实验十-血糖的测定

实验十血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol／L～6．1mmol／L之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。一、葡萄糖氧化酶法【目的】1.了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。2.掌握血糖测定的临床意义。【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，GOD)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即Trinder反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下：【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。2.酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/LNaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。3.酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。4.酶酚混合试剂取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml于100ml容量瓶中，加12mmol/L苯甲酸溶液至刻度。【操作】取3支试管,编号，按下表操作。表3-12血糖测定操作步骤加入物(ml)空白管标准管测定管血清－－0.02葡萄糖标准液－0.02－蒸馏水0.02－－酶酚混合液3.03.03.0混匀，置37℃水浴中保温15分钟，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。【计算】测定管吸光度血糖（mmol/L）=×5

标准管吸光度【注意事项】表3-13血糖测定操作步骤试剂（ml）测定管标准管空白管血清或血浆0.1——葡萄糖标准应用液—0.1—蒸馏水——0.1邻甲苯胺试剂3.03.03.0

2．将上述各管混匀放入沸水浴中加热12分钟，取出用自来水冷却5分钟。注意在煮沸时水浴中的水面必须高于试管内的液面。否则则温度不均而影响比色。3．用波长630nm分光光度计进行比色，空白管调零点，读取测定管与标准管吸光度。4．计算测定管吸光度血糖（mmol/L）=×5

标准管吸光度5．本