不同HPV检测方法的特点与临床应用的注意事项

不同HPV检测方法的特点与临床应用的注意事项HPV核酸检测试剂分类HR-HPV核酸基因型通用检测试剂报告是否存在HR-HPV感染，但不报告具体的HPV基因型，如hc

2.HR

-HPV核酸基因型通用检测+复检HPV-16

/HPV-18报告是否存在HR-HPV感染，以及HPV-16/HPV-18感染，如Cervista

HPV16/18。HPV基因分型试剂区分HPV具体的基因型，直接报告每种基因型感染的结果，国内试剂厂家研发的HPV基因分型试剂大多属于此类HPV:Theglobal

burden.Nature,2012.HPV核酸基因分型检测试剂（一）筛查试剂HPV检测试剂分类 试剂名称HR-HPV

DNA筛查 Hybrid

Capture

2HPV

DNA检测试剂CervistaHPVHR

TestAmplicorHPV

TestCareHPV

Test凯普13种高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒达安高危型人乳头瘤病毒（8个型）核酸定量检测试剂盒HR-HPV-DNA筛查同时检测HPV-16&

HPV-18基因型RealTimeHighRiskHPV

testcobas4800HPV

Test凯普12+2高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒HR-HPV-DNA筛查复检检测HPV-16&

HPV-18基因型CervistaHPV16/18

TestHR-HPV16/18/45ProbeSet

Test凯杰HPV-16/18检测试剂盒HPV核酸基因分型检测试剂（二）HPV检测试剂分类

试剂名称分型试剂反向线性-点杂交HPV基因分型试验INNO-LiPA

HPV基因分型Linear

Array

HPV

基因分型digeneHPVGenotypingRHTest

RUOEasyChip

HPV

Blot

试剂盒凯普

37种人乳头状瘤病毒核酸试剂盒凯普21种人乳头状瘤病毒核酸试剂盒达安19种人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒亚能人乳头瘤病毒基因分型（23型）检测试剂盒微阵列HPV基因分型试验PapilloCheck

HPV筛查试剂Clart

HPV

2基因分型试剂悬浮点阵技术HPV基因分型试验多重HPV基因分型试剂盒digeneHPVGenotypingLQTest

RUO凝胶电泳HPV基因分型BIOTYPAP

KitHPV核酸基因分型检测试剂（三））HPV检测试剂分类试剂名称HR-HPV

E6/E7

mRNA

筛查试验（HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68）PreTect

HPV-Proofer（实时荧光RT-PCR)凯普14高危HPV

E6/E7

mRNA检测试剂盒（实时荧光RT-PCR)Hologic

Aptima(14种高危）

HPV

E6、E7

mRNA检测试剂盒(TMA)其它华大基因人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（适用于Ion

Torrent高通量测序法）华大基因人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（适用于Hiseq或

Miseq高通量测序法华大基因人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（MALDI-TOF-MS法）Hybrid

Capture

2HPVDNA检测试剂（hc2）hc2最初为Digene公司（Gaithersburg，MD,USA）在1997年建立的，目前为Qiagen公司产品。检测原理：脱落细胞首先用碱变性试剂进行处理，处理后的细胞与两种未标记的单链全基因RNA探针杂交，一条探针特异性（高危型探针cocktail

B）针对13种HPVs（包括HPV-16、-18、-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59和-68）;另一条探针（低危型探针cocktail

A）针对5种HPVs（包括HPV-6、-11、-42、-43和-44）。阳性样本可与微孔板上包被的对RNA-DNA杂合子特异的单克隆抗体相结合，然后加入碱性磷酸酶标记的RNA-DNA杂合子抗体，加入化学发光底物显色，通过仪器对发光强度进行半定量检测。hc2

2003年被美国FDA批准为用于日常检测HR-HPV感染的诊断试剂。目前被FDA批准对意义不明的细胞学结果，即无明确意义的非典型细胞改变（atypical

squamouscells

of

undermined

significance,ASC-US）的分层管理，即决定哪些患者需要接受阴道镜检查，并且作为≥30岁的妇女细胞学筛查以外的另一种筛查检测。hc2优缺点ASC-US的妇女中，与细胞学监测相比，hc2检测显著提高了检出CIN2或者其更高分级病变的准确性（敏感性更高，特异性相近）。采用hc2进行HR-HPV首次筛查，与细胞学筛查相比，识别CIN2＋和CIN3＋的敏感性更高，特异性稍低。Hc2

HR-HPV检测阴性的妇女与细胞学筛查阴性的妇女相比，在3-6年内，发展为CIN3+病变的风险更小。对于CIN病变治疗后的患者来说，进行短期追踪随访（两年内）的结果，与细胞学相比，hc2

HR-HPV检测对预测CIN复发更加敏感。

目前hc2的主要问题是：由于其探针与HPV其它型的交叉反应造成的分析不准确性；缺少内对照来评价样本是否满足量的要求或是否存在潜在的干扰物质。所有hc2阳性的结果中有7.8%的阳性结果为由于探针的交叉反应造成的假阳性结果。一些最近的研究也表明，即使临床样本中没有HPV

DNA存在，hc2结果也会存在5%的假阳性结果。由于hc2检测结果的高假阳性率，在2006年美国阴道镜和宫颈病理学会（American

Societyfor

Colposcopy

and

CervicalPathology,ASCCP）指南中指出，在宫颈癌筛查计划中，不推荐使用HPV检测试验进行不引起肿瘤的HPV基因型筛查，因为假阳性结果可能会导致不必要的阴道镜检测。CuzickJ,ArbynM,SankaranarayananR,etal.Vaccine,2008,26,K29–K41.CoxJT.JClinVirol,2009,45,

S3–S12.ArbynM,SasieniP,MeijerCJ,etal.Vaccine,2006,24:78–89.CastlePE,SolomonD,WheelerCM,etal.JClinMicrobiol,2008,46:2595–2604.WrightTCJr,MassadLS,DuntonCJ,etal.AmJObstet,2006,Gynecol,197:

346–355.CareHPV

Test在比尔盖茨基金的资助下，建立了CareHPV

Test（Qiagen）HPV检测方法。该方法可在3h内完成对13种与hc2相同基因型的检测。2012年9月获得CFDA批准，可在国内使用。其原理为简化的hc2技术：careHPVTM

Test利用生物体外核酸杂交检测技术，通过荧光信号放大的手段，在微孔检测板上进行检测。当样本中含有高危型HPV

DNA时，HPV

DNA便会与混合探针中的互补性RNA探针进行杂交形成DNA:RNA杂交物。载有抗DNA:RNA杂交物抗体的磁珠可将DNA:RNA杂交物捕获，从而使其与非杂交物分离。进而，一种含有碱性磷酸酶的抗DNA:RNA杂交物抗体，与被捕获的DNA:RNA杂交物偶合。经清洗，去掉非偶合物质后，在磁珠上留下按比例偶合的含有碱性磷酸酶的抗DNA:RNA杂交物抗体，这一比例与杂交的HPV

DNA量一致。最后，磁珠上偶合物中的碱性磷酸酶和底物反应，使底物水解发光，所发出的荧光强度既与存在的碱性磷酸酶量成正比，也与存在的HPV

DNA杂交量成正比。CareHPV

Test主要检测步骤样本处理（约10分钟）试剂配制（约10分钟）检测：（1）加入试剂1和样本并保温30分钟；（2）加入试剂2并保温15分钟；（3）加入试剂3并保温30分钟；（4）倒掉微孔检测板液体，加入试剂4并保温（过程约40-50分钟）；（5）加入试剂5和清洗微孔检测板（过程约20-30分钟）；（6）读板和结果存档（每个孔的检测结果是用颜色表示出来的，绿色表示样本检测结果为阴性（即未检测到高危型HPV）；黄色（显示

“+”

图标）表示样本检测结果为阳性（即检测到了高危型HPV））CareHPV

Test

特点快速（约3个小时）、简便（肉眼判读结果，仪器带蓄电池，不需电源）。费用（包括采样和耗材）：～15美元/人份；7美元/人份（政府）在中国进行的对CareHPV

Test的评估研究表明，CareHPV

Test检测CIN2+的敏感性和特异性分别为90.0%和84.2%，而hc2检测的敏感性和特异性分别为97.1%和85.6%。QiaoYL,SellorsJW,EderPS,etal.LancetOncol,2008,9:

929–936.13种高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)可检测13种HR-HPVs，包括：HPV-16、-18、-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59和-68，这13种HR-HPVs与hc2可检测13种基因型完全相同。凯普试剂盒（不分型）2007年获得CFDA和CE认证。上海之江（分型）2011年1月获得CFDA认证。采用针对13种高危型HPV

DNAL区序列的特异性引物，结合特异性的Taqman荧光标记探针技术，通过实时荧光PCR，进行同步核酸扩增与检测。可在同一（凯普）或不同（之江）反应管中实现13种HR-HPVs的同时检测。凯普试剂3h内可完成96个临床样本的检测。

上海之江试剂8小时内完成60个HPV检测。凯普试剂在国内外多家医院进行了1004例与FDA注册产品的检测结果进行了比较，并对不同结果的37例样本进行了DNA测序分析。结果显示，该产品阳性预示值达97%以上，阴性预示值达92%左右，敏感度达96%左右。上海之江试剂与hc2比较，

2种检测方法的阳性符合率为88.3%（113/128），阴性符合率为97.8%（364/372），总符合率为95.4%（477/500）。YuanX,YangY,GuD,etal.ArchGynecolObstet,2011,283:1385-1389.ChenQ,XieLX,QingZR,etal.PLoSOne.

2012,7:e32149.人乳头状瘤病毒核酸试剂盒

(PCR+膜杂交法)凯普21种和37种人乳头状瘤病毒核酸试剂盒可检测并区分21种和37种HPV基因型，21种包括：HPV-6，-11，-16，-18，-31，-33，-35，-39，-42，-43，-44，-45，-51，-52，-53，-56，-59，-66，-68和CP8304（81）。2006年获得SFDA认证、CE认证。本试剂盒由PCR试剂、杂交试剂两部分组成，采用基因扩增技术及导流杂交原理，以凯普医用核酸分子快速杂交仪为平台通过反向点杂交检测扩增产物与包被有型特异性探针膜杂交结果，从而对37种人乳头状瘤病毒基因型进行分型检测。具体过程为：分别采用生物素标记的引物My09/My11和ICF/ICR共同扩增450bp

HPV

L1蛋白基因和145bp人β-球蛋白基因，扩增产物与尼龙膜上包被的37个HPV特异的寡核苷酸探针和1个β-球蛋白基因特异的寡核苷酸探针进行杂交反应。此外，国内原理相近的检测试剂还有针对的都是HPV

L1区的序列。与Amplicor(罗氏13高危不分型产品)在整体检测13种常见高危型HPV有很好的一致性（K值为0.98）；与罗氏37分型产品