替米沙坦片在健康人体的药代动力学研究

替米沙坦片在健康人体的药代动力学研究

氨基葡萄糖是一种非活性血管紧张素受体抗剂。它可以选择难以转化为的阻滞剂at1，从而阻止血管紧张素的血管收缩和类固醇物质分泌，但对其他参与血管系统的受体没有影响。临床资料表明,替米沙坦能有效治疗中度高血压疾病,同时显现出对心、脑、肾的保护作用,由于其高度的选择性而避免了非选择性血管紧张素转换酶抑制剂的不良反应,是一类安全性良好且很有临床应用价值的抗高血压药物。本文旨在研究替米沙坦在我国健康志愿者的药代动力学过程,探讨替米沙坦在国人体内的药代动力学特征,为其在临床广泛正确的使用提供科学依据。1材料和方法1.1美卡素的生产乙腈(色谱纯)购于Sigma公司,甲醇(色谱纯)购于山东禹王实业有限公司。替米沙坦片(商品名为美卡素)40mg/片,批号107567,生产单位:德国勃林格殷格翰国际公司。替米沙坦标准品、内标坎地沙坦标准品由济南隆格医药科技有限公司提供。1.2固相萃取测定仪器SHIMADZU高效液相色谱仪(LC-10AD溶剂泵,RF-10AxL荧光检测器)、HW-2000色谱工作站、SUPELCO固相萃取仪,Bondelut固相萃取小柱(C18,100mg,1ml)购于迪马公司。1.3血液中药物浓度的测定1.3.1马公司美国5μm4.6mm×150mmC18柱(迪马公司);0.01mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液∶乙腈=39∶61(pH=3.74)的流动相;检测波长为Ex=305nmEm=365nm。1.3.2血浆样品的制备采用Bondelut小柱萃取血浆样品,具体方法:在甲醇活化重蒸水平衡后的小柱加入含内标的血浆样品0.5ml,再用0.05mol·L-1KH2PO4(pH=4.6)和甲醇的混合物(V/V,4∶1)0.25ml冲洗,尔后加入0.4ml甲醇洗脱,收集洗脱液,20μl洗脱液进样,按上述色谱条件测定。1.4药代动力学参数将受试者口服国产替米沙坦片后的血药浓度绘制平均血药浓度-时间曲线;计算主要药代动力学参数:Cmax、Tmax为试验的实测值;以梯形法计算AUC。其他药代动力学参数均由3P97软件处理数据而得。采用方差分析比较各剂量组药代动力学参数,比较各剂量组的AUC0-t/dose、Cmax/dose各比值的迭合情况,评价替米沙坦的药代动力学特征。1.5药代动力学研究1.5.1年龄和体长为5.2+2.23.23.2选择9名经体检合格健康男性志愿者,年龄为(21.8±1.4)岁,身高为(167.4±3.2)cm,体重为(61.1±3.2)kg。经心电图、血压、血尿常规、肝、肾功能检查均正常,均无吸烟、饮酒史,受试前2wk未服用过任何药物。1.5.2肢体静脉血采集9名受试者按拉丁方交叉单剂量口服40、80、120mg替米沙坦片,分别于服药前(0h)及服药后0.33、0.67、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0h采集上肢静脉血3.5ml,置-20℃冰箱中保存待测定。每次试验间隔为2wk。2结果2.1生物样品分析的评价2.1.1血浆内标峰与内标峰分离在本文建立的血浆样本色谱分离条件下,替米沙坦保留时间为5.2min,内标的保留时间为3.7min,Fig1为空白血浆、标准血样和受试者血样的典型色谱图,显然替米沙坦峰与内标峰完全分离,且血浆内源性物质对样本系统分离与定量分析无干扰。2.1.2替米沙坦与不同浓度不同峰面积比的线性范围取空白血浆0.98ml,分别加入替米沙坦标准系列溶液20μl,使之成为0.5、2、6、18、36、72、144μg·L-1的含药标准血样,依“血样处理方法”操作,记录色谱图;以测得的替米沙坦与内标坎地沙坦的峰面积之比(Y)为纵坐标,以替米沙坦浓度(C)为横坐标,求得的直线回归方程Yˆ=0.0779C−0.0057‚r=0.9993(n=5)Y^=0.0779C-0.0057‚r=0.9993(n=5)。结果表明,血浆中替米沙坦浓度在0.5～144μg·L-1范围内,浓度与峰面积比之间线性关系良好。本方法的最低定量下限为0.5μg·L-1(以S/N=3计)。2.1.3回收率及精密度所建立的方法,其回收率、日间、日内变异系数见Tab1,从结果中可见血浆中平均相对回收率106.13%±6.62%,低、中、高3个浓度日内及日间变异均<10%,变异系数和回收率皆符合生物样本分析测试的要求。2.2药动学参数用高效液相荧光检测法测定口服替米沙坦片剂40、80、120mg后平均血药浓度-时间曲线,见Fig2。血药浓度数据经3P97软件处理,所得各剂量组的药代动力学参数列于Tab2。结果表明:40、80、120mg剂量组的AUC0-96分别为(895.03±364.53)、(3030.34±1454.80)和(13570.44±3551.54)μg·h-1·L-1;Cmax分别为(60.71±28.10)、(214.05±74.14)和(978.32±234.89)μg·L-1,可见AUC、Cmax两药动学参数随着给药剂量的增加呈现明显的非比例上升趋势。3剂量组血浆半衰期T1/2经方差分析,差异有显著性(P<0.01)。2.3前药剂量的比较将受试者口服40、80、120mg替米沙坦片的各组AUC0-t、AUC0-∞、Cmax分别除以给药剂量,所得数据见Tab3。结果可以看出,各剂量组的AUC0-t/Dose、AUC0-∞/Dose、Cmax/Dose不能迭合(P<0.01)。3替米沙坦在体内的药动学特征目前,替米沙坦的生物样本分析方法主要是LC-MS、放免和高效液相色谱法。本试验借鉴文献及同类化合物的反相色谱法,建立了高效液相荧光检测方法测定血浆中替米沙坦浓度,该法不仅操作简便易行,而且灵敏度高,特异性好。采用C18小柱固相萃取,既提高了分析方法的回收率,又使血浆杂质干扰降至最低。该方法完全符合生物样本分析要求,因此本试验结果是准确可靠的。多年来,国外学者对替米沙坦在人体内的药代动力学多有研究,结果显示替米沙坦口服易吸收,体内分布广泛,Vd约500L。其半衰期长达24h,84%以原形药物从粪便与尿中排出,约5d后全部排出体外。本研究表明,单剂量口服40mg的替米沙坦后Tmax在0.67～2.0h达到血浆峰浓度,Cmax可达60μg·L-1,T1/2为24.26h,给药约7d到达稳态血药浓度。由此可见,国人对替米沙坦的体内过程与西方人相类似,未发现种族差异性的存在。为评价替米沙坦是否具有线性动力学性质,我们依据各剂量组AUC0-∞、AUC0-t、Cmax值非剂量依赖性的大幅增加趋势,将所得的各剂量组AUC0-t/Dose、AUC0-∞/Dose、Cmax/Dose的比值进行统计分析。结果表明中国人单次口服替米沙坦后,剂量在40～120mg范围内,其体内药动学过程显现出非线性动力学特征,该结论与国外文献报道基本吻合。这提示临床应用替米沙坦治疗高血压病时应密切关注疗程与剂量间的关系,以避免因替米沙坦体内大量蓄积而带来严重的不良后果。有研究表明,替米沙坦主要通过肝脏结合成为无活性的葡萄糖醛酸化物,细胞色素P450酶没有参与替米沙坦的代谢。通过对大鼠肝、肾、肠及人肝的微粒体的体外代谢研究观察到替米沙坦在上述微粒体中进行缓慢的尿苷酸化,且替米沙坦对肝微粒体的亲和力远高于肠和肾脏。值得注意的是,替米沙坦原形药在肝中代谢速度十分缓慢,但其尿苷酸化物的消除速度却很快,