复元胶囊对气虚血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

复元胶囊对气虚血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

气虚血瘀证是中医临床辨证之一。它也是中医的一种常见临床综合征。它尤其适用于心血管疾病、心脑血管疾病、肾衰竭和肿瘤，尤其是青少年疾病，如缺血性脑病、冠状动脉粥样硬化和慢性肾炎。目前已证实气虚血瘀证的发生、发展与血液流变学、凝血与纤溶功能、血管平滑肌细胞(VSMC)分泌多种血管活性物质、细胞增殖与凋亡等有密切的关系。已有研究显示,益气活血法不仅能有效改善气虚血瘀证的症状,还能改善病理生理基础。本文从分子水平探讨复元胶囊对血管内皮细胞功能的调节和改善作用,为补肾活血中药防治气虚血瘀证的相关疾病提供参考。1材料和方法1.1动物SD大鼠,16月龄,雌雄各半,体重600～800g,重庆医科大学动物实验中心,合格证号:SCXK(渝)2007-0001。1.2肾阴下胶囊组复元胶囊,由黄芪、淫羊藿、川芎、当归、枸杞等组成,具有补肾益气活血的功效。希尔安药厂生产。芪参胶囊,由黄芪、丹参、人参、三七、水蛭等组成,具有益气活血,化瘀止痛之功效。河南省新谊药业股份有限公司生产,批号:Z20044445。1.3射免疫分析药盒ET放射免疫分析药盒,批号:S10950212;6-keto-PGF1a放射免疫分析药盒,批号:S10950216,均由北京普儿伟业生物科技有限公司提供。NO试剂盒,南京建成生物工程研究所第一分所。KA-1000型离心机,北京大恒建海科贸公司;DFM-96型多管放射免疫计数器,合肥众成机电技术公司。1.4各组大鼠的造模及分组SD大鼠于实验第1周控制食量,每日摄正常食量的1/3,第2周在控制食量的基础上强迫大鼠在凉水(14～16℃)中游泳,疲劳时捞出水面(疲劳标准以大鼠第一次自然下沉为度),每日1次,连续3周,使之形成气虚血瘀证模型,即出现精神萎顿、毛发枯黄无光泽、轻度稀便、舌质绛紫、尾尖至根部出现轻度瘀血点。随机取8只模型大鼠和8只正常大鼠,测定血液流变学,表明造模成功,见表1。将模型大鼠随机分为复元胶囊组、阳性对照组(芪参胶囊组)、模型组,另设空白对照组,每组12只。根据Meeh-Rubner氏公式计算给药剂量,复元胶囊组给予复元胶囊(0.31g/kg);阳性对照组给予芪参胶囊(0.31g/kg),灌胃,给药容量为13.3mL/kg,模型组和正常组给予等量生理盐水,每天1次,连续4周。1.5消炎痛-edta反应型给药4周后分别测定NO、6-ketoPGF1a、ET。NO测定:取大鼠下腔静脉血液,离心取血清,置-20℃冰箱内保存。用硝酸还原酶法测定,采用南京生物工程研究所提供试剂盒和方法。ET、6-keto-PGF1a测定:取大鼠下腔静脉血液,消炎痛-EDTA抗凝。用于FT测定的血浆用7.5%EDTA二钠抗凝,再加适量的抑肽酶,离心取血浆,置-20℃冰箱保存。采用放免法,严格按照试剂盒说明书操作。由重庆医科大学附属第一医院放射免疫检测中心完成。1.6统计处理采用SAS8.2统计软件进行数据处理,数据以“均数±标准差”()表示,组间比较采用方差分析,两两比较采用SNK法。2血管内皮细胞功能失衡模型与空白对照组比较,模型组舒张血管物质NO、6-keto-PGF1α明显减少,收缩血管物质ET明显增加,均有显著性差异(P<0.05),说明模型组大鼠存在血管内皮细胞(VEC)功能失衡。复元胶囊组、芪参胶囊组与模型组比较,NO、6-keto-PGF1α明显增加,ET明显减少,均有显著性差异(P<0.05),且复元胶囊组NO、6-keto-PGF1α高于芪参胶囊组(P<0.05),而复元胶囊组ET低于芪参胶囊组(P<0.05),见表2。3涉及血管内皮功能异常的中药及分析血管内皮是分割血液和组织的屏障,通过内分泌、自分泌及旁分泌的形式产生多种生物活性物质,调节多种器官的功能。内皮素(endothelin,ET)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)是最常见的调控血管平滑肌收缩与舒张的因子。ET是从内皮细胞分离并纯化的一种迄今所知最强的缩血管物质。NO是一种内皮依赖性松驰因子,它具有极强的舒张血管的作用,对血小板聚集和血栓形成有强烈的抑制作用,还可以稳定溶酶体膜,对抗氧自由基对血管内皮的损伤,NO减少是血管痉挛及血栓形成的重要原因。PGI2是由血管壁内皮细胞合成和释放的一种抗血小板聚集和舒张血管的生物活性物质,能迅速代谢生成6-keto-PGF1a。目前大量临床研究证实,气虚血瘀证多见于心血管疾病、以胰岛素抵抗为特征的糖尿病、血脂异常、慢性肾脏疾病及肿瘤。上述疾病不同程度地存在血管内皮功能异常,并贯穿其发生发展过程的始终。本研究显示,气虚血瘀证大鼠模型组NO、6-keto-PGF1a明显低于空白对照组,ET含量明显高于空白对照组,说明气虚血瘀证大鼠存在血管内皮结构或功能异常,从而导致血管内皮细胞(VEC)合成或分泌血管活性因子失衡。血管内皮结构或功能异常可能是气虚血瘀证形成的病理基础。中医理论认为,若气虚则鼓动无力,循经之血缓慢滞涩而瘀;若阳虚则不能温煦血脉,血液痹阻不畅而瘀,故本虚是血瘀形成的前提和基础。复元胶囊在芪参胶囊(黄芪、丹参、人参、三七、水蛭等)益气活血的基础上,加用肉苁蓉、淫阳藿等中药,共奏补肾益气活血功效。药理研究证实,人参Rb组皂苷、黄芪多糖、三七皂苷、水蛭、丹参有保护VEC的作用,改善NO、ET、6-keto-PGF1a的功能失衡。本实验证实,芪参胶囊及复元胶囊可使气虚血瘀证大鼠血浆中NO、6-keto-PGF1a增加(P<0.05),ET降低(P<0.05),且复元胶囊的上述作用更为显著(P<0.05),可见,本方更能有效改善气虚血瘀证大鼠