sz诱导的人类型糖尿病小鼠模型的建立

sz诱导的人类型糖尿病小鼠模型的建立

1材料和方法1.1材料表面1.1.1体重、体重分布昆明小鼠，体重18克2克。p17大鼠，体重15g2克。它们都是雄性的，被称为f级。它们由中国科学院实验动物研究所购买，动物证书号：scxk（北京）2005-0013。1.1.2stz公司的纺粘设备链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),Sigma公司产品。基础饲料,购于华北煤炭医学院动物养殖中心,高脂高糖饲料,参考杨爱君等方法由本室自制。1.1.3主要设备爱科来京都血糖仪GT1810和血糖试纸为日本ARKRAYFactoryInc产品,批号:8H6F51。1.2方法1.2.1动物组和剂量法1.2.1.各组按大小剂量组的划分40只昆明鼠、40只C57鼠随机分成正常对照组(A)和用药组(B)。B组又分为低、中、高剂量组,每组10只(n=10)。A组基础饲料饲喂,B组均给予高脂高糖饲料,自由饮水。1.2.1.两组两组临床疗效比较第4周开始B组腹腔注射STZ,低、中、高剂量组每天剂量依次为50、70、90mg/kg连续4d;A组同法给予等剂量的柠檬酸缓冲液。1.2.2测量血糖和体重各组小鼠于第3周末(注射STZ前)及末次给药后3、7、15d分别测体重和空腹血糖值并记录。1.2.3统计分析统计分析所有试验数据用统计软件SPSS11.5进行统计分析。结果以平均数±标准差(X¯¯¯±SD(X¯±SD)表示,用方差分析进行统计分析,检验的显著性水准P=0.05。2结果2.1在实验过程中，大鼠血液和活动期的变化2.1.1各组小鼠血糖指标的变化注射STZ前,于第3周末测各组小鼠空腹血糖值,经统计学检验各组间血糖无差异。注射STZ3d后,各用药组血糖均有所上升,且与对照组间具有统计学意义(P<0.01);但低剂量组未完全达到成模标准(空腹血糖值≥11.5mmol/L),中、高剂量组血糖值升高明显,达到糖尿病小鼠建模成功血糖指标,且与低剂量组间相比差异极显著(P<0.01)。用药7d后,中剂量组小鼠均存活;高剂量组死亡6只、存活4只,15d后,只存活2只(表1和表2)。2.1.2各组血糖的变化注射STZ3d后,各用药组血糖均有所上升,且与对照组间具有统计学意义(P<0.01);但各用药组均未达到成模标准(P<0.01)。用药7d后,中、高剂量组血糖升高明显,15d后中剂量组血糖趋于稳定;高剂量组用药7d后死亡3只、存活7只,15d后,只存活4只。中剂量组小鼠无死亡现象(表3)。2.2在实验过程中，大鼠的体重和外观发生了变化2.2.1重与重的差异表4显示,注射STZ前各用药组和对照组间小鼠体重具有极显著差异。给药3d后,对照组和低剂量组间具显著差异(P<0.05),中、高剂量组和低剂量组间具有极显著差异(P<0.01)。2.2.2stz对大鼠体重的影响由表5可见,注射STZ前各用药组体重与对照组具有极显著差异,注射STZ7d后,低剂量组、高剂量组体重与中剂量组间有极显著差异,中剂量组体重降低最显著。2.2.3方案一:自动敏畅,粪尿正常注射STZ前各组小鼠皮毛光泽油亮顺滑,精神状态佳,行动敏捷,粪尿正常。用药3d后,各组小鼠发生明显变化,出现精神委靡不振,活动明显减少,皮毛干燥粗糙并稀疏,尿量增多,饮水量亦明显增多。3stz模型的建立及应用有报道指出,STZ对动物胰岛β细胞具有选择性的破坏作用,小剂量时诱导大鼠胰腺β细胞株INS-1凋亡,大剂量导致β细胞坏死。Ⅱ型糖尿病的发病机制为胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能受损。众多研究显示,高糖食物可引起动物高胰岛素血症,高脂食物引起糖耐量减低及β细胞分泌胰岛素功能减退。本研究利用高脂高糖饲料饲喂小鼠3周后,各用药组体重明显高于对照组(P<0.01),为造胰岛素抵抗NIDDM模型的建立提供了前提。注射STZ3d后测定空腹血糖值发现,昆明鼠中、高剂量组达到了建模标准,各C57鼠血糖值均未超过11mmol/L;7d后昆明鼠各用药组均达到建模标准,C57鼠中、高剂量组均达建模标准。15d后高剂量组昆明鼠只存活2只、C57存活4只小鼠。体重方面,昆明鼠用药3d后中、高剂量组与低剂量组间出现显著性差异(P<0.05),7d后,两种小鼠各用药组体重均减轻并与对照组间出现极显著差异(P<0.01)。另外,C57组,STZ的注射剂量越高,体重减轻的幅度越大。并且自造模成功后,各用药组体重均出现逐日降低的趋势。这与人类糖尿病人血糖升高,体重减轻,多饮多尿症状类似。本试验结果显示,诱导建立昆明鼠NIDDM模型的适宜STZ剂量为50mg/kg和70mg/kg,C57鼠为70mg/kg;由试验数据可看出,C57鼠用中剂量注射7d后,血糖值才升高,推测STZ对C57鼠胰岛β细胞的破坏过程比昆明鼠要缓慢,每天90mg/kg对两种小鼠的致死率均较高,不宜多次使用。Ⅱ型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病,Non-insulin-dependentdiabetesmellitus,NIDDM)占糖尿病患者的90%以上,其发病机制多认为是由胰岛素抵抗和β细胞功能缺陷引起。建立较为理想的模拟人类Ⅱ型糖尿病发病过程和代谢特征的动物模型,对糖尿病发病机制的研究以及筛选降血糖药物的研究均有着十分重要的意义。利用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立糖尿病动物模型是目前国内外学者普遍采用的一种