致病性菌检测方法

大肠杆菌检测方法一、检测流程图注：（1） ］代表非粪大肠杆菌，没必要在进行下一步鉴定。（2）典型菌落：深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，具有金属光泽。也有呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落。二、培养基和试剂双倍乳糖胆盐培养基（货号：022041，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取60g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装到带有小倒管的试管,115°C高压灭菌20min。伊红美蓝培养基（货号：022060，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取37.5g,加入蒸馏水或去离子水1L,121°C高压灭菌15min。蛋白胨水（货号：022110，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取25g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装到试管，121C高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂：5g对二甲氨基苯甲醛溶于75ml戊醇，缓慢加入浓盐酸25ml。革兰氏染色1）染液制备结晶紫染色液，革兰氏碘液，脱色液（95%乙醇），复染液（沙黄复染液/稀石碳酸复红液）2）染色法A将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min,水洗。B滴加革兰氏碘液，作用1min,水洗。C滴加95%乙醇脱色，约30s,或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s,水洗。D滴加复染液，复燃1min,水洗，待干，镜检。3）染色结果革兰氏阳性呈紫色，革兰氏阴性呈红色。铜绿假单胞杆菌检测方法检测流程图革兰氏染色.—■-I! i检测流程图革兰氏染色.—■-I! i'阳］V注：（1） 代表非铜绿假单胞杆菌，没必要在进行下一步鉴定。（2） 典型菌落：扁平无定形，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。（3）氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在平皿内，用无菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在滤纸上。滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试剂，在15s-30s之内出现粉红色或紫红色为阳性，阴性不变色。（4） 绿脓菌素试验：取可疑菌落2-3个，分别接种在绿脓菌.素测定培养基上，置37°C培养24h,加入氯仿3-5m1,充分振荡是培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿内，待提取液为蓝色时,将其转移到试管并加入lmol/L盐酸lml,振荡，静置。上层盐酸出现粉红色到紫红色为阳性。（5） 硝酸盐还原产气试验：取可疑菌落，接种硝酸盐蛋白胨水培养-基，37C培养24h。小倒管有气体为阳性。（6） 明胶液化试验:取可疑菌落，穿刺接种在明胶培养基,37C培养24h后,放冰箱10-30min,阳性呈溶解状，阴性为凝固不溶。（7） 42C生长实验：取可疑菌落接种普通培养基，41-42C培养24-48h,若能生长为阳性，不生长为阴性。二、培养基和试剂SCDLP液体培养基（货号：027010,厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取38g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装量90ml,121C高压灭菌20min。十六烷基三甲基溴化铵培养基（货号：027040，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取33.3g到1L蒸馏水或去离子水，115C高压灭菌20min。绿脓菌素测定用培养基（货号：027050，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取46.4g到1L蒸馏水或去离子水，再加10g甘油，加热搅拌完全溶解，分装试管，115C高压灭菌20min。放置成斜面。硝酸盐蛋白胨水培养基（货号：027060，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取15.5g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装到带有小倒管的试管,115C高压灭菌20min。明胶培养基（货号：022250，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取128g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装试管（60-75mm）,115C高压灭菌20min。垂直放置待其凝固。营养琼脂培养基（货号：022020，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取33g到1L蒸馏水或去离子水，121C高压灭菌15min。

金黄色葡萄球菌检测方法注：（1） ;代表非金黄色葡萄球菌，没必要在进行下一步鉴定。（2）典型菌落：金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。（3） 甘露醇发酵试验：取可疑菌落，接种甘露醇培养基，液面加2-3mm灭菌液体石蜡，37°C培养24h,产酸为阳性。（4） 血浆凝固酶试验：取1：4新鲜血浆0.5m1,置于灭菌小试管，加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，放37C培养箱，每半小时观察一次，6h内出现凝块，则为阳性。同时要做阳性和阴性菌株肉汤培养物对照实验。二、培养基和试剂SCDLP液体培养基（货号：027010，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取38g到1L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装量90ml，121C高压灭菌20min。血琼脂培养基（货号：024060，厂家：广东环凯微生物科技有限公司）称取40g到1L蒸馏水或去离子水，121C高压灭菌15min。使用时每100ml培