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外泌体的鉴定方法近几年，外泌体相关研究受到越来越多的关注，涌现了一大批外泌体相关课题，那么研究外泌体相关的课题需要了解些什么呢？上期我们已经一起了解了外泌体的分离方法，光找到高效的分离方法是不够的，我们还需要对外泌体进行鉴定，证明你分离得到的就是外泌体，下面我们一起来了解一下，鉴定外泌体的方法有哪些吧！由于目前的分离技术是基于外泌体的大小、结构和一些膜蛋白的捕获，很难与其他囊泡和蛋白质区分开，所以需要进行外泌体鉴定，外泌体的鉴定主要依赖形态学特征、颗粒大小、标志性蛋白等。1、 电子显微镜检测方法：包括扫描电镜（SEM）和透射电镜（TEM），SEM是用能量为1-30KV间的电子束，以光栅状扫描方式照射到被分析试样的表面上，利用入射电子和试样表面物质相互作用所产生的二次电子和背散射电子成像，获得试样表面微观组织结构和形貌的高分辨率信息。TEM是把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射，形成明暗不同的影像。优点：能直接观察结构和形态，鉴别不同大小的外泌体，SEM可得到表面微观形貌，TEM可观察内部结构和形貌。缺点：样品的预处理和制备复杂，要求较高，无法准确测量外泌体浓度，固定会使外泌体结构收缩，所需设备昂贵。2、 动态光散射方法：将外泌体与微小囊泡的混合物悬浮，通过干涉光的散射，测量的光强波动随时间的变化来得出粒子粒径，准确度达0.3pm-1nm，对＜30nm的微小囊泡能精确的测量。优点：快速，准确，可重复性好，对单分散性粒子敏感度较高。缺点：大颗粒的光强波动信号会掩盖小颗粒的，不适合大小不一的复杂外泌体样本。3、 纳米颗粒示踪分析（NTA）方法：将收集的外泌体用PBS稀释，用注射器注入纳米颗粒示踪分析仪，激光光束穿过样本室外泌体颗粒，通过装有摄像头的显微镜实现颗粒可视化，捕捉外泌体的布朗运动，利用爱因斯坦方程式根据其运动计算浓度和流体力学直径。优点：样本处理简单，检测速度快，可直接、实时观察，对单分散性和多分散性粒子都较准确。缺点：测量下限仅为70nm，需特殊设备。4、 Westernblot法方法：利用外泌体表面特异性的蛋白标志物抗体和外泌体表面蛋白结合，进行SDS分离，将分离后的蛋白质转移到PVDF膜上，进行显影检测外泌体特异蛋白标志的表达量。优点：特异性高，操作技术成熟。缺点：不同细胞来源的外泌体，需要检测的标志物可能不同。5、 流式细胞术方法：用外泌体表面特异性标志物相应的抗体进行标记，用流式细胞仪检测其阳性表达，从而验证外泌体。如染色后的外泌体溶液加入分支聚乙烯亚胺(PEI)，37°C孵育15min，之后超速离心去除PEI，然后加入金纳米颗粒，轻柔重悬后置于培养箱中60min，加入别藻蓝蛋白(APC)DNA染料，室温孵育15min后流式细胞仪检测，APC阳性的颗粒即为所需检测的外泌体。优点：

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