复元胶囊治疗膝骨关节炎患者血清基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶抑制因子-1的表达变化

复元胶囊治疗膝骨关节炎患者血清基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶抑制因子-1的表达变化

骨关节炎（oa）是最常见的慢性和进展性关节疾病，膝骨关节炎（koa）在中国最为常见。OA的发病率逐年增长,且致残率非常高。OA的发病机制比较复杂,其中很多环节还不清楚,但一般认为与软骨细胞的凋亡、细胞因子和炎性介质的参与、酶的作用导致基质降解等有关。近年来研究发现,酶性降解细胞外基质是软骨破坏的主要原因,MMP-3和TIMP-1在OA的发生发展和预后中具有重要的作用。笔者在前期的研究中发现,复元胶囊治疗KOA行之有效,但其作用机制不明。本研究在前期的研究基础上,进一步研究复元胶囊治疗KOA的机制。1材料和方法1.1血清timp-1和mmp-3酶联免疫测定试剂盒酶联免疫检测仪(SUNRISE,奥地利)、DDC-5型低速冷冻离心机(上海Anting科学仪器公司);TIMP-1和MMP-3酶联免疫测定试剂盒(上海西唐生物科技有限公司);复元胶囊为自制胶囊,委托由重庆希尔安药业有限公司加工生产,每粒胶囊重0.5g,相当于生药2.0g;仙灵骨葆胶囊(国药准字Z20025337)由贵州同济堂制药股份有限公司生产,每粒胶囊重0.5g,相当于生药2.0g。1.2治疗组和对照组的诊断及入选标准本科门诊2006年1月～2006年10月确诊为膝骨关节炎肝肾不足、筋脉瘀滞证的病人共60例,根据随机数字表,按就诊顺序依次分为治疗组和对照组。另选择同期自愿健康献血者30例,作为健康组。KOA的诊断标准及入选标准参照美国风湿病协会1995年修订的膝骨关节炎分类标准。治疗组、对照组性别、年龄、治疗前病程、治疗前主症、次症分级频数,X线分级频数的比较无显著性差异(P>0.05)。1.3仙灵骨指导的胶囊治疗组:复元胶囊每次5粒,3次/d,饭前温开水送服;对照组:仙灵骨葆胶囊每次服3粒,2次/d,饭前温开水送服。均是4w为1个疗程,共服用3个疗程。病人在试验期间禁止应用激素类药物和关节腔内注射用药,禁用与本试验同类及其他相关的药物。1.4观察指标收集治疗前后患者清晨空腹血清,根据试剂盒说明书方法,采用ELISA法进行MMP-3和TIMP-1检测。1.5统计学处理全部数据均用SPSS10.0软件完成处理。计量资料采用t检验,组内治疗前后用配对t检验,两组治疗前后变化用成组t检验;P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组患者的基本情况比较-3和TIMP-1表达变化治疗前,治疗组和对照组血清MMP-3和TIMP-1水平较健康组明显增高(P<0.05);治疗后,治疗组和对照组血清MMP-3、TIMP-1水平较治疗前明显降低(P<0.05),但两组间无显著差异(P>0.05),见表1。2.2副作用在服药过程中,未见明显的毒副反应。血常规、尿常规、肝功能(TB、AST、ALT)、肾功能(BUN、Cr)检测均未见明显异常。3复元胶囊对koa的治疗近年来研究发现,酶性降解细胞外基质是软骨破坏的主要原因。基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制因子在KOA关节软骨的细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡中起关键作用。其中MMP-3对蛋白聚糖有高度的裂解性,是关节软骨基质降解中非常重要的酶,参与软骨基质的降解、骨吸收。MMP-3主要参与降解Ⅱ型、Ⅲ型胶原,基质中的蛋白多糖、层粘连蛋白等多种基质蛋白,尤其是Ⅱ型胶原,使关节软骨破坏。MMP-3不仅降解多种细胞外基质,还可激活其他基质金属蛋白酶原,进一步加速软骨的破坏。基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissueinhibitorofmetal-loproteinases,TIMP-1)是MMP-3的特异性抑制剂,它与MMP-3分子结合成不可逆的1∶1非共价键结合的复合物,从而抑制其活性。在正常状态下,MMP-3和TIMP-1的分泌保持平衡,其基本分泌量对维持关节软骨的完整性具有重要作用,TIMP-1和MMP-3二者的失衡导致了MMP-3的活性增高,促使关节软骨基质的降解,就易导致KOA的发生。Naito等用酶联免疫方法检测了83例KOA患者和19名正常者的血清中MMP-3和TIMP-1的含量,结果发现KOA患者血清中MMP-3和TIMP-1的含量明显高于正常者的血清含量。目前多数研究对KOA病变程度的确定是基于影像学的改变,而KOA时组织的生物化学变化要早于形态学变化。因此,监测生物标记物的变化,对KOA的早期诊断和药物治疗有重要意义。血清和关节液中MMP-3和TIMP-1含量呈正相关,且MMP-3和TIMP-1含量多少与KOA患者的软骨损伤程度呈正比例关系。仙灵骨葆胶囊是以淫羊藿、续断、补骨脂、丹参、地黄、知母等组成的中药复方制剂,具有滋补肝肾、活血通络、接骨续筋、强身健骨之功效。大量的临床应用研究表明,仙灵骨葆胶囊治疗KOA可以明显提高患者的临床缓解率。因此,本研究采用仙灵骨葆胶囊作为对照药物。研究发现,治疗组与对照组血清中MMP-3和TIMP-1的含量均高于健康组,而治疗后治疗组与对照组血清中MMP-3和TIMP-1的含量较治疗前明显下降。可能原因是:软骨细胞分泌MMP-3和TIMP-1释放到关节滑液中,MMP-3和TIMP-1沿着关节囊周围的毛细淋巴管回流至血循环,使KOA患者血清中MMP-3和TIMP-1水平升高;而治疗后,患者病情缓解,软骨损伤程度减轻,MMP-3和TIMP-1水平亦随之下降。表明复元胶囊可在一定程度上降低MMP-3和TIMP-1含量,对关节组织起到保护作用。治疗组