抑菌效力检测方法对比表

引用方法消毒技术规范2.1.11一次性使用卫生用品鉴定试验2.1.11.3产品杀菌性能、抑菌性能及其稳定性鉴定2.1.11.3.2溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能测试方法中华人民共和国药典2015版药典通则1121抑菌效力检查法中华人民共和国药典2015版药典通则1201抗生素微生物检定法培养基名称吕养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基营养琼脂培养基菌种名称细菌：金黄色葡萄球菌(ATCC6538)大肠杆菌(8099或ATCC25922)；酵母菌：白色念珠菌(ATCC10231)。金黄色葡萄球菌CCMCC(B)26003铜绿假单胞菌CCMCC(B)10104大肠埃希菌CCMCC(B)44102白色念珠菌CCMCC(F)98001黑曲霉CCMCC(F)98003枯草芽孢杆菌CCMCC(B)63501、短小芽孢杆菌CCMCC(B)63202、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003或ATCC29213、藤黄微球菌CCMCC(B)28001、大肠埃希菌CMCC(B)44103、啤酒酵母菌ATCC9763、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117、支气管炎博德特菌CMCC(B)58403准备准备将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用100如滴于对照样片上或5ml样液内，回收菌数为1X104cfu/片或ml〜9X104cfu/片或ml）。取被试样片（2.0cmX3.0cm）或样液（5ml）和对照样片或样液（与样片同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各4片（置于灭菌平皿内）或4管。铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物，加入适量的0.9%无菌麻化钠溶液将琼脂表面的培养物洗脱，并将菌悬液移至无菌试管内，用0.9%无菌麻化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；若为液体培养物，离心收集菌体，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释并、制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物加人3〜5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，加入适量的含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌麻化钠溶液制成每1ml含孢子数108cfu的孢子悬液。测定1ml菌悬液中所含的菌数。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时1、 标准品溶液的制备标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表1（见附件1）的规定进行稀释。标准品的品种、分子式及理论计算值见表2（见附件2）。2、 供试品溶液的制备精密称（或量）取供试品适童，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表1（见附件1）的规定稀释至与标准品相当的浓度。3、 双碟的制备取直径约90mm，高16~17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基（表1）20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至48〜50°C（芽孢可至60C），加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度）。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18〜22mm，三剂量法标准品溶液的中心浓度所实验操作实验操作取上述菌悬液，分别在每个被试样片或样液和对照样片或样液上或内滴加100Ml，均匀涂布/混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，用无菌镊分别将样片或样液（0.5ml）投入含5mlPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2个〜3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于2个平皿，用凉至40°C〜45°C的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（酵母内使用；若保存在2〜8°C，可在24小时内使用。黑曲霉的孢子悬液可保存在2〜8°C，在1周内使用。取包装完整的供试品至少5份，直接接种试验菌，或取适量供试品分别转移至5个适宜的无菌容器中（若试验菌株数超过5株，应增加相应的供试品份数），每一容器接种一种试验菌，1g或1ml供试品中接菌量为105〜106cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的1%，充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布，然后置20〜25C避光贮存。致的抑菌圈直径在15〜18mm，摇匀，在每1双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径为6.0mm±0.1mm*高为10.0mm±0.1mm，夕卜径为7.8mm±0.1mm）4个（二剂量法）或6个（三剂量法），用陶瓦圆盖覆盖备用。二剂量法：取照上述方法制备的双碟不得少于4个，在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2:1或4:1。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积），照生物检定统计法（通则1431）中的（2.2）法进行可靠性测验及结果计算存活菌数测定：根据产品类型，按表结果计算存活菌数测定：根据产品类型，按表2-1、表2-2、表2-3规定的间隔时间，分别从上述每个容器中取供试品1ml（g），测定每份供试品中所含的菌数，测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。存活菌数测定方法及方法适用性试菌）15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35°C±2°C培养48h（细菌）或72h（酵母菌），作活菌菌落计数。试验重复3次，按下式计算抑菌率：X二村°-N$乂100%NC式中：X为抑菌率，%；NC为对照样品平均菌落数，cfu/片；NS为被试样品平均菌落数，cfu/片。效价计算。三剂量法：照上述方法制备的双碟不得少于6个，在每1双碟中间隔的3个本锈钢小管中分别滴装高浓度（S3）、中浓度（S2）及低浓度（S】）的标准品溶液，其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为1:0.8。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积）照生物检定统计法（通则1431）中的（3.3）法进行可靠性测验及效价计算。二剂量法：照生物检定统计法（通则1431）中的（2.2）法进行可靠性测验及效价计算。三剂量法取：照生物检定统计法（通则1431）中的（3.3）法进行可靠性测验及效价计算。验照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）”进行，方法适用性试验用菌株见表1,菌液制备同培养基适用性检查，方法适用性试验试验菌的回收率不得低于70%。根据存活菌数测定结果，计算1ml（g）供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。结果判断供试品抑菌效力评价标准见表2-1、表2-2、表2-3,表中的“减少的lg值”是指各间隔时间测定的菌数lg值与1ml（g）供试品中接种的菌数lg值的相差值。表中“A”是指应达到的抑菌效力标准，特殊情况下，如抑菌剂可能增加不良反应的风险，则至少应达到“B”的抑菌效力标准。抑菌率N50%〜90%,产品有抑菌作用，抑菌率N90%抑菌率N50%〜90%,产品有抑菌作用，抑菌率N90%,产品有较强抑菌作用。■W的岫惘dli扣f.4d28dAj—NRB.一]3—NilA2-—NTAMB—*——1Ml也，NRr箕蠹菌正恢址生悦.N】=未地血.史尚对嫩-中奏崖ut间，氐输篇圮10曲牲好不培it0(4-*2-3耳用»0^.鼻牌制割，喜雎峭甫:U耐、

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附件1:抗生素类别试验菌培养基灭菌缓冲液抗生素浓度范围培养条件编号pH值pH值单位/ml温度时间/小时链霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.80.6 1.635 3714 16卡那霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.80.9 4.535 371416阿米卡星枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.80・94.535 3714 16巴龙霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.80-9 4-535 3714 16核糖霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.82.0 12.035 371416卷曲霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I7.8〜8.07.810.0 40.035 3714 16磺苄西林枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕I6.5 6.66.05.0 10.035 3714 16去甲万古霉素枯草芽抱杆菌〔CMCC(B>63501〕VIII6.06.09-043.735 3714 16庆大霉素短小芽抱杆菌〔CMCC(B)63202〕I7.8〜8.07.82.0 12.035 3714 16红霉素短小芽抱杆菌〔CMCC(B)63202〕I7.8〜8.07.85.020.035 3714 16新霉素金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕II7.8〜8.07.8®4.025.035 3714 16四环素藤黄微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.5 6.66.010.040.035 3714 16土霉素藤黄微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.010.040.035 371618金霉素藤黄微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.04.025.035 3716 18藏霉素藤黄微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.030.080.0335 3716 18杆菌肽藤黄微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.5 6.66.02.012.035 3716 18黏菌素大肠埃希菌〔CMCC(B)44103〕VI7.27.46.0614234435 371618两性霉素B®啤酒酵母菌(ATCC9763)IV6.06_210.50.5 2-035 372436

克拉霉素 短小芽抱杆菌〔CMCC(B)63202〕 I7.8〜8.07-82.0 8.035 3714 16大观霉素 肺炎克雷伯菌〔CMCC(B)46117〕 II7.8〜8.07.050 20035 3716 18吉他霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕II④8.08.27.820 4035 3716 18营养琼脂麦白霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B>63501〕培养基8.0 8.27.854035 371618小诺霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕 I7.8〜8.07.80.5 2.035371416多黏菌素B 克拉霉素 短小芽抱杆菌〔CMCC(B)63202〕 I7.8〜8.07-82.0 8.035 3714 16大观霉素 肺炎克雷伯菌〔CMCC(B)46117〕 II7.8〜8.07.050 20035 3716 18吉他霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕II④8.08.27.820 4035 3716 18营养琼脂麦白霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B>63501〕培养基8.0 8.27.854035 371618小诺霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕 I7.8〜8.07.80.5 2.035371416多黏菌素B 大肠埃希菌〔CMCC(B)44103〕营养琼脂6,56.6培养基6.01000400035 3716 18交沙霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕7.8〜8.07.87,5 3035 3714 16丙酸交沙霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕7.8〜8.07.820 8036 371416替考拉宁 金黄色葡萄球菌〔ATCC29213〕7.8〜8.07.810 20035 3716 18万古霉素 枯草芽抱杆菌〔CMCC(B)63501〕VIII6.06.02.512.535 3714 16附件2：标准品品种标准品分子式或品名理论计算值u/mg标准品品种标准品分子式或品名理论计算值u/mg链霉素(C21H39N7。12)2*3H2SO4798.3红霉素C37H67NO131000卡那霉素C18H36N4O11*H2SO4831.6氯霉素C11H12C12N2O51000阿米卡星C22H43N5O13^nH2S04⑴日8或2)杆菌肽杆菌肽锌核糖霉素C17H34N4O10.nH2SO4(n<2)黏菌素硫酸黏菌素新霉素硫酸新霉素去甲万古霉素C65H73Cl2N9O24•HC1975.2庆大霉素硫酸庆大霉素