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文档简介

细胞器的分别河北大学细胞生物学实验室细胞器的分别细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成，细胞质中含有假设干细胞器和细胞骨架等，这些也称作亚细胞组分。对于细胞的构造和功能的研讨，是细胞生物学的根本课题，其重要的研讨手段之一是分别纯的亚细胞组分，察看它们的构造或进展生化分析。分别亚细胞组分的方法主要有差速离心和密度梯度离心。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分别不同大小的细胞和细胞器。速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀差速离心

〔differentialcentrifugation〕

差速离心在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒经常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，普通反复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分别密度和大小悬殊的细胞，更多用于分别细胞器。对于精细的分别，那么是密度梯度离心效果更好。密度梯度离心

〔densitygradientcentrifugation〕

用一定的介质在离心管内构成一延续或不延续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，经过重力或离心力场的作用使细胞分层、分别。这类分别又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。A等速度沉降，B等密度沉降密度梯度离心速度沉降〔velocitysedimentation〕主要用于分别密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种沉降方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分别生物颗粒的最小密度。生物颗粒〔细胞或细胞器〕在非常平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而到达分别。等密度沉降〔isopycnicsedimentation〕适用于分别密度不等的颗粒。细胞或细胞器在延续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间那么沉降或漂浮到与本身密度相等的介质处，并停留在那里到达平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分别。介质的最高密度应大于被分别组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不能太平缓。这种方法适于分别细胞器，而不太适于分别和纯化细胞。叶绿体的分别实验方法1.选取新颖的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称3g放于玻璃匀浆器中，参与10ml0.35MNaCl溶液，匀浆3～5min。2.匀浆液用4层纱布过滤于50ml烧杯中。3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。弃去沉淀。4.将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清，沉淀即为叶绿体。5.将沉淀用0.35MNaCl溶液悬浮，取一滴叶绿体悬液滴于载片上，加盖片察看：①在普通光镜下察看；②在荧光显微镜下察看。叶绿体的分别实验结果1.普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型，在

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