灯草镇痛作用的实验研究

灯草镇痛作用的实验研究

照明草具有清热、补气、止痛、消肿等功效，主要用于治疗感冒、喉咙痛、腮腺炎等疾病。本文以行为镇痛和电生理学指标研究灯笼草的镇痛作用,并探讨其作用机理。1实验材料1.1灯草醇提物的制备灯笼草的全部实验需要量,从上海“天草堂国药号”一次性购买(1999年5月),实验前根据剂量要求,先算出一定重量的灯笼草,然后加水500毫升,煎到100ml,去渣后再浓缩成20ml。实验时灌胃给药,小鼠每次0.5ml,大鼠每次2ml。1.2实验动物及模型Wistar大鼠,雌雄兼用,体重180～250g;昆明小鼠,雌雄兼用,体重18～20g,由苏州大学实验动物中心提供,[合格证:苏动(环)字第97040号以及苏动(质)字第97018号]。1.3纳洛酮注射液滂胺天蓝(Stuttgart-Unterturkheim,德国);盐酸纳洛酮注射液[益侨(湖南)制药有限公司,批号990627];盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂,批号991203);罗通定(四川什邡制药厂,批号961204);灭活结核杆菌(上海生物制品研究所,批号980601)。1.4微电极放大器、前置放大器、电刺激器SN-3型立体定位仪(日本);成套电生理仪器(包括微电极放大器、前置放大器、电刺激器等,均由日本电株式会社生产);WQ-9E型钾离子痛阈测定仪(上海海淀电子医疗仪器厂)以及本研究室自制的辐射热测痛仪等。2方法和结果2.1灯草醇提物对大鼠尾皮肤电流强度的影响大鼠随机分6组,灌胃给药或蒸馏水。在给药前和给药后每隔30分钟,用电刺激鼠尾-嘶叫法测定痛阈,以引起动物嘶叫的电流强度(mA)作为痛反应阈值,连测三次,取平均值,痛阈提高表示有镇痛作用。结果表明,四个灯笼草给药组与罗通定组相似,都能提高痛阈(表1),说明灯笼草对电刺激鼠尾皮肤引起的疼痛有镇痛作用。从表1还可见,灯笼草这种镇痛作用可维持150分钟,而且随着灯笼草剂量的增加,其提高痛阈的程度也相应提高,说明其镇痛作用是剂量依赖的。2.2游戏时间对小鼠扭体次数的影响小鼠随机分成不同剂量的给药组,灌胃给药或蒸馏水,然后再随机分成三个不同时程组,即给药后30、60、90分钟作扭体试验。给每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2ml,计算注射后10分钟内动物出现的扭体次数。结果表明,灯笼草给药后30、60和90分钟三个时间点,其扭体次数与对照组相比,均有所减少,其中以给药后60分钟扭体反应的抑制作用最为明显(表2)。而且随着灯笼草剂量的增加,抑制程度也随之增加,说明灯笼草对扭体反应的抑制也是剂量依赖的。2.3电流强度检测在大鼠右侧后肢踝关节内侧皮下注射(0.1ml/只)完全弗氏佐剂(每毫升含10mg灭活结核杆菌)致炎,用辐射热-缩腿法[以开始照射至出现缩腿时的潜伏期(秒)作为痛阈]和钾离子透入法[以出现缩腿时的电流强度(mA)作为痛阈]两种方法测定痛阈。观察灯笼草对关节炎急性期的作用是在致炎后一周开始给药,每天一次,连续一周;观察对关节炎慢性期的作用是在致炎后4周开始给药,每天一次,连续一周。致炎后将大鼠随机分成两组:蒸馏水组和灯笼草组。每次灌胃90分钟后测定其痛阈,连测三次,取平均值。两种测痛方法显示,无论在关节炎的急性期还是慢性期,均出现痛阈降低,即痛觉过敏。这时,在用灯笼草(4.2g/kg)每天一次的连续给药过程中,均能提高痛敏大鼠的痛阈,与蒸馏水灌胃的对照组相比,差别显著(表3、4),说明灯笼草对佐剂性关节炎急性期和慢性期均有镇痛作用。2.4麻黄的急性期与慢性期对痛阈的影响先在麻醉状态下,部分结扎大鼠的一侧坐骨神经造成神经源性疼痛,观察对急性期疼痛的影响,在术后一周开始给灯笼草,每天一次(4.2g/kg),连续一周;观察对慢性期疼痛的影响,是在术后四周开始给灯笼草(剂量和持续时间同上)。结果显示,部分结扎坐骨神经也出现痛觉过敏,表现为痛阈降低。在这个基础上,无论是急性期还是慢性期,灯笼草均能提高痛敏大鼠的痛阈,与蒸馏水组相比均有统计学意义(表5、6)。说明灯笼草对神经源性疼痛的急性期和慢性期均有镇痛作用。2.5pf神经元伤害性反应放电频率的测定采用通常的微电极技术,细胞外记录大鼠丘脑束旁核(Pf)神经元的单位放电。强刺激坐骨神经诱发其伤害性反应,由计算机绘制成神经元放电的序列密度直方图,并计算出放电频率。结果表明,对照组(n=15)在用蒸馏水灌胃前,Pf神经元伤害性反应的放电频率为12.67±1.98(spikes/sec,以下相同),灌胃后为12.89±1.85,两者间无明显差异;在灯笼草组(n=20),用1.6g/kg灯笼草灌胃前,Pf神经元伤害性反应的放电频率为13.54±1.82,灌胃后减少为7.40±1.56,与对照组相比,P<0.05(图1A),说明灯笼草对Pf神经元的伤害性反应有明显的抑制作用。2.6用于镇静人心的机制2.6.1笼刑大鼠和纳络酮对大鼠的痛阈和pf神经元损伤的影响大鼠随机分4组:蒸馏水、纳洛酮、灯笼草+生理盐水和灯笼草+纳络酮组。在给药前和给药后每30分钟用电刺激鼠尾-嘶叫法测定痛阈。表7结果显示,单给蒸馏水和单给纳洛酮两组,痛阈无明显波动;灯笼草药后30～120分钟其痛阈明显提高;而灯笼草+纳络酮组在给药后150分钟内其痛阈未见提高,说明纳洛酮翻转了灯笼草的镇痛作用。另有试验将大鼠随机分为2组,对照组(n=6),ip生理盐水后立即ig灯笼草1.6g/kg,Pf神经元伤害性放电的频率从灌胃前的12.36±2.44,下降到灌胃后的8.12±2.52(P<0.05)。实验组(n=9)ip纳洛酮(1mg/kg)后立即ig灯笼草,Pf神经元伤害性放电频率灌胃前后分别为12.38±2.89和12.16±2.68(图1B),结果说明纳洛酮翻转了灯笼草对Pf神经元伤害性反应的抑制。2.6.2多次给药对大鼠痛阈的影响大鼠ig灯笼草1.6g/kg每天一次,连续9天,在给药的第1、3、5、7、9天分别用电刺激鼠尾-嘶叫法测定痛阈,并计算其给药后的痛阈提高百分率,结果如图2,其痛阈提高率分别为136.74±52.22%、143.13±49.52%、47.65±43.92%、36.81±20.72%、2.93±2.26%,说明多次给药后大鼠对灯笼草的镇痛作用能产生耐受。2.6.3从给药剂量实验大鼠ig灯笼草1.6g/kg每天一次,连续9天,在给药的第3、5、7、9天用电刺激鼠尾-嘶叫法分别测定灯笼草和吗啡(3mg/kg)的镇痛效应,以观察灯笼草镇痛耐受形成过程对吗啡镇痛的影响。另组大鼠用注射递增剂量吗啡的方法,造成动物对吗啡的耐受。吗啡sc每天3次,连续5天,每天剂量由5mg/kg递增至10、15、20、25mg/kg,在给药的第1、3、5天分别测定吗啡(3mg/kg)和灯笼草(1.6g/kg)的镇痛效应,以观察吗啡耐受对灯笼草镇痛的影响。结果表明,灯笼草随给药次数的增加,其痛阈提高百分率逐步明显降低,即产生耐受。这时吗啡的镇痛效应未见明显改变(图3A);反过来,随着连续注射吗啡天数的增加,其镇镇效应逐渐下降,即吗啡产生了耐受,但灯笼草的镇痛效应并未随之下降(图3B)。上述结果显示,灯笼草镇痛与吗啡镇痛之间并不产生交叉耐受。3其他理化性质本文首次报导灯笼草对大鼠、小鼠具有确切的镇痛作用,在多种行为测痛模型上灯笼草均能明显提高痛阈,在电生理实验中灯笼草能明显抑制中枢神经元的伤害性反应。实验中所采用的痛刺激有化学刺激(扭体法、钾离子透入法)、电刺激(嘶叫法)和热刺激(辐射热-缩腿法),它们所引起的疼痛性质不完全相同。另外,扭体法代表内脏痛,嘶叫法反映体表皮肤痛,佐剂性关节炎代表炎症性疼痛,部分结扎坐骨神经引起神经源性疼痛。灯笼草对不同理化