临床分子生物学检验学技术

临床分子生物学检验学技术【名词解释】基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA。单核苷酸多态性(SNP)：主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNADNA串联重复序列，尤其是基因编码序列或侧翼序列的三核苷酸重复次数增加所引变效应，所以被称为动态突变。限制性片段长度多态性(RFLP):是依据不同个体基因组的限制性内切酶的酶切位DNA增反响的模板。内含子(intron)：断裂基因中不编码的间隔序列称为内含子，内含子是在mRNA被转录后的剪接加工中去除的区域。mRNA的区域。要对参与杂交反响的核酸分子进展标记，这一段被标记的核酸分子就是探针。酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。分布，对基因序列及功能进展大规模、高通量的争论。阵列，以获得蛋白质的表达、构造、功能和相互作用的信息。检测每个探针分子的杂交信号强度，进而猎取样品分子的数量和序列信息。化过程中高度稳定，对细胞无害，而且在把握细胞生长和分化中起重要作用。抑癌基因(anti-oncogene)：为一类可以编码对肿瘤形成起阻抑作用的蛋白质的基因，正常状况下抑制细胞增殖，促进细胞分化。最正确条件下的变异(OCV)：是指在某一试验室内，在最抱负和最恒定的条件下，到达的周密度的最高水平。常规条件下的变异(RCV)：是指在某一试验室内常规条件下，对同一质控品进展起的疾病。链及能量代谢障碍所致的以脑和肌肉受累为主的多系统疾病。肽段质量图谱，呈现独特的指纹特征。单核苷酸多态性，从中筛选出与疾病相关的位点。Tm特点设计的一种检测核酸突变和多态性的技术。PCRDNADNAPCR：是对靶DNA21物。(通常设计两对引物)过的循环次数。【填空题】一级构造的完整性)；二是尽可能(排解其他分子的污染，保证核酸样品的纯度)。在PCR反响中,Mg++是个至关重要的因素，浓度(过低)会降低酶的活性，浓度(过高)又会导致非特异性扩增。用于核酸杂交的一般硝酸纤维素膜最大的优点是(本底低交信号，缺点是(脆性大)易裂开，且对<500bp整个核酸杂交反响主要由(预杂交)、(杂交)、(洗脱)三个步骤组成。步的固定，常用的固定方法是(烘烤)、(紫外线固定)和(碱固定)。【简答题】一、原癌基因激活机制：①点突变②易位激活③原癌基因扩增④癌基因甲基化的程度降低二、抑癌基因失活方式：DNARb、p53、WT1。DNA达，最终导致肿瘤的发生。三、病毒病的检出策略：染以及被何种病毒感染，是快速诊断病毒病的首选方法。分析。四、细菌感染的检出策略：五、PCR列互补。20~30二级构造:两条引物自身或引物之间一般不应存在互补序列，避开形成二级构造或引物二聚体，影响引物与模板的正确结合。4.碱基分布:引物中的四种碱基应随机分布、组成平衡，避开消灭嘌呤嘧啶碱基积存。TmTm2~5°C。3”端的几个碱基应与模板严格配对，不能进展任何化学修饰。同时引物3”端最终一个碱基最好不落在密码子的5”端可加修饰成分，如酶切位点、突变位点等。六、水解探针技术TaqMan探针原理反响体系除了有一-对引物外,还需要一条荧光素标记的探针，探针的5”标记荧Q。依据荧光共振能量传递(FRET)R，TaqDNATaqDNA基团的抑制而放射出荧光，仪器的检测系统便可检测到荧光信号。七、简述探针的种类和优缺点cDNA目前应用最为广泛的一种探针.基因组探针:从基因组文库里筛选得到一个特定的基因或基因片段的克隆后，大量扩增,纯化，切取插入片段，分别纯化为探针.DNA酸片段作为探针.RNARNARNA八、蛋白质芯片及原理原理:将的蛋白质固定在经特别化学处理的固相载体上，依据这些生物分子从而检测未知蛋白质的表达水平和构造。九、核酸的分别纯化步骤对后续的试验尤为重要。因而，分别纯化核酸应排解其他分子的污染,并保证核酸构造的完整性。目前核酸的分别纯化主要包括4个步骤:①制备细胞及裂开细胞;②消化蛋白质，去除与核酸结合的蛋白质、多糖及脂类等生物大分子;③去除其他不需要的核酸分子;④沉淀核酸，去除盐类、有机溶剂等杂质。十、双向凝胶电泳原理双向凝胶电泳(two-dimensionalelectrophoresis2-DE是利用蛋白质的电荷数和分电泳(iso-electricfocusing,IEF)pH有不同电荷的蛋白质分别形成区带。将第一向电泳凝胶放入其次向电泳的蛋白质。十一、16SrRNA基因序列分析鉴定细菌原理及优点细菌16SrRNA基因构造特征：16SrRNA基因编码原核生物核糖体小亚基rRNA(16SRNA),长度约1500bp,存在于全部细菌及衣原体、立克次体、支原体、1011无差异；可变区因细菌而异，变异程度与细菌的系统发育亲热相关。2.16SrRNA基因序列分析鉴定细菌原理：16SrRNA基因被称为细菌的“分子化3得针对该基因的分子生物学检测具有较高的灵敏度;②多信息:由可变区和保守PCR炎及慢性前列腺炎等细菌感染性疾病的检测。十二、荧光原位杂交技术(FISH)技术的原理FISH测，再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合，来检测DNA记好的核酸探针变性，然后与被检标本上已变性的靶核酸在退火温度下进展复不变的状况下，对待检靶核酸序列进展定位、定性和相对定量分析。十三、DNA芯片的原理和应用:①DNADNADNA，RNA②应用:在肿瘤基因表达谱差异争论、基因突变、基因测序、基因多态性分析、机制争论等供给了有力工具。基因表达分析。c.疾病诊断。f.预防医学。十四、α珠蛋白生成障碍性贫血分类十五、原核生物基因组特征1.原核生物基因组较小原核生物的类核构造原核生物的操纵子原核生物的构造基因具有编码同工酶的基因含有可移动的DNA序列十六、病毒基因组的特征1.基因组的碱基组成基因组的核酸类型基因组中有重叠基因基因组中具有操纵子构造基因组的非编码区少基因组的重复序列少基因可连续也可连续基因组是单