术后病理性腹腔粘连小鼠模型的制作及运用

术后病理性腹腔粘连小鼠模型的制作及运用

到目前为止，还没有标准的金融模型。一般来说，建模的常用方法有刀片、纱布、血管钳等。模型可用于旋转、膀胱突出、腹泻、胃等。所选动物包括狗、兔子、老鼠和老鼠。本实验使用昆明鼠，将未报道的什锦末和常用的干布与动物进行比较。这是报告。1材料和方法1.1材料表面1.1.1%5g采用昆明小鼠30只(购自南京中医药大学动物实验中心),雌雄兼用,4～6周龄,体重30±5g。由动物中心分2批提供,第一批15只为A组(纱布组),采用SAS6.12随机程序生成随机数字,分为生理盐水组(I亚层,6只)、丹参酮ⅡA磺酸钠组(Ⅱ亚层,6只)及模型组(Ⅲ亚层,3只);第二批15只为B组(什锦锉组),同上法进行分组。1.1.2药物、药品与药物丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,批号:030801,国家准字H31022558,规格:10mg/2mL(上海第一生化药业有限公司)。氯化钠注射液,批号:03122111,国家准字号H32024145,规格:10mL:90mg×5支(国营张家港市制药厂)。1.1.3干防菌剂、防菌粉体系什锦锉:江阴市盛达金刚制品厂,规格:3mm×140mm/10支。干纱布:规格,40mm×50mm,高压灭菌,恒温箱37℃干燥。其他:血管钳、剪刀、持针器、零号无菌丝线等。1.2方法1.2.1壁层材料的使用昆明小鼠术前晚上禁食,手术当天禁水。采用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔内注入麻醉。麻醉后以0.5%碘伏消毒手术区皮肤并铺巾,在下腹正中作约2cm切口人腹,找到蚓突后将其提至切口外,在蚓突前外1.5cm长侧面分别用(为增加造模均衡性,腹壁切开操作1人、造模及缝合1人);A组-干纱布均匀摩擦20次至肠壁见出血点;B组-什锦锉在肓肠外侧面摩擦至肠壁见出血点。中线右侧的壁层腹膜用止血钳多处反复钳夹、搔刮各10次(夹紧不上齿、微血管持针钳、约齿面2/3长,等距离,每次约1s左右,中线右侧的壁层腹膜共夹10次;搔刮距离切口上顶端至切口下顶端,均匀用力,每次约1s左右,中线右侧的壁层腹膜共10次),其它组织尽可能减少损伤,如遇壁层腹膜损伤出血,3-0可吸收缝线缝扎止血,腹壁切口用0号缝线缝合关腹,术毕予以青霉素腹腔灌注,术后6h给予标准饲料及庆大霉素饮水(防感染)。1.2.2参酮a磺酸钠注射液治疗小鼠一般情况Ⅰ亚层,关腹前、术毕6h,腹腔均注射0.5mL生理盐水。Ⅱ亚层,参照有关文献:丹参酮ⅡA磺酸钠注射液人体常用剂量为80mg/d,15d为一疗程,选用人体每天剂量×14d的剂量为小鼠总剂量,以小鼠体重10g换算作为腹腔用药的总剂量,将此量平分,分别配成0.5mL含药生理盐水,于关腹前、术毕6h腹腔注射。Ⅲ亚层,不给任何药物。2结果2.1剑突下“n”形“n”小鼠术后均予以单笼饲养,连续观察7d,各组存活小鼠于术后第8d,采用颈椎脱臼法处死动物,剑突下“”型切口进腹,由一名未参与研究者根据Nair五分级标准(见表1)、观察腹膜粘连情况,分别记录腹膜粘连得分,评价腹膜粘连之效果(见表2)。2.2组患儿血死亡原因b组小鼠术后7d内死亡的例数见表3,其中A组:Ⅰ亚层1只死亡原因不明;Ⅱ亚层2只出血死亡,1只为肠穿孔、腹壁血肿死亡。B组:Ⅰ亚层1只蚓突坏死死亡,1只右腹壁血肿死亡,1只肠穿孔死亡,1只出血死亡;Ⅱ亚层1只腹壁切口裂开死亡,3只穿孔死亡(其中1只还伴有血肿),1只出血死亡,Ⅲ亚层1只穿孔死亡,1只出血死亡。见表3。3讨论3.1丹参酮a磺酸钠对小鼠nair评分的影响A组与B组经统计学分析,两组无明显差异,造模均成功,生理盐水组及模型组造模效果均能达到Nair评分Ⅲ～Ⅳ级,而丹参酮ⅡA磺酸钠组Nair评分有Ⅱ～Ⅲ级,初步似可看出丹参酮ⅡA磺酸钠有抗腹腔粘连作用,这与丹参(主要成分是丹参酮ⅡA)具有活血化瘀而抑制成纤维增生之效颇为合拍,但由于该组小鼠死亡过多无法进行统计比较,有待进一步深入研究。3.2死亡率A组肠穿孔死亡仅为1只,B组肠穿孔死亡高达5只,而且,A组3d内死亡例数比较均匀,每天1只,共3只,占死亡总例数的75.0%,而B组3d内死亡例数很高,达9只,占死亡例数的81.8%;A组总死亡率26.7%,B组总死亡率73.3%。提示小鼠手术3d内(包含手术当天)死亡率最高;两组经统学计处理,死亡率具有显著差异性,这是由于什锦锉用于小鼠造模创伤过大,易造成肠穿孔,故死亡率很高;而干纱布因其对创面创伤较小,不易引起肠穿孔,故死亡率较低。其外,小鼠死亡与用药有一定的关系,A组中注射生理盐水引起的死亡仅1只,占1/6,丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起的死亡3只,占3/6;B组注射生理盐水引起的死亡4只,占4/6,丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起的死亡5只,占5/6;生理盐水引起死亡合计5只,占5/12(其中出血死亡1只),丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起死亡共计8只,占8/12(其中出血死亡3只),从中可以粗略看出:注射生理盐水死亡率似比用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起的死亡率略低,这与丹参酮ⅡA剂量似过大,活血之效较甚而抑制凝血过甚导致出血有关。但统计分析未见明显差异,是因为样本例数过少之故,也需进一步研究证实。3.3什锦权可扩张性能笔者在发现B组(什锦锉组)如此高的死亡率后,曾追加一组丹参酮ⅡA磺酸钠注射液低剂量组6只(人体每天剂量×7d的剂量为小鼠总剂量),造模方式仍采用什锦锉,但不敢摩擦至肠壁见出血点,只是轻轻摩几下、肠壁表面无明显的定性指标,虽然只有1只术后第4d死亡,但造模方式与干纱布比较,仍明显存在以下缺点:(1)均匀程度。什锦锉为一钢性平面,接触的蚓突面是不平整的,虽然可以用手指在蚓突背面顶着,但蚓突正面仍然不平整,故摩的面欠均匀;而干纱布为一柔性平面,可以随着接触不平的蚓突面而自行调整,故摩的效果干纱布比什锦锉均匀。(2)定性指标。通过以上实验可以看出,用什锦锉摩至肠壁见出血点,极易造成小鼠肠穿孔,而引起极高的死亡率,这与什锦锉表面带刺,而小鼠肠壁极薄,易将肠壁刺穿造成肠穿孔有关。如摩达不到肠壁见出血点,虽存活率较高,但无法达到统一的定性指标而影响造模的效果;而用干纱布却能达到此要求。故此,如选择小鼠作为术后病理性腹腔粘连动物模型,以干纱