药用植物伞真滑刃线虫的初步研究

药用植物伞真滑刃线虫的初步研究

1982年，程虎瑞在南京发现了松竹线植物，并引起黑松的萎缩。20年来，松竹线病虫害的流行范围扩大到江苏省、浙江省、安徽省、广东省、山东省、湖北省以及其他省份。面积76720公顷，果树2000多万公顷，严重影响了中国的森林资源、自然景观和生态环境。鉴于松竹线病虫害在我国大陆的发生，欧盟于2001年10月向包括中国大陆在内的松竹线昆虫病区的货物木材建筑材料提出了额外的检疫要求。这意味着中国的口岸检验检疫机构在打开和传达国际贸易货物木材时投入大量人力和物力。厦门口岸在对出口货物的针叶木包装的检疫监管和实验室检验中,多次从来自福建的马尾松(Pinusmassoniana)包装木上分离出多种伞滑刃线虫.除拟松材线虫(Bursaphelenchusmucronatus)、奇异伞真滑刃线虫(B.aberrans)等线虫外,还鉴定出我国尚未记录的一种伞真滑刃属线虫:树皮象伞真滑刃线虫[Bursaphelenchushylobianum(Korenchenko,1980)Hunt,1993].该线虫最早由Коренченко(1980)在前苏联发现,原命名为Parasitaphelenchushylobianum,Hunt于1993年把这个种归入伞真滑刃线虫属中,重命名为Bursaphelenchushylobianum.现将鉴定结果报道如下:1材料和方法1.1样本采集在出口货物的堆场和工厂仓库,采集有蓝变的马尾松包装木,用塑料袋密封后带回实验室,供分离线虫.1.2线虫分离、接种1)浅盘法分离时将包装木劈成10mm×100mm木条,置于浅盘的漏筛中,放入水中浸泡24h后,用孔径为800μm和40μm的套筛过滤线虫分离液,并用少量的蒸馏水将40μm筛上收集的线虫洗到培养皿中,放进4～10℃冰箱中保存待用.2)松材线虫快速分离器将包装木锯成100mm长的木块,直接放进快速分离器,利用水流压力差使木材中的线虫被迅速通过的水流带出,5min后收集分离液,离心沉淀,4～10℃冰箱中保存待用.3)取一部分线虫置于电热板上,经50℃～60℃缓慢加热杀死后用TAF固定液固定和保存.取另一部分线虫接种到PDA培养基上培养的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)上进行繁殖,取单条受精雌虫繁殖的后代,用同样的方法固定和保存.1.3线虫形态和测量线虫标本以TAF固定液为浮载剂,用Leitzdiaplan显微镜和NikonDiaphot倒置显微镜对线虫的整体形态和内部特征进行观察、绘图和拍照,在显微镜下测量并记录相关数据,用DeMan公式计算.根据形态特征和测量结果,查对原始记录和有关资料,作种的鉴定.2包装木的测定2002年厦门口岸共检查出口货物包装的针叶木71批,样品83份,其中9份样品检出B.hylobianum,这些包装木均为福建的马尾松.2.1enchushylo东南角-kn-性别,适用从福建省马尾松木包装材料分离提取到的伞真滑刃线虫,鉴定为树皮象伞真滑刃线虫(Bursaphelenchushylobianum(Korenchenko,1980)Hunt,1993);隶属滑刃目(Aphelenchida),滑刃总科(Aphelenchoidoidea),寄生滑刃科(Parasitaphelenchidae),伞真滑刃属(Bursaphelenchus).2.2测量值2.3前伸及后阴形.雌虫:虫体纤细,大小中等,缓慢加热杀死后向腹面稍弯曲.体环细但明显,侧区有两条侧线.头部缢缩,唇瓣6个;口针长13.9～16.3μm,箭部略为膨大,箭部长度接近口针全长的一半,基部膨大成球状;食道前体部圆筒形,其长几乎为中食道球直径的2.5倍,和中食道球连接处无明显缢缩,中食道球圆形或卵圆形,几乎与体腔等宽,其瓣门位于中食道球中部或稍偏后(图1B),食道腺长叶状,几乎为体宽的4～5倍长;神经环位于中食道球后部;排泄孔位于中食道球后1～1.5倍中食道球长距离处;生殖腺单管,前伸,其长度几乎是体长的50%;阴门处有小的阴门盖(图1C);后阴子宫囊长约为肛阴距的1/2至3/4;肛阴距几乎为尾长的4倍,尾长为肛门处体宽的3～4倍;尾部略为收缩,圆锥状,末端钝,尾部末端弯曲明显(图1D),有些个体在钝圆的末端有微突,微突或居中或靠近腹面.雄虫:虫体热杀死后向腹面弯曲较明显,在尾部弯成钩状,其它形态特征和雌虫相似;单精巢,前伸,末端回折;交合刺强壮,并有明显弯曲,成对,不愈合,末端有帽状突起,髁突明显突起,靠腹面的喙突钝圆(图1E);尾端圆锥状,靠背面位置有较长的交合伞,交合伞形状除末端卵圆形外,还有平截形,边缘不平滑,带有2～4个端点,交合伞包住尾部1/4～1/3的部分(图1F、G、H);尾部有7个乳突:1个肛前乳突位于泄殖腔正前方,1对肛侧乳突,其后还有2对肛后乳突,其中1对位于交合伞起始处,另外1对乳突较小,位于尾部末端,很明显(图1E、F箭头所指的部位).为进一步确认,将该线虫的形态测量值与其他地区的虫口进行比较(表1).根据线虫形态特征和测量值及比较结果,福建虫口与以前的两次对该种线虫的报道较一致,该种线虫的一个显著特征是雄虫有一个大而强壮的交合刺,交合刺长20～23μm.因此把该线虫鉴定为树皮象伞真滑刃线虫(Bursaphelenchushylobianum(Korenchenko,1980)Hunt,1993).3林分树真滑浆线虫在不同地理分布的种群中的地位1)树皮象伞真滑刃线虫(Bursaphelenchushylobianum)最早由E.A.Коренченко于1980年在前苏联的马加丹省报告,那是从寄生在白毛树皮象(Hylobiusalbosparsus)身体上分离到的.尔后,Brassch于2001年在德国从俄罗斯进口的欧洲赤松(P.sylvestris)和落叶松(Larixsp.)原木上分离到该线虫,2002年,她在泰国调查时也在北部的ChiangMai(位于北纬19°～20°之间)南亚松(P.merkusii)上记述了该虫种;本文也描述了该种线虫,系2002年在福建省的马尾松包装木上发现的,为中国的新记录种,马尾松为该种线虫的寄主新记录.2)这几次记述的树皮象真滑刃线虫不同地理分布的种群虽然都处于亚洲,但纬度相差如此之大,跨越两个生物地理分布区,古北区和东洋区,而福建正处于两区的交界处;在不同分布区中,该线虫的寄生场所也不一致,一些是寄生在白毛树皮象体内的血腔里,一些则寄生在针叶树中.该虫种分布如此之广,可能存在着不同地理分布的种群,该线虫与昆虫的关系更为密切.在原始报道中,该线虫寄生在白毛树皮象血腔中,这与其他伞真滑刃线虫粘附于昆虫体表或存在于气门里有本质区别,前者是真正的寄生关系,而后者仅仅是共栖关系.该虫种的宿主昆虫白毛树皮象仅分布在俄罗斯的西伯利亚、日本和我国的黑龙江、吉林两省,其分布远不如该线虫本身分布的两个生物地理区广,是否还有其他种昆虫与之相关,有待研究.3)树皮象真滑刃线虫中国福建种群在雄虫交合伞的形状方面,与Braasch等人对泰国种群的描述一致,但原始报道仅描述该线虫雄虫交合伞为卵圆形;而在雄虫尾部腹面乳突的形态方面,原始描述有9个乳突,即泄殖腔前方有1个肛前乳突,1对肛侧乳突,在尾部末端有1对较大乳突,位于交合伞起始处,末端还有2对小乳突,而Braasch等人对泰国种群雄虫尾部腹面乳突的描述是:泄殖腔前方有1个肛前乳突,1对肛侧乳突,其后还有1对位于交合伞起始处,共5个乳突,除此之外没有其他乳突.福建种群在形态上与前面的报道存在着这些细微的差异,这些差异或许是不同的地理分布和寄生的场所造成的.4)2002年从出口货物马尾松包装木的83份样品中检出3种伞真滑刃线虫,32份样品检出拟松材线虫,9份样品检出树皮象伞真滑刃线虫,3份样品检出奇异伞真滑刃线虫,后者已由YusengF.等于2002年作为一个新种报道.拟松材线虫不但检出率高,而且种群数量相当大,这和其它地方的