高效液相色谱法测定呈味核苷酸二钠的含量

高效液相色谱法测定呈味核苷酸二钠的含量

磷酸二钠（imp和gdp）通常由淀粉制成。通过发芽法或酶分解法获得的混合物具有强烈的增鲜效果，被广泛应用于各种食品中。目前，我国的imp和gdp含量检测方法主要是紫外分光光度法。当样品中含有大量蛋白质或其他氨基酸时，检测结果与实际值相差很大。采用高效液相色谱法，通过液相溶液反复分配，通过优化色度条件，可以充分分离各种核酸，并获得具有精确定标的偏差偏差。在2%范围内，保持不变的性质，并获得标准样品的含量差异（imp）。5'肌苷酸钠（5'肌苷酸钠（imp）和5'环己烯酸钠（5'环磷酸钠（pg））的标准铬ct。在本实验中，我们需要对鸡进行必要的预处理，以获得鸡中含有某些氨基酸的二钠的味道。与滴定法相比，高效液相色谱法的定量测定结果具有更高的重复性，该方法也为香生产提供了一定的技术支持。1材料和方法1.1imp/gm水合物纯度甲醇、乙腈,色谱纯,美国Fisher公司;IMP、GMP标准品,美国Sigma公司,IMP和GMP水合物的纯度均为99%,其中,IMP水分含量26%,GMP水分含量21%;四丁基磷酸铵,色谱纯,美国Sigma公司;磷酸二氢钾,分析纯,天津市广成化学试剂有限公司.1.2科学分析e2695型高效液相色谱仪(配有可变波长紫外检测器和示差检测器,Empower色谱工作站),美国Waters公司;XS105DU型分析天平,德国梅特勒·托利多公司;SymmetryshiledRP18型分离柱,4.6mm×150mm,5μm,美国Waters公司.1.3方法1.3.1检测条件及检测波长洗脱液:0.02mol/L磷酸二氢钾(0.02%四丁基磷酸铵)的超纯水溶液∶乙腈=97∶3(v/v);反相色谱柱(SymmetryshiledRP18,4.6×150mm,5μm);检测波长254nm;流速0.8mL/min;进样量5μL.1.3.2标准溶液的配制分别称取IMP、GMP标准品0.04024,0.03081g,置于50mL容量瓶中,用超纯水超声溶解并定容至刻度,摇匀,冷藏于保鲜柜,作为标准储备液,该储备液每毫升相当于IMP干基589.64μg,GMP干基481.92μg,进样前用0.45μm微孔滤膜过滤.1.3.3超声过滤称取鸡精样品0.2g左右(准确至0.0001g),用超纯水超声溶解并定容至25mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤后待测.2结果与分析2.1mp与imp的标准曲线图在50～480μg/mL质量浓度范围内,HPLC的响应峰面积与GMP的标准品浓度呈线性关系:y=12180x-78215(式中x为响应峰面积,y为GMP的标准品浓度),相关系数R=0.9999;在60～600μg/mL质量浓度范围内,HPLC的响应峰面积与IMP的标准品浓度呈线性关系:y=9305.7x-85880(式中x为响应峰面积,y为IMP的标准品浓度),相关系数R=1.0000.实验建立的GMP与IMP的标准曲线图如图1和图2;GMP与IMP的HPLC色谱图如图3和图4.2.2色谱条件选择参阅目前国内外报道的呈味核苷酸二钠高效液相色谱分离条件,先后采用了不同流动相对其分离效果进行了优化选择,结果如表1.由表1可知,用普通的磷酸盐缓冲液和碳十八色谱柱很难将二者完全分离,如图5.而当选择辛烷磺酸钠为离子对试剂时,样品无保留,选择四丁基磷酸铵效果较好.另外,流动相中乙腈的含量对分离效果影响较明显,通过反复对比实验论证,流动相中添加0.02%的四丁基磷酸铵,3%的乙腈分离效果最好,样品分离效果的色谱图如图6.优化后的呈味核苷酸二钠色谱分离条件可获得分离度较好的谱图,但由于流速过低,样品保留时间不稳定.通过更换色谱柱,采用SystemRP18反相柱,柱温提高到40℃,流速提高到0.8mL/min,获得了定性重复性与定量重复性的相对标准偏差(RSD)<2%的样品IMP和GMP的分离色谱图,获得了满意结果.2.3精密度和标准曲线通过实验分析,获得了鸡精样品中呈味核苷酸二钠的含量即:IMP质量含量为0.54%,GMP质量含量为0.60%,两次测定结果的精密度GMP为0.73%,IMP为1.17%,保留时间相对标准偏差RSD为0.036%和0.047%.谱图如图7.3呈味核苷酸二钠的质量检测本文以四丁基磷酸铵和磷酸二氢钾配以一定比例的乙腈为流动相,采用高耐水系WatersRP18色谱柱,获得了定性定量重复性均较优的IMP和GMP分离方法,测得鸡精样品中呈味核苷酸二钠的总质量含量为1.14%,其中IMP质量含量为0.54%,GMP质量含量为0.60%;测定结果的精密度GMP为0.73%,IMP为1.17%,检测结果满意.使用该方法测定IMP和GMP的HPLC色谱图中,2种物