草花覆盆颗粒干预IgA肾病大鼠NF-kB、FN的实验研究

草花覆盆颗粒干预IgA肾病大鼠NF-kB、FN的实验研究目的:通过应用草花覆盆颗粒对IgA肾病大鼠进行药物干预治疗,观察IgA肾病大鼠的一般情况、生化指标、病理改变以及核转录因子-kB（NF-kB）和纤维连接蛋白（FN）表达的变化,探讨草花覆盆颗粒干预IgA肾病的作用机制。方法:1.模型复制实验:将20只体重在（150±30）g的清洁级（SD）大鼠在标准的实验室环境中适应性饲养1周后随机分为A（造模组）和B（空白组）两组各10只,采用张静等人的复合造模法(牛血清白蛋白（BSA）+脂多糖（LPS）+四氯化碳（CCL₄）复制IgA肾病大鼠模型,将BSA用蒸馏水配成100g/L,按照600mg/kg对造模组大鼠进行灌胃,隔日1次,持续12周;同时对造模组大鼠进行皮下注射CCL₄0.1mL和蓖麻油0.3mL,1次/只/周,共12周。并在第8周对造模组大鼠进行尾椎注射LPS,0.5mg/只/次,在同一时段,空白组均在以上步骤中用等体积的蒸馏水灌胃,等体积生理盐水注射。两组大鼠于第12周末采集血液和肾脏组织后杀剪。通过比较两组大鼠的一般情况、生化指标以及肾组织病理改变,确定模型复制是否成功。2.草花覆盆颗粒干预IgA肾病大鼠实验:将51只体重在（150±30g）的清洁级（SD）大鼠在标准的实验室环境中适应性饲养1周后随机分为空白组C（6）,模型组D（15）,科素亚组E（15）,草花覆盆颗粒组F（15）四个组,按照上述造模方法进行造模。在持续12周造模结束后,从第13周开始每组进行灌胃给药,连续8周,科素亚组给予科素亚,草花覆盆颗粒组给予科素亚联合草花覆盆颗粒,正常组和模型组每日予以等量蒸馏水灌胃,等体积生理盐水注射。实验期间各组以普通饲料,净化水喂养。在各组大鼠给药期间,每日观察大鼠实验前后的身体症状、体征、活动状态;第12周、20周将各组大鼠置于代谢笼内禁食、不禁水收集其24小时尿液,第20周末采集血液标本和肾脏组织后将大鼠杀剪。统计分析各组肾病大鼠24小时尿蛋白定量（Pro）、血清肌酐（SCr）、胱抑素（Cysc）等数据,应用免疫荧光法检测IgA免疫复合物沉积情况和纤维连接蛋白FN表达情况,酶联免疫吸附法观察核转录因子NF-kB表达情况。结果:1.模型复制实验:通过比较两组大鼠的一般情况,生化指标、肾组织病理改变以及IgA免疫复合物沉积情况,确定模型复制成功。2.草花覆盆颗粒干预IgA肾病大鼠实验:2.1各组大鼠一般情况比较:空白组大鼠精神和毛色良好,反应灵敏,饮食正常。模型组、科素亚组、草花覆盆颗粒组造模前与空白组相同,造模第3周左右三组大鼠均出现毛色灰暗,精神不振,消瘦,懒动等症状。经药物干预后科素亚组和草花覆盆颗粒组两组大鼠精神状况和食欲较前有所改善,且草花覆盆颗粒组大鼠明显优于科素亚组。2.2各组大鼠24小时尿蛋白定量比较:药物干预前模型组、科素亚组、草花覆盆颗粒与空白组相比,Pro明显升高,并且有统计学意义（P<0.05）。药物干预后,科素亚组、模型组与空白组相比,24Pro有统计学意义（P<0.05）。草花覆盆颗粒组与空白组相比没有统计学意义,而草花覆盆颗粒组与科素亚组相比有明显统计学意义（P<0.01）。通过上表说明灌胃前后空白组大鼠没有明显变化,灌胃前的变化说明造模有意义。灌胃后草花覆盆颗粒组24Pro明显低于科素亚组与模型组。说明在本次实验中草花覆盆颗粒组在干预大鼠24小时尿蛋白定量的治疗方面优于比科素亚组。2.3各组大鼠血清肌酐（Scr）、胱抑素（Cysc）比较:药物干预后:模型组、科素亚组肌酐含量与空白组相比有统计学意义（P<0.05）。草花覆盆颗粒组肌酐与空白组相比没有统计学意义。草花覆盆颗粒组肌酐和模型组、科素亚组相比明显降低,有统计学意义（P<0.01）。科素亚组胱抑素和模型组相比没有统计学意义。说明在本次实验中草花覆盆颗粒组在干预肌酐和胱抑素的方面明显优于与科素亚组。2.4肾组织病理学观察:光镜下空白组肾小球大小形态正常,系膜及基质无明显病理改变。模型组、科素亚组、草花覆盆颗粒与空白组比较系膜及基质明显增厚,科素亚组及草花覆盆颗粒较空白组增厚,但同模型组相比病理改变较小。Masson三色法显示:空白组肾小球大小正常边缘清晰,无明显病理改变。模型组、科素亚组、草花覆盆颗粒与空白组相比胶原纤维明显增多并且融合。科素亚组、草花覆盆颗粒模型组相比胶原纤维含量明显减少,并且草花覆盆颗粒明显优于科素亚组。2.5各组大鼠NF-kB表达影响的比较:药物干预后,模型组、科素亚组、草花覆盆颗粒组与空白组相比,NF-kB表达升高有统计学意义（P<0.05）,并且草花覆盆颗粒组与科素亚组更显著（P<0.01）。科素亚组、草花覆盆颗粒组与模型组相比有所改善,有统计学意义（P<0.05）。科素亚组与草花覆盆颗粒组相比改善明显。说明在本次实验中草花覆盆颗粒组和科素亚组都具有能够降低NF-kB表达的作用,并且草花覆盆颗粒组比科素亚组疗效更显著。2.6各组大鼠FN表达的影响比较:药物干预后草花覆盆颗粒组、科素亚组与模型组相比,FN表达明显降低,有统计学意义（P<0.05）,并且草花覆盆颗粒组与科素亚组更显著（P<0.01）。从免疫荧光图中看出:科素亚组、草花覆盆颗粒组与模型组相比荧光点明显分散。草花覆盆颗粒组与科素亚组相比荧光点量更少更分散。说明草花覆盆颗粒组在调控FN表达方面的影响和科素亚组相比具