实验动物麻醉方法

PAGEPAGE4实验动物麻醉 所有可能引起实验动物疼痛或不适的实验方案都必须使用合适的麻醉剂、止痛剂和镇静剂。如麻醉剂、止痛剂或镇静剂可能影响实验数据，该实验方案可不使用麻醉剂、止痛剂或镇静剂，但必须在实验方案中予以详细说明，并在实验动物管理委员会批准后方可开展相关实验。 包括动物品系、使用途径、体重、性别、动物健康状况、温度、其它同时使用的药物在内的多种因素影响麻醉剂、止痛剂或镇静剂的使用剂量和有效时间。因此，在使用麻醉剂时必须时刻监测实验动物的麻醉深度，以防止过度麻醉导致动物死亡或麻醉不足无法缓解动物的疼痛。足底反射、角膜反射、肌肉紧张和对皮肤夹捏的反应是检测动物麻醉深度的有用指标，在条件许可时，推荐测量动物心率、血压、呼吸频率及体温作为检测动物麻醉深度更为精确的指标。使用麻醉剂时，一定要注意方法的可靠性，根据不同的动物选择合适的方法。1．麻醉剂的用量，除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不同。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小。在使用麻醉剂过程中，特别是使用巴比妥类药物时，一般应首先使用较小剂量，随时检查动物的反应情况，并逐步提高剂量。2．动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施。相比清醒的动物，麻醉后的动物反应相对迟钝。因此，推荐使用循环水浴保温垫，不推荐使用照明灯、电加热器等不易控制温度的设备，以免灼伤实验动物。3．静脉注射麻醉剂发挥作用速度快，静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应,当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。配制的药液浓度要适中，不可过高，以免麻醉过急；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。实验操作涉及腹腔注射时，不应使用腹腔注射麻醉剂。4．气温较低时，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。5．注射麻醉剂前12小时实验动物应禁食，以防止食物回流。注射前3小时应限制饮水。6．如需使用抗生素以防止术后感染，手术前1小时应肌肉注射抗生素，并于手术过程中静脉注射抗生素。7．手术过程中如实验动物大量失血，应补充大约3倍失血体积的0.9%生理盐水。肌肉舒张剂肌肉舒张剂必须与全身麻醉同时使用。如需使用肌肉舒张剂，必须在实验动物研究方案中予以详细说明，并得到实验动物管理委员会的批准。止痛剂 不同动物疼痛持续时间不同，因此应密切观察实验动物的行为等指标。对创口较大的手术，至少在术后48小时内应给予实验动物适当的止痛剂，对较小的手术，至少在术后24小时内应给予实验动物适当的止痛剂。如24小时或48小时后实验动物表现出明显的疼痛，应持续给药，并应与兽医讨论实验动物是否存在其它的健康问题。通常同时给予两种以上不同的止痛剂有更好的效果，如鸦片类止痛剂与非类固醇类消炎药共同使用。在手术前提前使用止痛剂也有助于帮助实验动物减轻疼痛感，并可减小麻醉剂和止痛剂的使用剂量。实验动物疼痛表现 啮齿类实验动物疼痛时常表现得更为安静，并可能表现出弓背、呼吸急促、竖毛，舔舐或抓挠疼痛部位，瞳孔增大。有时会吞噬垫料或其它非食物物品（异食癖）。在抓取时，该动物可能表现得更有攻击性。必须强调，啮齿类实验动物有时并不表现出明显的行为异常，但这并不说明该实验动物没有疼痛问题。麻醉前用药阿托品（Atropine） 阿托品是从颠茄和其他茄科植物提取出的一种有毒的白色结晶状生物碱。可通过皮下注射、肌肉注射或静脉注射使用。生理作用 阿托品为阻断植物神经系统胆碱受体的抗胆碱药，抑制口腔、咽喉、呼吸道黏膜腺体分泌，抑制消化道蠕动和分泌；解除迷走神经对心脏的抑制，使心跳加快；散大瞳孔，使眼压升高；兴奋呼吸中枢，舒张支气管。注意事项 在以下情况时，阿托品应在实验动物麻醉前使用：1.使用麻醉剂/止痛剂如甲苯噻嗪、安定等引起心动过缓；2.使用麻醉剂如克他命引起过量分泌唾液或引起胆碱类神经递质分泌的眼部、口腔、肠道手术。在手术过程中可使用阿托品缓解心动过缓等症状；手术结束时，可使用阿托品或新斯的明解除神经肌肉阻断剂的作用。阿托品抑制胃肠道蠕动，可能会影响造影。实验兔对阿托品不敏感。剂量 小鼠：0.04mg/Kg；大鼠：0.05mg/Kg；兔：0.1-3.0mg/Kg。格隆溴铵（Glycopyrrolate,RobinulV) 格隆溴铵是拮抗胆碱作用的合成药物，可通过皮下注射、肌肉注射或静脉注射使用。生理作用 格隆溴铵为季铵类抗胆碱药。与阿托品相似，具有减缓胃肠蠕动、抑制咽喉、气管、支气管黏膜分泌；格隆溴铵作用时间比阿托品长，不会通过血胎屏障或血脑屏障，因此没有中枢性抗胆碱活性。格隆溴铵抑制胃液分泌，而阿托品则不能抑制胃液分泌。注意事项 格隆溴铵应在实验动物麻醉前使用。相比阿托品，格隆溴铵具有更强的抑制唾液分泌功能。格隆溴铵可抑制胃酸分泌，可用于胃酸过高引起的心血管和呼吸系统问题，并可减轻插管术引起的抑制性迷走神经反射。可能会出现轻微瞳孔放大、心动过速。不能与碱性药物混合使用。全身麻醉全身麻醉中麻醉剂经呼吸道吸入或静脉、肌肉注射，产生中枢神经系统抑制，呈现神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等现象。全身麻醉抑制深浅与药物在血液内的浓度有关,当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，动物逐渐清醒，一般没有后遗症。（常为5分钟）会引起心跳加速、动脉压升高。多次给药有累加效应。注意事项硫喷妥钠在体内很快被富集在脂肪组织中，因此作用时间很短。在时间较长的实验过程中，可重复注射，以维持一定的麻醉深度。由于硫喷妥钠抑制交感神经较副交感神经为强，常有喉头痉挛,因此注射时速度必须缓慢。通常先注射理论剂量的1/3，再缓慢注射剩余部分。 解离型麻醉剂（Dissociative）克他命（Ketamine,Veralar,Ketaset,Ketalar）克他命为pH3.7-4.5的弱酸性溶液，可通过皮下注射、肌肉注射或静脉注射使用。生理作用克他命阻断信号由感觉神经元向中枢神经系统的传递，但不影响其向脊髓的传递。克他命镇痛及肌肉舒张效果差，特别是对内脏器官的镇痛效果差，需与止痛剂或其它麻醉剂合用。与其它药物合用时，应注意调整克他命使用剂量。克他命一般会稍升高心跳频率及血压，呼吸速度可能会加快。注意事项克他命应与与镇静剂如肾上腺素类甲苯噻嗪（Xylazine）或其它麻醉剂合用。肝功能不全会延缓克他命的代谢速度，肾功能不全会延长麻醉时间，苏醒较晚，或不能苏醒。舒泰（Telazol）舒泰是一种复合麻醉剂，为解离型麻醉剂替来它明（tiletamine）和非苯噻嗪类镇静剂唑拉西泮（zolazepam）等比例混合物，为pH2.2-2.8的弱酸性溶液。一般应通过深度肌肉注射使用。舒泰在室温下只能保存几天即失去药效。生理作用舒泰选择性阻断中枢神经系统信号，但对颅神经及脊髓反射没有影响。麻醉诱导期迅速、平稳，肌肉松弛作用好，止痛效果强，苏醒快。注意事项应用舒泰时，因动物仍保持脊髓反射，不应使用角膜发射或足底反射方法检测麻醉深度。呼吸道分泌物较多，易继发肺水肿，导致死亡；临床应用改进：舒泰应用前20

分钟应皮下注射阿托品。舒泰可以通过血胎屏障。患有胰腺疾病的动物不应使用舒泰。使用舒泰将导致兔严重的肾脏毒性。舒泰不应与苯噻嗪类药物同时使用，同时使用将导致呼吸系统和心血管系统抑制、低血压、体温过低。局部麻醉剂局部麻醉是用局部麻醉药阻滞周围神经末梢或神经干、神经节、神经丛的冲动传导，产生局部性的麻醉区。其特点是动物保持清醒，对重要器官功能干扰轻微，麻醉并发症少，是一种比较安全的麻醉方法。适用于大中型动物各种短时间内的实验。局部麻醉操作方法可分为表面麻醉、局部浸润麻醉、区域阻滞麻醉以及神经干(丛)阻滞麻醉等。1.表面麻醉：利用局部麻醉药的组织穿透作用，透过粘膜,阻滞表面的神经末梢，称表面麻醉。在口腔及鼻腔粘膜、眼结膜、尿道等部位手术时,常把麻醉药涂敷、滴入、喷于表面上，或尿道灌注给药，使之麻醉。2.区域阻滞麻醉：在手术区四周和底部注射麻醉药阻断疼痛的向心传导,称区域阻断麻醉。常用药为普鲁卡因。3.神经干(丛)阻滞麻醉：在神经干(丛)的周围注射麻醉药，阻滞其传导,使其所支配的区域无疼痛，称神经干(丛)阻滞麻醉。常用药为利多卡因。4.局部浸润麻醉：沿手术切口逐层注射麻醉药，靠药液的张力弥散，浸入组织,麻醉感觉神经末梢，称局部浸润麻醉。常用药为普鲁卡因。利多卡因（Lidocaine，Xylocaine） 利多卡因是一种快速、短效局部麻醉剂，一般作用时间不超过1小时。生理作用利多卡因阻断快速钠离子通道极化后的去极化。肾上腺素可以延长利多卡因的作用。注意事项过量使用利多卡因可能导致心律不齐。将利多卡因预先保温至动物体温，或用1MNaCHO3溶液1：10稀释1-2%的利多卡因可以减轻利多卡因的刺激性作用。普鲁卡因（Bupivacaine,Marcaine） 普鲁卡因比利多卡因作用慢，但持续时间比利多卡因长，常可持续4-8小时。生理作用普鲁卡因阻断快速钠离子通道极化后的去极化。注意事项普鲁卡因对心脏影响比利多卡因大，过量使用普鲁卡因可能导致室性紊乱。普鲁卡因可局部或硬膜用药。止痛剂 在手术或任何可能引起动物疼痛的实验步骤前使用止痛剂会比手术后方使用止痛剂更为有效。因此，一般情况下，应在动物麻醉前首先使用止痛剂。使用止痛剂一般可减少麻醉剂的使用剂量。2肾上腺素受体激动剂甲苯噻嗪（Xylazine）甲苯噻嗪是一种有效的止痛剂，同时可作为肌肉松弛剂。常为2%或10%，pH5.5的溶液。可通过皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或静脉注射使用。生理作用甲苯噻嗪通过活化2肾上腺素受体抑制中枢神经系统。过量甲苯噻嗪可能导致心血管、呼吸系统抑制和心动过缓；高血糖、利尿；并可能导致体温调节紊乱。因此，使用甲苯噻嗪应注意实验动物保温。注意事项通常不建议单独使用甲苯噻嗪，甲苯噻嗪通常与克他命同时使用。心脏、呼吸系统、肝脏、肾脏功能不全的动物不应使用甲苯噻嗪。盐酸美托嘧啶（Medetomidine）盐酸美托嘧啶是一种有效的止痛剂，同时可作为肌肉松弛剂。常为1mg/ml的溶液。可通过皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或静脉注射使用。生理作用盐酸美托嘧啶通过活化2肾上腺素受体抑制中枢神经系统，作用比甲苯噻嗪强。2肾上腺素受体拮抗剂Antisedan可逆转盐酸美托嘧啶的作用。过量盐酸美托嘧啶可能导致心血管、呼吸系统抑制和心动过缓；并可能导致体温调节紊乱。因此，使用甲苯噻嗪应注意实验动物保温。注意事项通常不建议单独使用盐酸美托嘧啶，盐酸美托嘧啶常与克他命同时使用。心脏、呼吸系统、肝脏、肾脏功能不全的动物不应使用盐酸美托嘧啶。鸦片类羟吗啡酮（Oxymorphone,Numorphan）生理作用羟吗啡酮比吗啡作用强10倍，与大脑、脊髓中的鸦片受体结合。通常不影响呼吸系统，但与其它药物同时使用时，可能影响呼吸系统。羟吗啡酮可能引起心动过缓。羟吗啡酮镇定作用比吗啡强，但催眠作用弱于吗啡。注意事项使用羟吗啡酮作为麻醉前用药，巴比妥类麻醉剂剂量应减小1/3到2/3。可用烯丙左吗喃（Levallorphan）、纳洛芬（Nalorphine）或纳洛酮（Naloxone）解除过量羟吗啡酮造成的毒性。氢吗啡酮（Hydromorphone,Dilaudid）生理作用氢吗啡酮作用与羟吗啡酮相似，但相对便宜，作用时间稍短。通常不影响呼吸系统，但与其它药物同时使用时，可能影响呼吸系统。羟吗啡酮可能引起心动过缓。羟吗啡酮镇定作用比吗啡强，但催眠作用弱于吗啡。注意事项使用羟吗啡酮作为麻醉前用药，巴比妥类麻醉剂剂量应减小1/3到2/3。可用烯丙左吗喃（Levallorphan）、纳洛芬（Nalorphine）或纳洛酮（Naloxone）解除过量氢吗啡酮造成的毒性。非类固醇类消炎药卡诺芬（Carprofen）卡诺芬常用作手术后止痛剂，注射后1小时发挥作用，具有COX-2选择性，但具体作用机制还不清楚。相比于其它非类固醇类药物，卡诺芬一般不引起胃溃疡或严重肾脏功能伤害。Meloxicam(Metacam,Mobic)Meloxicam常用作手术后止痛剂，注射后1小时发挥作用，具有COX-2选择性，但可能也通过其它机制发挥作用。相比于其它非类固醇类药物，Meloxicam一般不引起胃溃疡或严重肾脏功能伤害。KetoprofenKetoprofen用作手术后止痛剂，一般不应用于手术前用药。注射后1小时发挥作用，抑制COX-1和COX-2。与其它非类固醇类药物，Ketoprofen可能引起术后流血、胃溃疡或严重肾脏功能伤害。不应与乙醇一起使用。镇定剂Acetylpromazine(Acepromazine,Promace) Acetylpromazine为吩噻嗪类衍生物，是有效的安定类药物，毒性较小。可通过皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或静脉注射使用。Acetylpromazine抑制中枢神经系统从而发挥镇定和肌肉松弛的作用；具有止呕、防止痉挛作用；并可有效防止硫喷妥钠等引起的心律不齐。Acetylpromazine可导致低血压。低血压及需要完全免疫系统的实验动物不应使用Acetylpromazine。重氮异胺（Diazepam,Valium）重氮异胺为苯(并)二氮混合制剂，具有肌肉松弛和抗惊厥作用。可通过肌肉注射、腹腔注射或静脉注射使用。重氮异胺作用于丘脑、下丘脑发挥作用。重氮异胺对心血管、呼吸系统影响不大，但可通过血胎屏障，怀孕早期使用重氮异胺加大胎儿先天性畸形的风险。麻醉前使用重氮异胺可显著减少麻醉剂的使用剂量。重氮异胺不溶于水。Midazolam(Versed) Midazolam是水溶性的苯(并)二氮混合制剂，具有肌肉松弛和抗惊厥作用。可通过皮下注射、肌肉注射、腹腔注射或静脉注射使用，皮下注射或肌肉注射时吸收效率比重氮异胺高。Midazolam一般不影响心血管、呼吸系统，但与鸦片类药物同时使用时可能导致呼吸困难，与杜冷丁同时使用可能导致血压过低。麻醉前使用Midazolam可显著减少麻醉剂的使用剂量。

小鼠全身麻醉剂麻醉剂剂量注释溴氯三氟乙烷（Halothane）异氟烷（Isoflurane）2-5%可用于取血、剪尾前动物麻醉。应于通风橱内进行。手术麻醉应使用可控制的吸入器。戊巴比妥钠（PentobarbitalSodium）40-85mg/kg腹腔注射短效麻醉剂硫喷妥钠（ThiopentalSodium）1％溶液腹腔注射0.1～0.3ml/只克他命（Ketamine）/甲苯噻嗪（Xylazine）克他命:80-120mg/kg甲苯噻嗪†:10-15mg/kg皮下或腹腔注射适用于手术†皮下或腹腔注射温0.01-0.02ml生理盐水/g体重RodentCocktail0.5-0.7ml/kg皮下或腹腔注射1.5mlKetamine(100mg/ml)1.5mlXylazine†(20mg/ml)0.5mlAcepromazine(10mg/ml)局部麻醉剂麻醉剂剂量注释普鲁卡因Bupivacaine(0.125%)不超过4mg/kg4-8小时麻醉利多卡因（Lidocaine）(1%)1-2小时麻醉止痛剂止痛剂剂量注释Buprenorphine0.05-0.1mg/kg皮下注射8-12h有效时间卡诺芬（Carprofen）5mg/kg皮下注射24h有效时间Flunixin2.5mg/kg皮下注射12h有效时间杜冷丁（Meperidine）10-20mg/kg皮下注射2-3h有效时间Meloxicam1-2mg/kg皮下注射24h有效时间

大鼠全身麻醉剂麻醉剂剂量注释溴氯三氟乙烷（Halothane）异氟烷（Isoflurane）2-5%可用于取血前动物麻醉。应于通风橱内进行。手术麻醉应使用可控制的吸入器。戊巴比妥钠（PentobarbitalSodium）35-40mg/kg静脉、腹腔注射短效麻醉剂克他命（Ketamine）/甲苯噻嗪（Xylazine）克他命:75-100mg/kg甲苯噻嗪†:5-10mg/kg皮下或腹腔注射适用于手术†皮下或腹腔注射温0.01-0.02ml生理盐水/g体重RodentCocktail0.5-0.7ml/kg皮下或腹腔注射1.5mlKetamine(100mg/ml)1.5mlXylazine†(20mg/ml)0.5mlAcepromazine(10mg/ml)局部麻醉剂麻醉剂剂量注释普鲁卡因Bupivacaine(0.125%)8-12小时麻醉利多卡因（Lidocaine）(1%)1-2小时麻醉止痛剂止痛剂剂量注释Buprenorphine0.01-0.05mg/kg皮下注射8-12h有效时间卡诺芬（Carprofen）5mg/kg皮下注射24h有效时间Flunixin2.5mg/kg皮下注射12h有效时间杜冷丁（Meperidine）10-20mg/kg皮下注射2-3h有效时间Meloxicam1-2mg/kg皮下注射24h有效时间镇静剂镇静剂剂量注释克他命（Ketamine）22mg/kg腹腔、皮下注射Telazol15-30mg/kg皮下注射恢复时间较长Acepromazine2mg/kg腹腔、皮下注射Chlorpromazine1-2mg/kg腹腔、皮下注射Diazepam2.5mg/kg腹腔注射兔全身麻醉剂麻醉剂剂量注释溴氯三氟乙烷（Halothane）异氟烷（Isoflurane）1-4%可用于取血前动物麻醉。应于通风橱内进行。溴氯三氟乙烷导致心肌对儿茶酚胺引起的心律不齐敏感。戊巴比妥钠（PentobarbitalSodium）20-45mg/kg静脉注射可能抑制呼吸，甚至可能导致呼吸暂停。硫喷妥钠（ThiopentalSodium）15-25mg/kg静脉注射可能抑制呼吸，甚至可能导致呼吸暂停。克他命（Ketamine）/甲苯噻嗪（Xylazine）克他命:35-50mg/kg甲苯噻嗪†:5-10mg/kg皮下或肌肉注射。不适用于