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文档简介
A5491×106cells/mL1mL100mm↓24h(例如加药,照射↓↓PBS↓1000rpm5min(短时低速离心↓↓30min,或-20℃长久保存。↓1000r/min,↓PBS↓1000r/min,5min↓PBS,200ulPBS2ulRNA(ml)(37℃下30min)↓50ug/mlPI↓将离心管内的细胞过滤(300umPBSEP含有很强的粘附性,容易使细胞聚团),EP↓↓开机(先开仪器后开软件↓激光光源及光束成形系统;③光学系统;④信号检测、存贮、显示、分析系统;⑤细胞分选系统。↓↓↓↓荧光信号变成电信号输出到计算机,软件分析(DNA↓成果分析——Modfit ——FlowjoFCM-DNA量分析1DNA含量分布组方图分G0/1、S、G2M。G0/1G2MDNA正态分布,S期能够认为是一种加宽的正态分布↓↓关机(先关软件后关仪器,关机前需清洗DNA:2n-DNADNADNA2n(G1)。1CellNumber:即计数的有效细胞数;2DNAContent:DNA3、G1、G2、S期细胞数占总数的%;DipatG2DNAG2AnnexiV-EGFP/P双染法检测细胞凋结合;PIPI凋亡早期:膜完整,PSPI-/AnnexinⅤ+几乎不存在膜构造——-1×106cells/mL1mL↓24h(例如加入药品↓↓375min(胰酶消化时间不易过长,以防引发假阳↓PBS(6-8↓倒置显微镜下观察细胞状态(单个分离悬浮↓15ml↓rpm5min,PBS↓PBS2(rpm,5min↓400ul1×BindingBuffer1×106↓在细胞悬液中加入5ulAnnexinV-EGFP,轻轻混匀后于2-8℃避光条件下孵育15min↓加入10ulPI后轻轻混匀,于2-8℃避光条件下孵育5↓在1hEx.=488nm510nmEGFP(FL1channel)和>575nmPI在流式细胞术双参数散点图上左下象限显示活细胞(AnnexinV-/PI-);右上象限是非活细胞,
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