血清肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的应用价值

河南科技大学毕业论文]。在这中间的测定方法有着最为普遍的应用，虽说对于人体存在着一定的放射性，然而却有着简捷和低成本等特点。在此次研究中，对于肿瘤标志物、、以及的测试方式采用了酶联免疫剖析方式（），对于则是经由增强发光-免疫点印迹方式（），这两者在灵敏度方面均比要强一些，然而不足之处就是测试属于一次性的，难以进行重复利用。故而，在还未寻找到更好的方式之前，联合测定就成为了临床中相对更好的一类测定措施。虽然在当前的临床中有着较多的肺癌诊断肿瘤标志物，然而均有比较高的成本消费，若是不能更好的选择，则极容易导致医疗资源的浪费和病人的负担增大，更不利于医患关系的良好维持。我相信，医疗测定技术的不断发展和提高，必定会帮助我们去选用最好的模型去应用到相关分析中，寻找到可以达到临床需求的肿瘤标志物群。第二章材料与方法§2.1标本来源选取自本课题将收集郑州地区2017年3月到2018年3月住院65例原发性肺癌确诊患者，其中，男性和女性病人分别为45和20例，在年龄方面是从37-81岁之间，平均年龄是65.3岁，这些病人全都采用了术后病理和纤维支气管镜病理等方式予以确诊，主要分为肺鳞癌（32例）、肺腺癌（24例）以及小细胞肺癌（9例）。而在肺部良性疾病组中共选择了30例，其中，男性和女性病人分别为20和10例，在年龄方面是从27-88岁之间，平均年龄是53.7岁，主要分为肺炎、肺结核、炎性假瘤、肺脓肿以及支气管扩张等多种病症，这些病人全部通过了临床或者是病理性的确诊。§2.2仪器与试剂一、实验仪器：在此次实验中所使用的仪器主要包括离心机、电热水浴恒温箱、酶标仪、低温冰箱、微量加液枪以及离心管等二、药物和试剂：虽然说在CEA药物、CA125药物、CYFRA21-1药物以及相关试剂方面存在着一定的差异，主要包括酶联板、密封袋、酶标包被板、标准品、标准品稀释液以及酶标试剂等等，并且此类试剂均选择了的环境予以2-8保存。§2.3实验方法§2.3.1CEA标本测定方法在测试开始之前要将各类所需试剂慢慢的平衡至室温状态，在对于试剂等进行稀释的时侯应先给予充分的混合，并预防气泡的产生。在测试之前还要先对于样品含量进行预估，以确保样品的浓度与试剂盒所要求的相应范围是相互适合的，到最后再将之前的稀释情况予以考虑和正确的计算，最终获得待测样品的浓度。一、样品采集在清晨且空腹的前提下抽静脉血（5ml）置于试管中，并在4环境中实施3000离心处理得到上清液，然后置于-80的冰箱环境中予以储存。二、操作步骤1.对于标准样品实施稀释和加样处理：在酶标包被板上选出10个标准样品孔，对于1、2孔分别添加标准样品100与稀释溶液50，摇匀之后再分别抽取100液体，然后分别滴到第3、4孔中；接着对第3、4孔分别添加标准样品稀释溶液50，摇匀之后再分别抽取50液体并添加到第5、6孔内，并对第5、6孔分别加入稀释溶液50，并且摇匀；然后从第5、6孔中分别抽取50液体并添加到第7、8孔内，对于这两个孔要分别添加标准样品稀释溶液50，当摇匀之后再从中分别抽取50液体添加至第9、10孔内，最后还要对第9、10孔均添加50的稀释溶液，在摇匀之后，均抽取50液体弃除。通过上述的一系列操作之后，各个孔的浓度分别为1800、1200、600、300以及150。2.加样：先对空白孔与待测样品孔进行设置，这里的空白孔就是对照孔，即没有添加样品与酶标试剂的孔，而其他的操作步骤都是一样的。将40稀释溶液添加至酶标包被板的待测样品孔之内，再添加10的待测样品。在加样的时候应该将样品小心的添加至孔的底部，再予以摇匀。3.温育：采用封板膜予以封板，然后放在37的温育箱之内进行30的保存。4.配液：将浓缩的洗涤液采用蒸馏水进行30倍的稀释处理，然后备用。5.洗涤：将温育处理好的待测样品除去封板膜，将其中的液体除去并甩干，添加洗涤液并放置半分钟之后予以甩干，此种洗涤方式连续进行5次，最后拍干酶标包被板。6.加酶：分别对酶标包被板的各孔添加50的酶标试剂，但空白孔不能添加。7.温育：再次封板并置入37的温育箱之内30。8.洗涤：将30温育之后的酶标包被板除去封板膜，将其中的液体除去并甩干。然后加入洗涤液并放置半分钟后进行甩干，重复此种洗涤共5次，最后予以拍干。9.显色：先将显色剂A50添加到孔中，然后添加显色剂B50，予以摇匀后置于37且避光的环境中进行15的反应。10.终止反应：分别对于各个标准孔添加50的终止液，而这一终止反应的参考准则就是其中的溶液自蓝色变为黄色即可。11.检测：在酶标仪中，先将空白孔当做是对照标准来实施调零设置，然后在450nm波长位置去检测各孔所形成的吸光度（也就是值）。这一检测的时间应该在添加了终止液之后的15之内实施。12.计算：对于坐标图予以绘制，其中的横坐标即标准物浓度，而纵坐标则为值，另外还要绘制标准曲线，并按照各值即能够自标准曲线图中查到相应浓度，再和之前的稀释倍数进行计算之后就得出了样品的实际浓度。§2.3.2CA125标本测定方法在测试开始之前要将各类所需试剂慢慢的平衡至室温状态，在对于试剂等进行稀释的时侯应先给予充分的混合，并预防气泡的产生。在测试之前还要先对于样品含量进行预估，以确保样品的浓度与试剂盒所要求的相应范围是相互适合的，到最后再将之前的稀释情况予以考虑和正确的计算，最终获得待测样品的浓度。一、样品采集在清晨且空腹的前提下抽静脉血（5ml）置于试管中，并在4环境中实施3000离心处理得到上清液，然后置于-80的冰箱环境中予以储存。二、操作步骤1.对于标准样品实施稀释和加样处理：在酶标包被板上选出10个标准样品孔，对于1、2孔分别添加标准样品100与稀释溶液50，摇匀之后再分别抽取100液体，然后分别滴到第3、4孔中；接着对第3、4孔分别添加标准样品稀释溶液50，摇匀之后再分别抽取50液体并添加到第5、6孔内，并对第5、6孔分别加入稀释溶液50，并且摇匀；然后从第5、6孔中分别抽取50液体并添加到第7、8孔内，对于这两个孔要分别添加标准样品稀释溶液50，当摇匀之后再从中分别抽取50液体添加至第9、10孔内，最后还要对第9、10孔均添加50的稀释溶液，在摇匀之后，均抽取50液体弃除。通过上述的一系列操作之后，各个孔的标准样品浓度分别为360、240、120、60以及30。2.加样：先对空白孔与待测样品孔进行设置，这里的空白孔就是对照孔，即没有添加样品与酶标试剂的孔，而其他的操作步骤都是一样的。将40样品稀释溶液添加至酶标包被板的待测样品孔之内，再添加10的待测样品。在加样的时候应该将样品小心的添加至孔的底部，再予以摇匀。这个时候的样品稀释倍数就是5倍。3.温育：采用封板膜予以封板，然后放在37的温育箱之内进行30的保存。4.配液：将浓缩的洗涤液采用蒸馏水进行30倍的稀释处理，然后备用。5.洗涤：将温育处理好的待测样品除去封板膜，将其中的液体除去并甩干，添加洗涤液并放置半分钟之后予以甩干，此种洗涤方式连续进行5次，最后拍干酶标包被板。6.加酶：分别对酶标包被板的各孔添加50的酶标试剂，但空白孔不能添加。7.温育：再次封板并置入37的温育箱之内30。8.洗涤：将30温育之后的酶标包被板除去封板膜，将其中的液体除去并甩干。然后加入洗涤液并放置半分钟后进行甩干，重复此种洗涤共5次，最后予以拍干。9.显色：先将显色剂A50添加到标准孔内，然后添加显色剂B50，予以摇匀后置于37且避光的环境中进行15的显色反应。10.终止：分别对于各个标准孔添加50的终止液，而这一终止反应的参考准则就是其中的溶液自蓝色变为黄色即可。11.检测：在酶标仪中，先将空白孔当做是对照标准来实施调零设置，然后在450nm波长位置去检测各孔所形成的吸光度（也就是值）。这一检测的时间应该在添加了终止液之后的15之内实施。12.计算：对于坐标图予以绘制，其中的横坐标即标准物浓度，而纵坐标则为值，并绘制标准曲线，并按照各值即能够自标准曲线图中查到相应浓度，再和之前的稀释倍数进行计算之后就得出了样品的实际浓度，并且给予详细记录。§2.3.3CYFRA21-1标本测定方法一、样品采集在清晨且空腹的前提下抽静脉血（5ml）置于试管中，并在4环境中实施3000离心处理15，进而得到上清液，然后置于-80的冰箱环境中予以储存。二、操作步骤在测试开始之前要将各类所需试剂慢慢的平衡至室温状态，在对于试剂等进行稀释的时侯应先给予充分的混合，并预防气泡的产生。在测试之前还要先对于样品含量进行预估，以确保样品的浓度与试剂盒所要求的相应范围是相互适合的，到最后再将之前的稀释情况予以考虑和正确的计算，最终获得待测样品的浓度。1.加样：先对于空白孔、标准孔以及待测样品孔进行设置。把待测样品滴入酶标板孔的底部，避免碰到孔壁和形成气泡，在空白孔内加入100的样品稀释溶液，而在标准孔与待测样品孔中分别添加100的标准样品与待测样品，然后摇匀并封盖覆膜。2.温育：将封好的酶标板然后放在37的温育箱之内进行120的温育处理。3.添加测定溶液A：将温育处理后的酶标板开封并弃除孔中的液体，在甩干之后无需洗涤便分别添加100的测定溶液A，然后封膜并置于37温育60。4.洗涤：将再次温育处理后的酶标板孔中液体甩干，并进行3次、每次2的重复洗板，最终予以拍干。5.添加测定溶液B：将100测定溶液B分别添加到各孔中，然后予以覆膜并实施37的60温育处理。6.洗涤：将温育处理后的酶标板孔中液体弃除，并实施连续5次、每次2的洗涤，最终予以甩干。7.加底物：按照顺序对各个孔添加90的底物溶液。8.显色：将酶标板封膜之后放在37中予以避光显色反应。而显色的标准则是能够观察到前3到4孔中出现较为明显的梯度蓝色，但后面的3到4孔则不是非常明显，此时就能够终止反应。9.终止显色：按照次序对各个酶标板孔中添加50的终止溶液，从而将显色反应予以终止。这个时候则能够观察到孔中的溶液从蓝色变成了黄色。10.测定值：此种测定需要在终止反应之后的15之内完成，主要是采用酶标仪处于450nm波长位置去测定各个孔的值。11.计算：对于坐标图予以绘制，其中的横坐标即标准物浓度，而纵坐标则为值，并绘制标准曲线，并按照各值即能够自标准曲线图中查到相应浓度，再和之前的稀释倍数进行计算之后就得出了样品的实际浓度，并且给予详细记录。§2.4统计分析方法全部测试数据计量资料都使用x±s予以表示，而计数资料则使用统计实施方差剖析。当时则代表了差异存在统计学意义。第三章结果与讨论§3.1结果§3.1.1标本男女分布结果恶性组与良性组共有标本95例，其中男性有65例，女性有30例。图1标本男女分布§3.1.2恶性疾病分类情况恶性疾病共65例，其中包括鳞癌32例，腺癌24例，小细胞癌9例。图2恶性疾病分类§3.1.3肺癌组和良性病变组的检测结果从下表3-1中得出：血清、和的含量，在肺部良性病变组中的表现都处于正常的范围中，而在肺癌组中，各种指标都比正常值要高一些，两者对比具有明显的差异（）。表3-1组别例数（）（）（）肺良性病变组302.26±0.584.24±1.0622.18±3.63肺癌组6510.01±2.1912.33±2.53131.48±28.33注：P<0.05§3.1.4肺癌不同病理类型与肺部良性病变组的比较从下表3-2中能够得出：血清中的含量在小细胞癌内有着比较高的表达水平，而在肺鳞癌、肺腺癌和肺部良性病变组之间的对比则有着明显的差异；主要是在小细胞癌组有着最高的表达水平，和肺部良性病变组存在着比较明显的差异，主要是在肺鳞癌组中有着比较高的表达水平。鳞癌组和良性病变组相比较有显著差异，腺癌与良性病变组比较有显著差异，小细胞癌与良性病变组比较有显著差异。表3-2组别()（)（）肺部良性病变2.26±0.584.24±1.0622.18±3.63鳞癌9.75±2.77*12.07±2.91*133.53±26.18*腺癌10.17±1.66*12.57±1.82*130.65±29.70*小细胞癌10.53±0.49*12.61±2.89*126.38±34.31*注：P＜0.05§3.1.5肺癌不同病理类型之间的比较鳞癌与腺癌比较P＞0.05，差异无统计学意义；鳞癌与小细胞癌比较P＞0.05，差异无统计学意义；小细胞癌与腺癌比较P＞0.05，差异无统计学意义。§3.1.6三项标志物的敏感性、特异性和准确性的比较表3-3数据中真假阳性、真假阴性的分布组别CEACA125CYFRA21-1恶性组5（假阴性）4（假阴性）3（假阴性）60（真阳性）61（真阳性）62（真阳性）良性组4（假阳性）2（假阳性）0（假阳性）26（真阴性）28（真阴性）30（真阴性）对于肿瘤标志物实施单项测定的时侯会出现一些缺陷，比如说敏感性比较低以及精准度比较差等，在下表3-4中得出：联合测定三项标志物在精准度和敏感性两方面均有很大的提升，分别实现了92.5和92.0，反映出联合测定对于肺癌具有着非常强的诊断意义。表3-4肿瘤标志物敏感性（%）特异性（%）准确性（%）CYFRA21-191.310090.7CEA90.886.790.5CA12591.393.391.6三项联合检测92.594.192.0§3.2讨论肺癌还被叫做原发性支气管肺癌，属于临床中的一类非常多见的恶性肿瘤，大部分的起源位于肺实质支气管黏膜或者是腺体。从病理学分类来讲，肺癌可分成两大类：小细胞肺癌、非小细胞肺癌，而后者又能够分成鳞癌、腺癌、大细胞癌以及腺鳞癌等多种；若是从解剖方面来分，则包括中央型和周围型两大类肺癌。对于肺癌进行治疗的时候，治疗方法的选择常常根据肿瘤的病理组织学类型与解剖部位来决定，并且还考虑了病人年龄和营养等多种特点去制订针对性的治疗方式。在最近的几十年里，和肺癌有关的诊断与治疗方式也有着飞速的发展，然而，肺癌病人在预后方面并未产生显著的提升。现如今，影响肺癌病人五年生存率的最大因素就是可不可以早期的、及时的和有效的实施手术治疗，而是不是可以实施更有效的手术治疗，就和病人在就诊时的临床分期存在着较大的关系。因此说，急需根据病人的临床情况、检查情况等去实施早期的精准诊断，进而才能够对于病人实施最好的治疗，有效的提升病人的生存质量与延长寿命。对于早期肺癌来讲，由于在特异性临床表现方面存在着欠缺，对其实施的诊断也主要是依靠着物理检查与影像学检查，等病理学方面的诊断被明确的时侯，则往往发展成了中期或者是晚期，也就失去了手术的最好机会，造成医疗成本的升高，疗效的降低，并且在病人的预后方面也比较差。由在1978年的时候提出了肿瘤标志物，其属于肿瘤细胞在增殖的时候形成了特殊的或者是异常的代谢产物，通常是酶、抗原或者是激素等物质，并且存在于肿瘤病人的血液、组织细胞或者是排泄物中，可以对于肿瘤的产生、发展以及疗效给予更有效的评测，主要是使用免疫方式、生物方式以及化学方式等措施去进行检测。对于恶性肿瘤来讲，肿瘤标志物可以在早期就显现出不正常的表达水平，故而对于早期的肺癌诊断、疗效的评判以及预后的评测等均有着非常重要的意义。通常情况下的肿瘤标志物有着下面的几个特点：1.属于恶性肿瘤细胞特有的或者是不正常的代谢产物；2.对于恶性肿瘤细胞的组织学类型会呈现出特异性；3.可以在恶性肿组织或者是宿主的血液及分泌物等方面检测出来，从而反映了肿瘤的存在。现如今，临床中并没有寻找到针对于肺癌的肿瘤标志物，故而，采用联合测定方式则可以起到优势互补的效果，对于诊断率与检出率的提高都是非常有帮助的。属于内胚层上皮组织细胞的胞浆中富含多糖的酸性蛋白复合物，其拥有着免疫抑制与促使肿瘤转移等多种功效。最初是在结肠癌和胎儿组织内被找到的，并且在消化系统来源的相关恶性肿瘤内具有着非常高的存在几率，有些时候也和炎症有着正性相关的关系，也常表现出轻微的上升，也或者是一过性的上升表现，在健康人的血清内也能够被测出微量存在。在一些研究者的探究中得出，肺癌组织细胞能够形成，并且是40-80的肺癌病人会出现阳性表现，成为了临床中最早使用在肺癌检查中的一类肿瘤标志物，尤其是在肿瘤突破了基底膜的时侯，的升高幅度则是更为显著，而且会和病灶的大小、转移程度以及分期有着紧密的关系。当采用手术方式将病灶切除之后，则血清内的水平会出现显著的降低。然而，具有着比较差的特异性，在敏感性方面也是较低的，故而在单项测定方面则没有很大的意义，通常会使用到结肠癌和肺癌等相关疾病治疗情况的评价及预后评估等方面。在此次探究中得出：肺癌病人的血清水平要比肺部良性组病人有着显著上升的表现（且），其中的肺腺癌病理学类型则有着最高的表达水平，反映出对于肺癌的诊断、鉴别等方面均有着较大的现实意义。普遍存在于由体腔上皮以及此类组织所产生的肿瘤内，多存在于恶性组织细胞内。在临床中，主要是卵巢癌诊断与监测复发而多使用的一类肿瘤标志物。因为肺腺癌免疫细胞形成与的单克隆抗体识别分子可以被卵巢癌免疫细胞株所形成的单克隆抗体识别分子所识别，故而，肺癌病人在血清水平方面也就会出现显著的上升。的表达水平和肺癌病人的诊断有着较大的相关性，并且和肿瘤细胞的分化程度、治疗情况以及预后评估等方面都有着密切的关系。在病人血清中的有着比较高的含量时，则其生存期也会短一些，而晚期肺癌病人的血清中显著上升就可以当做是一个单独指标实施预后评估。在一些报道中称，在肺癌病人进行手术治疗之后，其血清中的的含量就会慢慢降低，并且这一现象和病人的其他情况没有相关性。经由此次研究后得出：肺癌病人在血清水平方面和肺部良性疾病病人相对比出现了显著上升的趋势（），并且是在肺腺癌病人中有着最高的表达水平，而肺鳞癌组与小细胞肺癌组也存在着一定的上升情况。在1987年的时候，由发现了肿瘤标志物，其属于恶性肿瘤细胞在分化和增殖等相关过程中所形成的可溶性酸性蛋白成分的片段，而半衰期只有24小时左右。多分布于单层和复层鳞状上皮细胞的胞浆内，当恶性肿瘤细胞被蛋白酶所影响之后，就会产生很多的，主要是一种难以溶解的片段，从而存在于血清中[15]。在最近的几年里，多用在非小细胞肺癌的测定中，但是并不是肺癌的特异性标志物，却是在肺癌组织内有着更加丰富的含量。所以说，当肺癌病人的血清中水平升高的时候就反映出非小细胞癌存在的可能，也成为了检测此类肺癌的首选肿瘤标志物[16~17]。当肺癌病人采用手术或者是放化疗治疗之后，若肿瘤的体积在不断变小，则血清内所含的数量也会出现显著的减小，当治疗效果非常好的话，则血清中的含量往往可以在15d左右慢慢恢复到正常水平，而此类病人在预后方面也是非常好的。但是，当Ⅳ期病人在手术之后依旧高于临界值，那么就会有比较差的预后。故而，对于血清中的含量实施测定，不但可以对早期的肺癌诊断有很大的帮助，还能够对于疗效及预后的评测也产生相同的重要意义。在此次研究中得出：肺癌组中病人的血清水平要比肺部良性疾病组有着显著的上升表现（且）。、以及身为肺癌的三种重要检测标志物，在血清检测水平方面都要比肺部良性疾病组更高一些。然而，在采用单一标志物测定时，对于肺癌检测的符合机率则有着不稳定表现，在经由联合测定方式之后则起到了优势互补的良好功效，在敏感性、特异性以及精准性等方面均有着大幅度的提高，表明联合检测诊断肺癌有意义。由于CYFRA21-1和CEA在小细胞癌中表达率较高，CA125对于鳞癌检测有着最高的阳性率，对于临床内有病理学诊断的肺癌确诊病人有着多种方面的检测和判断的参考意义。如果在临床中发现病人出现了此三类标志物的显著上升时，就应该考虑到存在肺癌的可能性，此时就应该实施更深入的影像学等检查，从而对于是不是患有肺癌予以确诊。另外，在这方面应该注意的问题是，采用肺癌肿瘤标志物检测的方式是不可以完全替代病理学检测的。经由联合、以及可以提升肺癌检测的敏感性与精准性，并且对于肺癌的类型判断也有着相应的参考意义，使用动态测定方式能够帮助认识病情发展改变情况，以及能够评估肿瘤复发与转移等多方面的情况。若在标志物表达为阳性时，就应该给予进一步的检查，从而达到早发现和早治疗的目的，最终让疗效得以提升，甚至是实现临床上的治愈等理想目标。

结论、以及身为肺癌的三种重要检测标志物，在血清检测水平方面都要比肺部良性疾病组更高一些。然而，在采用单一标志物测定时，对于肺癌检测的符合机率则有着不稳定表现，在经由联合测定方式之后则起到了优势互补的良好功效，在敏感性、特异性以及精准性等方面均有着大幅度的提高，表明联合检测诊断肺癌有意义。由于CYFRA21-1和CEA在小细胞癌中表达率较高，CA125对于鳞癌检测有着最高的阳性率，对于临床内有病理学诊断的肺癌确诊病人有着多种方面的检测和判断的参考意义。如果在临床中发现病人出现了此三类标志物的显著上升时，就应该考虑到存在肺癌的可能性，此时就应该实施更深入的影像学等检查，从而对于是不是患有肺癌予以确诊。另外，在这方面应该注意的问题是，采用肺癌肿瘤标志物检测的方式是不可以完全替代病理学检测的。使用联合测定方式去对血清的、和等肿瘤标志物予以检查，进而可以让肺癌的检出率升高，使其临床诊断的敏感性与精准性也得以升高，对肺癌的病理种类鉴别也有很大帮助，这对于郑州地区的病人来讲也是具有较强现实意义的。

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附录附录1原始数据编号性别年龄疾病CEACA125CYFRA21-11男69肺鳞癌13.290140.359.672男65肺鳞癌13.790136.809.293男64肺鳞癌4.420138.6012.504男37肺鳞癌13.200139.5010.845男71肺鳞癌12.020134.983.906男78肺鳞癌12.250135.6511.577男79肺鳞癌13.420129.8010.828男76肺鳞癌4.470141.8011.429男68肺鳞癌12.550134.9411.9210男68肺鳞癌13.180139.3110.9711男56肺鳞癌13.840137.209.2612男66肺鳞癌13.870140.2210.0813男67肺鳞癌14.73034.913.9614男45肺鳞癌13.390137.9011.4115男69肺鳞癌12.690147.849.1916男76肺鳞癌13.770145.309.9617男76肺鳞癌4.710146.4110.1118男68肺鳞癌12.660148.309.8919男66肺鳞癌12.810136.0115.9020男67肺鳞癌13.180145.703.9521男71肺鳞癌12.840136.509.2922男79肺鳞癌4.870143.5010.8923男67肺鳞癌13.210138.409.3124男70肺鳞癌12.730137.0010.8325男74肺鳞癌13.420139.4010.68编号性别年龄疾病CEACA125CYFRA21-126男75肺鳞癌12.80034.9511.5127男80肺鳞癌13.730141.409.3628男77肺鳞癌12.390139.609.9029男63肺鳞癌13.390137.3011.8030男65肺鳞癌12.430143.0010.5431男75肺鳞癌4.910143.609.7532男65肺鳞癌13.430143.359.9433男76肺腺癌12.910137.6010.0634男70肺腺癌13.960134.0010.1135男66肺腺癌13.450139.519.6836男73肺腺癌12.570143.4411.7337男77肺腺癌13.050142.349.6738男69肺腺癌13.060136.6010.7739男67肺腺癌13.160137.1010.1440男68肺腺癌12.20034.909.9141男72肺腺癌12.590139.709.5342男70肺腺癌12.000141.3410.0343男68肺腺癌12.200137.009.5044男66肺腺癌13.520139.0011.9745男69肺腺癌12.910142.109.6146女67肺腺癌12.750141.009.9447女38肺腺癌13.92034.9810.3448女80肺腺癌13.350137.4011.5349女66肺腺癌13.200136.809.9150女68肺腺癌13.210147.509.2451女71肺腺癌13.670144.3011.8052女70肺腺癌12.290134.5011.4353女72肺腺癌13.780139.3011.8654女77肺腺癌12.790138.1011.53编号性别年龄疾病CEACA125CYFRA21-155女66肺腺癌11.490137.703.9656女68肺腺癌11.700136.209.2757女63小细胞癌13.720136.5011.0758女62小细胞癌13.490134.9010.4459女65小细胞癌13.420137.1011.2460女64小细胞癌12.920137.8010.4061女68小细胞癌13.470138.0010.1862女71小细胞癌13.930138.1010.6463女70小细胞癌13.760138.409.9464女60小细胞癌13.300138.6010.9765女63小细胞癌13.470138.009.90编号性别年龄疾病CEACA125CYFRA21-11男60良性疾病4.03020.421.972男66良性疾病5.93021.651.743男63良性疾病4.50020.973.344男61良性疾病4.29020.591.535男62良性疾病4.23022.622.246男63良性疾病4.78035.291.807男60良性疾病4.52022.771.438男65良性疾病4.41020.791.809男67良性疾病4.66820.751.8610男70良性疾病5.22022.711.5311男68良性疾病3.66820.803.2712男71良性疾病4.89021.032.5913男88良性疾病0.97320.853.3714男66良性疾病3.29020.712.4415男65良性疾病4.11021.742.4016男64良性疾病1.26022.142.64编号性别年龄疾病CEACA125CYFRA21-117男60良性疾病4.20020.852.7418男61良性疾病5.92021.001.9719男63良性疾病4.64022.281.9020男66良性疾病4.58021.651.4321女67良性疾病4.88021.611.6522女72良性疾病3.21020.902.0523女73良性疾病4.30020.842.1624女61良性疾病5.53035.283.3525女63良性疾病4.22020.812.1726女60良性疾病3.92021.812.7127女27良性疾病4.04020.412.8428女63良性疾病4.05020.422.2529女70良性疾病4.33020.392.4530女73良性疾病4.69021.372.18

附录2SPSS软件统计分析结果§3.1.3良性组与恶性组独立样本t检验§3.1.4肺癌不同病理类型与肺部良性病变组的单因素分析

§3.1.5恶性组独立样本t检验

外文资料译文和原文血清肿瘤标志物在肺癌中的临床评价和治疗监测价值摘要背景：肿瘤标记为cyfra21-1，CEA，NSE，CA125，支持grp和SCC通常用于肺癌。然而，在同一队列中并没有对这些标记进行系统的评估。本研究的目的是评估这些标记的诊断和治疗监测价值。方法：在392例患者中测量了6例血清肿瘤标志物，包括308例非小细胞肺癌（NSCLC）和84例小细胞肺癌（SCLC），116例良性肺部疾病患者和144例健康对照。在手术和化疗后随访了34个病人。使用多种逻辑模型和接收机操作特征（ROC）曲线来评估它们的诊断值。结果：NSCLC中CEA，NSE，CA125和pro-GRP，NSCLC中CYFRA21-1和CEA均高于对照组。CEA和CA125的水平与非小细胞肺癌的临床分期有关。广泛性疾病（ED）中的Pro-GRP显着高于SCLC中的限制性疾病（LD）。CYFRA21-1在接受手术和未手术的患者中分别在第三和第五治疗周期后减少。NSE和pro-GRP在第二和第三治疗周期后分别显着降低。结论：CEA，NSE，CA125和pro-GRP可作为SCLC的生物标志物，CEA和CYFRA21-1可作为NSCLC的生物标志物。Pro-GRP，CA125和CEA与肺癌的临床分期有关。CY-FRA21-1，NSE和pro-GRP可用于监测化疗的效果。关键词：诊断，肺癌，治疗监测，肿瘤标记物

1.介绍肺癌是最常见的呼吸道恶性肿瘤之一，全球发病率和死亡率很高（1,2）。肺癌患者通常不会表现出明显的症状，特别是在早期阶段。超过60％的肺癌患者在晚期被诊断并错过了最佳的手术机会（3）。相应的5年生存率从第一阶段的60％-80％显著降低至晚期患者的10％以下（4）。因此，如果早期发现肺癌，目前的高死亡率将显著降低。在可用的肺癌检测方法中，光纤支气管镜被推荐为高风险患者最可靠的工具。然而，它的广泛应用受到阻碍，因为它不容易重复，并且会对患者造成身体伤害。传统的影像检查如胸片，计算机断层扫描和细胞学检查对于有效的早期诊断不够敏感（5）。血清肿瘤标志物已被证明是优秀的候选者，并被临床医生广泛用于癌症的早期诊断。几项研究也证实了血清肿瘤标志物在肺癌诊断，预后和随访中的重要性（6-9）。美国国家临床生物化学学会（NACB）实验室医学实践指南推荐癌胚抗原（CEA），鳞状癌抗原（SCC），神经元特异性烯醇化酶（NSE），细胞角蛋白片段（CYFRA21-1），碳水化合物抗原125（CA125）胃泌素释放肽（pro-GRP）作为肺癌的常规标志物。然而，在同一队列中没有对这6个标记进行系统评估。在本研究中，我们测量了肺癌患者，肺部良性疾病患者和健康对照患者中这6种肿瘤标志物的水平，并分析了它们在不同类型肺癌中的诊断价值。还研究了肺癌患者与临床分期之间的关系。同时，我们收集患者手术前或化疗后的血清，评估肿瘤标志物在肺癌治疗监测中的价值。

2.材料和方法2.1.患者和对照受试者从每个参与者获得静脉血液样本的书面知情同意。在2010年5月至2013年9月期间，所有肺癌和良性肺部疾病患者都从山东大学的综合外科和胃肠科和化疗部招募。健康对照组由山东大学齐鲁医院物理考试中心注册。所有肺癌患者均经组织病理学或细胞学证实。肿瘤是根据国际癌症控制联盟（UICC）2009年肺癌分级的。所有随访的病人都被临床医生确认为缓解期。术前血液样本是在手术、化疗或放射治疗等治疗程序之前收集的。术后的血液样本在每次手术后7天，以及随后的化疗。通过标准的诊断方法或组织学检查，诊断出肺部良性疾病的患者，包括肺结核、胸膜积液、肺炎、肺结核和支气管扩张。年龄和性别匹配的健康控制是从大量健康个体中招募来进行例行体检的。2.2.样品收集和测量简单地说，每个参与者都收集了5毫升的静脉血液。整个血液在2小时内被离心分离为血清和细胞分数，每分钟4000转，10分钟。整个过程被严格控制以避免溶血。在进一步分析之前，获得的血清被储存在-80℃使用电化学发光免疫分析法在RocheCobase601分析仪上测量CEA，NSE，CA125，CYFRA21-1和pro-GRP浓度。在ARCHITECTi2000SR分析仪上使用化学发光免疫分析法测量SCC浓度。2.3.统计分析统计分析是使用SPSS17.0（SPSS，芝加哥，美国，美国）进行的。这些数据被描述为中值、最小值、25、75、95和最大值。曼-惠特尼测试用于比较两组间血清肿瘤标志物水平的差异。采用sigd-秩测试来比较肿瘤标记在手术前、术后和化疗后的水平差异。采用多元逻辑回归分析方法，选择肿瘤标志物的最佳组合。摘要建立了接收机操作特征（ROC）曲线，并利用ROC曲线（AUC）的区域来评价肿瘤标志物的诊断性能。MedCalc软件用于生成ROC曲线。

3.结果3.1.肺癌，良性肺病和健康对照组肿瘤标志物的比较与良性肺疾病患者和健康对照组（p小于0.05）相比，肺癌患者的肺肿瘤的表现明显高于良性肺癌患者和健康控制组（p小于0.05）在三组中没有明显的SCC浓度差异。肺癌组被分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）。结果表明，在小细胞肺癌组织中，CEA、NSE、CA125和促grp水平，以及在NSCLC组中的cyfra21-1和CEA，均高于良性肺部疾病和健康对照组（p小于0.05）。在鳞状细胞肺癌组中，鳞状细胞癌的表现比在良性肺疾病和健康对照组（p=0.001和p=0.024）的表现要高。鳞状细胞肺癌组中SCC的诊断值显示在表II中。在NSCLC和SCLC组中，SCC的表达水平与良性肺部疾病和健康对照组（p-0.05）没有显著差异。因此，SCC被排除在进一步的诊断价值评估之外。3.2.肿瘤标志物在不同类型肺癌诊断中的作用使用ROC方法评估CYFRA21-1，CEA，NSE，CA125和pro-GRP在肺癌，NSCLC和SCLC组中的诊断值。表2列出了上述6种肿瘤标志物的AUC，灵敏度（95％特异性）和临界值。结果显示，根据AUC和敏感性，SCLC组NSE和pro-GRP的诊断价值优于CEA和CA125（p<0.05）。然而，在肺癌组和NSCLC组之间，标记的诊断效率没有统计学差异（p>0.05）。3.3.不同类型肺癌肿瘤标志物的最佳组合采用逐步回归分析方法选择NSCLC和SCLC的最佳组合，建立诊断专家组。NSE，CA125和pro-GRP被认为是SCLC患者的最佳组合标记物。同时，CYFRA21-1和CEA是NSCLC患者的最佳组合标志物。使用以下等式计算SCLC的预测诊断概率：logit（P）=-10.483+0.184*NSE+0.074*CA125+0.107*pro-GRP。ROC分析显示SCLC组的AUC和灵敏度（95％特异性）分别为0.979和91.4％。SCLC组的诊断价值优于CA125（p<0.05），但NSE和pro-GRP之间无统计学差异（p>0.05）。使用以下等式计算NSCLC的预测诊断概率：logit（P）=-2.271+0.475*CYFRA21-1+0.288*CEA、AUC和灵敏度（at=95％特异性）NSCLC组分别为0.797和43.6％。非小细胞肺癌组的诊断价值优于CEA（p<0.05），但与CYFRA21-1无统计学差异（p>0.05）。3.4.肿瘤标志物在NSCLC和SCLC中的鉴别诊断价值比较6种肿瘤标志物在NSCLC和SCLC组中的表达。结果显示，SCLC组的NSE和pro-GRP水平显着高于NSCLC组（表I）。使用以下等式计算预测的NSCLC和SCLC的鉴别诊断概率：logit（P）=-6.481+0.023*NSE+0.094*pro-GRP。图1显示，NSE，pro-GRP和两种标志物组合用于NSCLC和SCLC的鉴别诊断的AUC和灵敏度（在95％特异性）分别为0.926,0.932和0.940，和71.9％，90.6％和90.8％分别。NSE，pro-GRP和两种标志物的组合在鉴别诊断价值上没有统计学显着性差异。3.5.肿瘤标志物与肺癌临床分期的关系在阶段II-IV中CEA的表达显着高于阶段I（p=0.003，p=0.005和p=0.009，分别）。IV期患者CA125水平高于I期（P<0.001），II期（P=0.018）和III期（P=0.037）;而在第三阶段，它高于第一阶段（p<0.001）。在广泛性疾病（ED）中，SCLC的pro-GRP表达比有限的疾病（LD）高（P=0.009）。然而，肺癌不同阶段的CY-FRA21-1和NSE水平无统计学差异（p>0.05）并且在未进行手术的患者的化疗的第五周期后（p<0.05）。NSE和pro-GRP分别在化疗的第二和第三周期后显着降低（p<0.05）。治疗前和治疗后CA125和CEA水平无统计学差异。

4.讨论肺癌在全球死亡率很高（1）。早期发现和及时治疗可显着改善肺癌患者的预后和延长生存时间。已经证明肿瘤标