一种检测鱼肉中四环素类抗生素的高效方法

摘要/Abstract[目的]

建立超高效液相色谱-串联质谱同时测定鱼肉中4种四环素类抗生素（四环素、金霉素、土霉素、强力霉素）的方法。[方法]

样品经Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取，正己烷除油脂，经OasisHLB固相萃取小柱净化，采用ACQUITYUPLC®BEHC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm)分离。[结果]

四环素、金霉素、土霉素、强力霉素4种四环素类抗生素在0～100ng/mL范围内线性关系良好，相关系数(R)均大于0.999；在5.0～50.0μg/kg添加水平下，回收率均在70%～120%；相对偏差(RSD)均小于10%；检出限为5.0μg/kg，定量限为10.0μg/kg。[结论]

超高效液相色谱-串联质谱法可用于鱼肉中四环素类抗生素的测定。研究背景/

Introduction四环素类(tetracyclines,TCs)药物是由放线菌产生的一类基本骨架为并四苯环的广谱抗生素。四环素类药物在水产养殖领域具有广泛的应用，它对病原菌有抑制作用，也能促进水产动物快速生长。由于缺乏科学指导，导致滥用现象十分严重，在水产养殖过程中会有20%～30%的四环素类药物被鱼类吸收，从而诱导体内致病微生物产生抗性基因(antibioticresistancegenes,ARG)，当抗性基因通过食物链方式进入人体后会对健康构成威胁。四环素类抗生素是保障动物和人类健康的重要武器，如果长期食用含四环素类抗生素残留的水产品，可能会产生致癌致畸致突变、过敏反应和降低人体免疫能力的危害等。因此，世界各国对水产品中的兽药残留限量做了严格规定，我国规定鱼组织（皮和肉）中土霉素、金霉素和四环素的最大残留量为200μg/kg。四环素类抗生素的检测方法有：微生物法、免疫分析法、分光光度法、高效液相色谱法和液质联用法等。微生物法只能测定四环素类抗生素总量，酶联免疫法只能测定个别四环素类抗生素，高效液相色谱-串联质谱法灵敏度高、准确度高，且仪器分析时间短，适用于多种抗生素药物残留的同时分析。本研究使用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取，OasisHLB固相萃取小柱净化，结合UPLCMS/MS测定鱼中4种四环素类（四环素、金霉素、土霉素、强力霉素）抗生素的方法，为鱼肉中四环素类抗生素的测定提供一种准确、可靠的方法。研究结果/

Result1.线性方程和检出限本试验采用添加空白基质溶液对4种混标溶液进行定量测定，4种四环素类（四环素、金霉素、土霉素、强力霉素）抗生素在0～100ng/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999.图1

四环素类抗生素混合标准溶液的MRM色谱表1四环素类抗生素线性方程和相关系数2.

方法回收率和精密度选取阴性的鱼肉样品，分别加入3个水平（5.0、10.0、50.0μg/kg）的四环素类抗生素标准溶液，进行加标回收试验，结果见表4。由表4可知：多西环素、土霉素、四环素、金霉素的回收率范围分别为85.6%～97.7%、89.3%～93.0%、84.2%～97.1%、87.6%～94.2%，精密度RSD范围分别为0.9%～1.3%、0.2%～1.7%、0.4%～7.5%、1.0%～1.2%。研究表明，4种四环素类抗生素回收率均在70%～120%，相对标准偏差RSD≤10%，满足GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对回收率60%～120%、精密度＜15%的要求，说明该方法具有较好的准确性和稳定性，可以用于鱼肉中四环素类抗生素的测定。表4四环素类抗生素的回收率和精密度3.方法检出限方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)为产生3倍和10倍信噪比(S/N)时磺胺类化合物的质量浓度。四环素类抗生素检出限为5.0μg/kg，定量限为10.0μg/kg，而国标GB31656.11—2021《食品安全国家标准水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》中多西环素、土霉素、四环素、金霉素的检测限分别为20.0、10.0、10.0、20.0μg/kg，定量限分别为40.0、20.0、20.0、40.0μg/kg，表明该方法的4种四环素类抗生素的检出限和定量限均低于国标给定值，可以测定出更低浓度的含四环素类抗生素样品。4.

样品测定2022年采用该方法对45批次鱼肉样品进行测定，检出四环素3批次和金霉素4批次，含量范围分别为10.20～30.34、15.60～41.87μg/kg，GB31650—2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定四环素和金霉素限量值为100μg/kg，所有样品均在限量值范围内，说明这45批次鱼肉样品不会对消费者身体健康带来危害。结论/

Conclusion鱼肉中四环素类药物的检测对人类的健康非常重要，本研究建立了鱼肉中4种四环素类抗生素（四环素、金霉素、土霉素、强力霉素）的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。以Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取、OasisHLB固相萃取小柱净化，通过加标回收率试验表明：回收率均在70%～120%、相对标准偏差RSD≤10%，4种四环