环境质量风险分析、看

环境监控无菌保证工艺中的质量风险工艺流程图人员C/D级别B级别A级别水气体空气产品原材料包装材料昆虫清洁剂消毒剂清洗设备工具设备部件监测设备转移设备辅助设备风险识别—环境风险(例)进入房间人员过多房间拥挤或杂乱（难清洁）房间设计不合理（气锁装置问题、人流与物流通道问题）房间排风设计不合理（空气流动模式，换气速率，压差）房间有死角（滑动门）房间处于较差的维护状态（表面有裂缝或有脱落物，天花板没有密封，墙壁和地板连接处没有完全缝合。）风险分析污染的后果（直接风险）污染的途径直接影响下游工艺中没有经过灭菌处理的产品。接触产品容器表面无菌工艺过程中产品敞口操作可能带菌的产品会引起潜在的严重后果通常很难检测最微小的操作错误或设备缺陷会引起高水平的直接风险。当务之急必须避免直接风险风险分析污染的后果（间接风险）污染的路径不会直接引起产品质量问题但是会增加直接风险的水平如：减少环境质量的因素危害作用屏障的因素对每一个工艺步骤进行整个工艺和产品质量安全性分析污染后果是十分重要的风险分析的目的是为了获得每一个工艺步骤错误引发的相关风险的信息检测表明污染时，按照间接风险的程度的采取措施风险评价环境监测—明显后果取决于污染的程度高水平污染低水平污染取决于取样点和取样时间关键点受控点（接近关键点）人员监控（进入关键操作的人员）取决于工艺步骤的影响起始物料生物负荷预过滤无菌产品风险控制环境影响辅料、原料药和组分的生物负载的监控生物负载预过菌的控制环境监控空气活菌和颗粒监控表面监控人员监控房间参数控制压力涡流、空气变换，空气流动速率及流动模式清洁和消毒程序有效性控制风险控制是一个持续的工作，而不是一个计划性的工作风险降低工艺和人员的分离人员入场加强培训和人员资格确认空气电子锁，着装无菌程序（持续改善）改善洁净室行为干扰技术干扰试验后的清理时间工艺失误相关性（反馈）隔离器，封闭设备设备安装后的设置和净化手套完整性的监控物料的进入程序净化程序风险降低转移保护（防止微生物）微生物的动态活动通过动态活动引起微生物的蔓延保持整个循环环境干燥（例如，避免蒸汽灭菌后的湿包）主动转移流体（例空气，水），正确的空气流动模式通过接触移动到表面（例，手指，工具，衣物，昆虫）被动转移只通过沉降如果没有水，没有传输机制，微生物无法进入关键区域空气污染·

我们是否认识到环境监测或培养基灌装充满风险？环境监测活菌计数空气取样的方法撞击式采样器狭缝或筛冲击器，离心采集器粒子由于质量遇到加速气流形成偏转沉积在琼脂表面取样人员不得破坏空气流动模式琼脂平板筛或狭缝单向流或湍流环境监测活菌计数空气取样的方法沉降皿在英国强制美国也是日常使用非常简单和便宜作为半定量作为附加方法但是FDA

不接受作为单一的监测方法微生物数量和空气体积不相关平板暴露时间太长会干掉（在4小时内有效）单向流或湍流沉降板环境监测样本的意义·

例子：洁净室面积30m2，高3.3m，空气换气次数20/hC级别洁净室的体积：100m3总空气体积/8h一换：16000m3取样体积：（3次/点）：3m3微生物的分布操作者的活动决定了微生物人不的不均匀性和波动性一次数据只代表本次的取样该方法的灵敏度不允许对房间的一般情况的作出重要结论空气流动模式和微生物的数量颗粒污染颗粒污染的分布单向流区域直流空气使污染源位置局部化大多认为空气的沉降是来自于污染源空气流的沉降乱流区域房间中的乱流空气可引起污染的分布洁净室的活动状态和空气流动模式将决定了污染分布的模式污染源关键工艺区域高效空气过滤器泄漏污染源监测1、在监控过程中没有发现泄漏2、只在空气活菌监控过程中发现泄漏3、只在颗粒监控过程中发现泄漏当在正确位点监测，持续的监测将提供有效的数据污染源高效空气过滤器泄漏支持区污染的分布：1、监测出污染取决与位点的选择2、泄漏位点和空气模式决定污染的分布颗粒污染在单向流区域的耐受性直流的设计是为了去除污染在单向流区域以0.5m/s空气流速，6s内更换1立方米的空气体积（1小时能换掉600m3）污染颗粒将在数秒内被替换或排掉只有在有污染源的存在下才有空气污染颗粒污染的持续意味着污染源的持续污染源干扰中的错误：空气污染干扰空气直流可能会引起颗粒污染防止空气运动变成污染的运输工具在干扰过程中只有通过专属监测才被检测到干扰之后数秒内污染消失颗粒污染在乱流区域的耐受性高空气换气速率（典型的是每小时换20-60次）通常能引起颗粒污染快速的去除。乱流能够长时间的保留污染。颗粒的清理时间是房间重要的特性知道房间的空气流动模式十分重要在关键工艺区域设立屏障十分重要错误的空气流动模式（实际案例）在冻干机装载过程中水平和垂直气流结合能产生空气流动冲突引发乱流专属环境监控能检测出问题空气流动模式的可视化非常重要错误的空气流动模式（实际案例）设备的凸出能使垂直空气流发生偏转空气流由保护者变成污染源专属的环境监测能检测出问题空气流动模式可视化十分重要颗粒污染总结思考希望颗粒污染尽量少发生通过高频率的换气减少沉降从而有效去除；一旦发现污染，立刻找出污染源；空气流动模式决定房间污染的分布当数据有偏差的时候必须知道和理解空气流动模式

从多个测定点的数据能够解释房间污染的时间和污染的分布单次测定的计数不能有效的解释污染表面污染我们知道环境检测或培养基灌装中的风险？表面污染—来源污染空气的沉降与污染源接触（手套、鞋子、用具、工具等）消毒剂溶液，消毒器具不充分消毒遗留的材料或工具的生物负载（如配料或成份的袋子）环境监控（表面计数的取样方法）接触皿非常简单且便宜最好的半定量方法必须充分压在表面上不同结构表面的取样效率不同消毒剂残留失活引起取样效率不同不适用于不规则表面环境监控表面回收率由接触皿决定表面的粗糙度和保持力琼脂的促生长能力琼脂的表面特性（如湿度）取样技术（接触时间和强度）消毒剂残留的失活即使在光滑的表面也不超过50%有棉签决定表面的粗糙度和保持力棉签的材质和结构取样技术（擦拭力度）洗脱介质和技术（作定量分析）回收介质监测中的回收率消毒剂的反应干燥的消毒剂没有微生物浸入

微生物污染后消毒剂没有受到影响监控

消毒剂被琼脂溶解或携带消毒剂必须灭活

灭活制剂对回收率十分重要表面污染表面污染的耐受性表面污染通常是持久的减少表面污染的存在：机械去除（清洁或转移到其他表面）消毒干燥表面与杀菌剂作用（如重金属离子）由于表面取样引起产品污染的风险也是很高的随着时间推移有损失也是可以接受的（针对不是原则上的错误）污染途径干扰：典型位置1、输送带，转盘，扶正的瓶子2、灌装状态，灌装针的调整3、加塞状态，塞子的注入，扶正的塞子表面污染（实际案例）在安装调试过程中塞子轨道的污染可能通过手套的接触葡萄球菌的污染净化过程不完全没有清除掉环境监控过程未检出培养基灌装过程产生培养基灌装超过100个阳性小瓶就造成培养基灌装失败在整个过称中污染是以逐渐下降的传染速度持续的污染路径—清洁与消毒清洁剂通常是洁净室中唯一的水源水生生物的引入洁净室中微生物的分布设备中微生物沉积引发微生物增殖（碎片，裂缝）消毒剂有可能引入耐受菌污染分布（实际案例）·

灌装间污染的分布1、一次性酒精引入芽孢2、污染的密度远低于警戒水平3、由常规检测鉴定。相对于环境中的其他微生物杆菌通常容易分离表面污染—总结思考比颗粒污染更有耐受性污染的耐热性决定通常对终端操作取样就足够了零星不均匀的分布由污染路径决定由扩散的方式决定按照接触几率决定取样位点回收率是重要的考量·环境监测取样计划怎样设计取样计划（基于风险程序）环境监控的目的是为了证明过程的可控性ISO13408-1无菌工艺工艺定义工艺要做什么需要控制什么基于风险分析的监测ISO-14698-1生物污染控制正式制度受控因素的风险评估会影响过程微生物和产品的质量ISO标准推荐的相似方法欧盟要求GMP附录1新增修订版指南没有局限微生物和粒子洁净度测试方法，推荐了EN/ISO标准的其他相关文件对于微生物的监测没有明确的阐明EN/ISO14644-1标准洁净度确定了取样点和取样量的最小值。常规监测位点必须基于正式风险分析研究和房间级别和净化空气设备的信息共同决定监测位点监测频率（多少是足够？）活菌计数频率A/B级至少1次/班，所有相关位点增加相关干扰监测C级1~2次/周D级2周至1季度表面只通过沉降每班结束后相关位点接触表面（门、把手）人员只通过沉降每人每班结束后手套每班到一个星期的洁净服增加相关干扰监测我们是否需要更多的取样？Akers和AgallocoAgalloco：我们不提倡在非常洁净的环境中增加检测一些可能根本就不存在的污染。增加监测就意味着增加干扰，就意味着增加污染的风险。还没有任何方法证明来源于环境自身的微生物的存在，因此增加取样是没有必要的。Akers：我基本上同意上述观点，但是也要增加一些额外的考量。监测时间和条件（基于人员经验考虑）上游常规空气监测提供了一些无用的结论和数据但是可能会检测到穿刺过滤干扰监测必须在活动的情况下进行否则是无效的

对终端操作进行表面监测就足够了，但是位点的数量值得思考更多的数据帮助评价趋势分析或偏离产品接触表面监测避免误操作欧盟-GMP附录1（加塞和压盖）半加塞冻干小瓶在塞子完全盖好这段时间里必须在

A级条件下保存无菌灌装小瓶的密封系统直到铝盖完全压好才是一个完整的整体小瓶离开无菌工艺区前必须在A级条件下保存，带塞的小瓶应该在A级环境下直到瓶盖完全压上。A级区域的空气支持对微生物的影响对微生物的影响没有详细的阐明是对微生物的关注扶正瓶塞可能带入微生物A级房间活菌小于1cfu/m3）A级区域表面计数是不需要的？检验要求不明确B级背景不是强制性的只通过沉降C级是必须的·监测数据的说明菌落计数（数量）分离计数高很难解释，可能是真的也可能是假的数据必须从背景中看同一时间的数据同一问题点同一高度的数据洁净室新长出的菌取样时间的带入分析鉴定环境监测数据分离计数偏离环境监测数据多组分离计数偏离菌落计数单一计数的意义B级人为干扰进入A级带菌要到少数单个菌落在理想的频率下隔离污染并不意味着有隔离就可以有污染期望病原菌能被隔离调查需被处理理想频率隔离器的位置应考虑到产品安全性趋势是什么？环境监测趋势数据不仅仅是时间下的数量的改变发生概率需被考虑不同发生概率、不同位点或不同场合下的趋势环境监测数据表面和空气计数趋势环境监测数据表面和空气计数趋势·微生物鉴别污染路径（微生物来源和类型）例子人体（革兰阳性球菌，杆菌）水系统（厌氧菌）