罗红霉素在胃肠道介质中的溶出规律研究

罗红霉素在胃肠道介质中的溶出规律研究

由于药物吸收的前提是吸收部位的溶解，所以溶解是吸收的先决条件。若溶解速度大于吸收速度,则吸收过程与剂型关系较小。若溶解速度小于吸收速度,则溶解成为吸收过程的限速步骤。油水分配系数是模拟生物体内药物亲脂性或疏水性的物理参数,是指药物在油、水两相中分配平衡后,油相中的药物浓度与水相中的药物浓度之比。药物的溶解度及油水分配系数直接影响药物在体内的吸收,是预测药物口服吸收的重要物理参数。溶出度不仅可反映固体制剂的内在质量,评价工艺的一致性,而且与生物利用度有一定相关性。国外对仿制药的溶出度研究有非常严格的规定和要求,如日本要求在4种溶出介质(分别为pH1.2、4.0、6.8、水)中与原研制剂的溶出曲线进行比较,均应一致。目前,国内正在启动仿制药一致性评价工作。本项研究测定了罗红霉素在胃肠道介质中溶解度、油水分配系数及稳定性,并研究原研药片在4种溶出介质中的溶出规律,得出了一些重要的结论,对罗红霉素固体制剂的剂型、处方和溶出度检查方法的设计和改进具有指导作用,为罗红霉素固体制剂一致性评价工作提供了科学依据,亦可为大环内酯类抗生素提供研究思路。1设备和材料1.1药物、试剂和仪器Agilent1260液相色谱仪(包括在线真空脱气机、四元泵、自动进样系统),MS31KA3617025漩涡混匀器(广州依科仪器公司),SartoriusPB-20PH计,HHS6电热恒温水浴锅(上海圣欣科仪器公司),天津大学ZRS智能型药物溶出仪。美国ABSCIEX公司4000QTRAPTM复合型三重四极杆/线性离子阱串联质谱仪。1.2试剂与仪器对照品罗红霉素和去红霉糖罗红霉素(中国食品药品检定研究院),罗红霉素原研罗力得片(批号1A25K,法国SanofiAventis公司),正辛醇、冰醋酸、磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钾、磷酸均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司),盐酸为分析纯(中国杭州化学试剂有限公司)。2方法和结果2.1流动相、流速和检测波长色谱柱:岛津ShimVP-ODS(4.6mm×250mm,5μm)柱;流动相:0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH至6.5)-乙腈(65∶35);流速:1.0mL·min-1;检测波长为:210nm;进样量:20μL。2.2罗红霉素溶解度的测定取0.04mol·L-1醋酸钠溶液,用冰醋酸分别调节pH至4.0、4.5、5.0、5.5,作为pH4.0、4.5、5.0、5.5醋酸盐缓冲液;取磷酸二氢钾3.4g和无水磷酸氢二钠3.55g,加水2000mL溶解,作为pH6.8磷酸盐缓冲液,取此液用磷酸调节pH至6.0,作为pH6.0磷酸盐缓冲液。量取不同pH缓冲液作为介质,加入过量的罗红霉素,置37℃水浴恒温振摇30min溶解,0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,HPLC测定,计算罗红霉素溶解度。结果见表1。表明随着pH增大,溶解度降低,罗红霉素在酸性介质中溶解度较大。2.3表观项目药物浓度以正辛醇-水为模拟系统,采用涡旋振荡-HPLC法测定表观油水分配系数。取2mL罗红霉素储备液(37℃,0.17mg·mL-1),置具塞离心管中,加入2mL对应pH缓冲液饱和的正辛醇(37℃),涡旋振荡2min,置37℃水浴恒温静置分层。分别取油、水层溶液,HPLC测定,计算罗红霉素在油、水两相中药物浓度,计算表观油水分配系数。结果见表1。表明随着pH增大,油/水分配系数增大,罗红霉素在近中性介质中油/水分配系数较大。2.4降解产物的鉴定取罗红霉素对照品适量,加0.1mol·L-1盐酸溶液溶解并稀释制成每1mL中约含0.17mg的溶液,分别于不同时间进样测定,结果见表2和图1,表明罗红霉素在0.1mol·L-1盐酸溶液中极不稳定,30min已基本降解完毕。降解产物的质谱确认:取罗红霉素溶解在0.1mol·L-1盐酸溶液中30分钟后的溶液,液质联用仪上进样,结果液相色谱图中供试品溶液降解产物的保留时间与去红霉糖罗红霉素对照品一致,质谱图显示m/z679.5、m/z701.5、m/z717.4分别为[M+H]+、[M+Na]+、[M+K]+离子,与去红霉糖罗红霉素对照品质谱图一致,确认检出的降解产物为去红霉糖罗红霉素。去红霉糖罗红霉素的结构式见图2。2.5溶液稳定性测定取罗红霉素对照品适量,加不同pH缓冲液溶解并稀释制成每1mL中约含0.17mg(水溶液为0.09mg·mL-1)的溶液,分别于0、2.5、68h进样测定,峰面积结果见表3,表明随着pH增大,溶液的峰面积增加,表明稳定性增加。可见,罗红霉素在酸性介质中不稳定,在近中性介质中稳定。2.6罗红霉原研究中的四种溶解介质中的溶出曲线2.6.1氢二钠标准溶液的配制pH6.8磷酸盐缓冲液:取磷酸二氢钾3.4g和无水磷酸氢二钠3.55g,加水适量使溶解后,定容至1000mL,再稀释1倍,即得。pH5.5磷酸盐缓冲液:取0.04mol·L-1醋酸钠溶液,用冰醋酸调节pH至5.5。2.6.2罗红霉素的测定取原研药片,照溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录XC第一法),分别以0.1mol·L-1盐酸溶液、pH5.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和为溶出介质,转速为100r·min-1,依法操作,在5、10、15、30、45、60min时,分别取溶液5mL,滤过,并及时在操作容器中补充上述溶剂5mL。另取罗红霉素对照品适量,精密称定,用上述溶出介质溶解并稀释制成每1mL中含0.16mg的溶液,作为对照品溶液。照“2.1”项下的色谱条件,精密量取上述两种溶液各20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算出每片的溶出量。原研药片在4种溶出介质中的溶出曲线见表4和图4,HPLC的色谱图见图3。原研药SanofiAventis公司罗力得片在酸性介质(pH1.2盐酸溶液)中溶出较少,15min溶出量仅为14%,而在pH5.5醋酸钠缓冲液介质中快速溶出,15min溶出量在85%以上。3罗红霉素在线性介质中的溶解度及溶出行为0.1mol·L-1盐酸溶液:盐酸9mL→1000mL。水:经脱气。3.1影响药物胃肠道吸收的因素众多,但药物溶解于胃肠道及胃肠粘膜是药物吸收的首要前提。因此,本实验测定了罗红霉素的溶解度和油水分配系数(与胃肠粘膜渗透性密切相关),以期对罗红霉素的胃肠道吸收有初步的判断,辅助分析罗红霉素的肠吸收情况。罗红霉素最大规格溶出度实验浓度为0.33mg·mL-1,一般认为logP>2,药物较容易在肠道中被吸收。胃肠道不同部位的酸碱性不同,胃pH1.0~3.0,十二脂肠pH4.0~6.0,空肠pH6.0~7.0,回肠pH7.0,结肠pH8.0。实验结果表明,罗红霉素在酸性介质中极不稳定,在胃肠道近中性pH范围,罗红霉素的溶解度较低、油水分配系数较大,低溶解性高通透性,属于溶出度生物药剂学分类系统(BCS)Ⅱ类:低溶解度-高通透性药物。因此,油水分配系数对肠吸收结果影响不大,而溶解度则有一定影响。通过对罗红霉素理化性质的研究,认为:降低罗红霉素在胃液(酸性介质)中的时间和释放,延长药物在肠道上的时间,可达到提高生物利用度的目的。3.2罗红霉素原研药SanofiAventis公司罗力得片在4种溶出介质中的溶出曲线结果,在酸性介质(pH1.2盐酸溶液)中溶出较少,15min溶出量仅为14%,而在pH5.5醋酸钠缓冲液介质中快速溶出,15min溶出量在85%以上。说明原研片的处方设计,是依据了罗红霉素的理化性质,处方设计比较合理,类似于肠溶片。原研药片在四种溶出介质中的溶出行为与罗红霉素理化性质研究得出的结论相符。3.3通过对罗红霉素理化性质和原研药片溶出规律的研究,认为其制剂设计为类似于肠溶制剂更为合理,应当在酸性介质中溶出少、在近中性介质中快速溶出。3.4通过本项研究,认为罗红霉素固体制剂溶出度检查方法应进一步完善,中国药典2010年版二部罗红霉素固体制剂溶出度检查方法仅规定了在pH5.5醋酸钠缓冲液介质中的溶出不得低于75%,