于组分沸点50~1000C宽沸程样品应采用程序升温程序升温好处改善别离效果缩短分析周期改善峰形提高检测灵敏度3．载气与流速的选择选择载气应与检测器匹配TCD→选H2，He〔u大，粘度小〕FID→选N2〔u小，粘度大〕选择流速和载气应同时考虑对柱效和分析时间的影响4．进样条件的选择气化室温度——一般稍高于样品沸点检测室温度——应高于柱温30~500C进样量——不可过大，否那么造成拖尾峰

注：检测器灵敏度足够→进样量尽量小最大允许进样量——使理论塔板数降低10%的进样量例：物质A和B在一根30.0cm长的柱上的保存时间分别为16.40和17.63min，不被保存组分通过该柱的时间为.30min，峰底宽为1.11和1.21min，试计算〔1〕柱的别离度〔2〕柱的平均塔板数〔3〕塔板高度〔4〕达1.5别离所需柱长解：第六节定性定量分析一、定性分析二、定量分析一、定性分析1．利用保存值定性1〕对照物定性：定性专属性差注：不同组分如在某一色谱条件下保存值相同，应更改色谱柱再检测，粗步推算是否为一个纯物质峰2〕相对保存值定性3〕利用保存指数定性：唯一可靠、准确、重复性好2．利用化学反响定性：收集柱后组分，官能团反响定性鉴别〔非在线〕3．利用两谱联用定性：GC-MS，GC-FTIR二、定量分析

以峰高或峰面积定量〔一〕峰面积的测量〔二〕定量校正因子〔三〕定量方法〔一〕峰面积的测量2．非正常峰〔不对称峰〕1．对于正常峰

3．自动求和〔自动积分仪或色谱工作站〕：直接给出A，h，W1/2注：当色谱操作条件一定时，在一定进样量范围内〔不超载〕，W1/2与进样量无关〔二〕定量校正因子

1．两种表示方法2．相对校正因子的测定3．本卷须知：相对校正因子与待测物、基准物和检测器类型有关，与操作条件〔进样量〕无关基准物：TCD→苯；FID→丁庚烷以氢气和氦气作载气测的校正因子可通用以氮气作载气测的校正因子与两者差异大〔三〕定量方法1．归一化法2．外标法3．内标法4．内标比照法1．归一化法前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰依据：组分含量与峰面积成正比优点：简便，准确定量结果与进样量、重复性无关〔前提→柱子不超载〕色谱条件略有变化对结果几乎无影响缺点：所有组分必须在一定时间内都出峰必须所有组分的校正因子不适合微量组分的测定2．外标法：以待测组分纯品为对照物，与试样中待测

组分的响应信号相比较进行定量的方法a．工作曲线法：i纯品→工作曲线，同体积样品与之比较前提：进入检测器样品量与峰面积成正比b．外标一点法：一种浓度对照物比照样品中待测组分含量前提：截距为0，对照品浓度与待测组分浓度接近c．外标两点法：

前提：选取两点对照品的浓度，需涵盖待测浓度

外标法特点：1〕不需要校正因子，不需要所有组分出峰2〕结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大→每次进样量应一致，否那么产生误差3．内标法：无待测物纯品，参加样品中不含对照物，

以待测组分和对照物的响应信号比照定量对内标物要求：a．内标物须为原样品中不含组分b．内标物与待测物保存时间应接近且R>1.5c．内标物为高纯度标准物质，或含量物质内标法优点：进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关适合测定微量组分内标法缺点：制样要求高；找适宜内标物困难；校正因子4．内标比照法〔浓度样品对照法〕

配制等量参加内标物的样品溶液和对照品溶液内标比照法特点：不需要校正因子进样量对结果影响不大注：对于正常峰，可以h代替A计算含量例：内标法测定无水乙醇中微量水分第九章高效液相色谱法第一节概述一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差异三、高效液相色谱仪流程图四、特点一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差异，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种别离手段柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相柱效低〔H↑，n↓〕分析周期长无法在线检测2．HPLC：别离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm〔球形，匀浆装柱〕高压输送流动相柱效高〔H↓，n↑〕分析时间大大缩短可以在线检测二、HPLC与GC差异相同：兼具别离和分析功能，均可以在线检测主要差异：分析对象的差异和流动相的差异1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%2．流动相差异GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善别离度增加了因素，对别离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对别离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大别离选择性3．操作条件差异GC：加温操作HPLC：室温；高压〔液体粘度大，峰展宽小〕三、高效液相色谱仪流程图1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱—分离5．检测器—分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置第二节根本理论和条件选择热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论——Vander方程一、塔板理论二、速率理论三、HPLC法中别离条件的选择一、塔板理论二、速率理论〔与GC比照〕1)2〕涡流扩散项及其影响2)讨论：1〕流动相流速对HPLC板高的影响〔与GC比照〕3〕传质阻抗项及其影响三、HPLC法中别离条件的选择1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相〔dp≤10μm〕首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右第三节各类高效液相色谱法

一、液固吸附色谱法〔LSC〕二、液液分配色谱法〔LLC〕三、化学键合相色谱法〔BPC〕一、液固吸附色谱法〔LSC〕

流动相为液体，固定相为固体吸附剂1．别离机制：利用溶质分子占据固定相外表吸附活性中心能力的差异别离前提：K不等或k不等2．固定相：与LC比，固定相粒径不同〔<10μm〕〔2〕高分子多孔小球：YSG原理：吸附+分配蒹小孔凝胶作用特点：柱选择性好，峰形好，柱效低适用：别离弱极性化合物（1）硅胶表孔硅胶（薄壳硅胶）全多孔硅胶无定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108

堆积硅珠YQG3~4μm8×108理想原理：吸附特点：峰易拖尾适用：分离极性化合物3．流动相：底剂〔烷烃〕+有机极性调节剂例：正己烷或庚烷+氯仿---4．影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓，tR↓注：调节溶剂极性，可以控制组分的保存时间5．出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱6．硅胶吸水量↑，LSC→LLC硅胶含水量较小吸附色谱硅胶极性较大硅胶含水量>17%分配色谱硅胶失活→载体吸附的水→固定液二、液液分配色谱法〔LLC〕1．别离机制：利用组分在两相中溶解度的差异2．固定相：载体+固定液〔物理或机械涂渍法〕缺点：系统内部压力大，易流失，不实用固定液——极性→NLLC固定液——非极性→RLLC3．正相色谱——固定液极性>流动相极性〔NLLC〕极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于别离极性组分反相色谱——固定液极性<流动相极性〔RLLC〕极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于别离非极性组分三、化学键合相色谱法〔BPC〕〔一〕化学键合相〔二〕反相键合相色谱〔三〕正相键合相色谱〔四〕离子对色谱和离子抑制色谱〔一〕化学键合相利用化学反响将固定液的官能团键合在载体外表1．别离机制：分配+吸附〔以LLC为根底〕2．特点：1〕不易流失2〕热稳定性好3〕化学性能好4〕载样量大5〕适于梯度洗脱〔二〕反相键合相色谱1．别离机制：疏溶剂理论正相——流动相与溶质排斥力强，作用时间↑k↑，组分tR↑反相——流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓，k↓，组分tR↓2．固定相：极性小的烷基键合相C8柱，C18柱〔ODS柱——HPLC约80%问题〕3．流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水流动相极性>固定相极性底剂+有机调节剂〔极性调节剂〕例：水+甲醇，乙腈，THF4．流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑5．出柱顺序：极性大的组分先出柱极性小的组分后出柱6．适用：非极性~中等极性组分〔HPLC80%问题〕〔三〕正相键合相色谱1．别离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力2．固定相：极性大的氰基或氨基键合相3．流动相：极性小〔同LSC〕底剂+有机极性调节剂例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇4．流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱极性大的组分后出柱6．适用：氰基键合相与硅胶的柱选择性相似〔极性稍小〕别离物质也相似氨基键合相与硅胶性质差异大，碱性分析极性大物质、糖类等〔四〕离子对色谱和离子抑制色谱1．反相离子对色谱法2．反相离子抑制色谱1．反相离子对色谱法〔IPC或PIC〕反相色谱中，在极性流动相中参加离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加k和tR，以改善别离2．反相离子抑制色谱在反相色谱中，通过参加缓冲溶液调节流动相pH值，抑制组分解离，增加其k和tR，以到达改善别离的目的1〕离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质pH一定的缓冲溶液2〕k的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关选择流动相：应同时考虑极性及pH值酸性物质——参加酸HActR↑，k↑碱性物质——参加碱NH3·H2OtR↑，k↑调节pH范围：3.0~8.0pH>8.0破坏键合相与载体的结合pH<3.0腐蚀柱子3〕适用：极弱酸碱物质pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物第五节高效液相色谱仪1．泵：恒压泵：流量精度不稳恒流泵：常用2．进样装置1〕隔膜进样〔高分子有机硅胶垫→进样室〕GC系统压力较小，可以HPLC系统压力太大，必须停泵进样〔早期〕2〕阀进样：不必停泵，六通阀3．色谱柱：直径4~6mm,柱长10~30cm柱效评价：色谱系统适应性试验R，n，fs〔拖尾因子〕柱再生：维护、保养、柱子的冲洗4．检测器1〕紫外检测器：适于吸收紫外光的物质2〕荧光检测器：只能分析自身发光的物质灵敏度高3〕示差折光检测器：利用折光率的差异灵敏度低，温度要求严格4〕电化学检测器5〕化学发光

高效液相色谱仪器

highperformanceliquidchromatograph高效液相色谱仪流程示意色谱柱进样高压泵贮液泵温度控制记录仪检测器梯度洗脱装置高压输液系统分离系统检测系统进样系统记录系统流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程HPLC仪器结构示意图〔方框图〕2.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相〔<10μm〕，液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(2)梯度淋洗

〔洗提、洗脱〕

装置内〔高压〕梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。外〔低压〕梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。别离过程中按一定程序连续改变载液中溶剂即流动相的配比和极性以提高别离效果〔类似GC中的程序升温〕(3)进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如下图：(4)高效别离柱柱体为直型不锈钢管，标准内径4.6或3.9mm，柱长15～30cm，填料颗粒粒度5－10μm,柱效7000-10000。开展趋势是减小填料粒度(3－5μm)和柱径以提高柱效。(5)液相色谱检测器a.紫外检测器(ultravioletphotometricdetector)原理：朗伯比尔定律。优点：应用最广，对大局部有机化合物有响应，灵敏度高，线性范围宽。是高效液相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速〔脉冲〕和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。其次，流通池可做的很小〔1mm×10mm，容积8μL)。固定波长－汞灯254、280nm,可变波长－氘灯200－450nm.光路长5－10mm。缺点：对无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较大的溶剂如苯不能作流动相使用。双光路紫外检测器b.光电二极管阵列检测器(photo-diodearraydetector;PDAD)光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如下图。c.示差折光检测器

〔differentialrefractiveindexdetector〕原理