宫颈癌良恶性病变中三种激酶表达的比较

宫颈癌良恶性病变中三种激酶表达的比较

1和2个细胞周期检测点（kinse1、2、chk1、chk2）是细胞周期检测点（g1、s、s、m）发挥作用的主要激酶，用于修复肿瘤放疗和化疗引起的dna损伤。1个细胞像激酶（pgi-soa1，plk1）主要在m期发挥作用，肿瘤失去的dna在此期恢复。然而，这三个检测点中关于肿瘤组织中发现的激酶数量很少，也没有对肿瘤介质进行研究。本实验将应用免疫组化方法检测Chk1、Chk2和Plk1蛋白在宫颈癌和慢性宫颈炎组织中的表达,研究3种细胞周期检测点激酶蛋白在宫颈良恶性病变中的表达差异,探讨其与宫颈癌临床病理特征的关系及3种激酶在宫颈癌组织中表达之间的相互关系,为临床治疗提供依据。1对象和方法1.1手术治疗患者的选择以同济医院妇产科2000年4月—2002年6月确诊的宫颈癌患者并行手术切除,术后送病理检查证实为宫颈癌患者为样本,剔除术前接受放化疗的,剔除合并其他自身免疫性疾病、内分泌疾病、代谢性疾病等的患者,将剩下的患者编号,由电脑随机选取宫颈癌患者43例。其中鳞癌38例,腺癌4例,腺鳞癌1例。按FIGO1994分期:0期3例,Ⅰ期23例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例,Ⅳ期0例。年龄24～80岁,中位年龄48岁。同时由电脑随机选取我院2002年经病理确诊的慢性宫颈炎患者20例,年龄20～59岁,中位年龄38岁。1.2免疫组化染色小鼠抗人Chk1单抗(稀释度1∶200)、小鼠抗人Chk2单抗(稀释度1∶100)及小鼠抗人Plk1单抗(稀释度1∶100)均为美国SantaCruz公司产品;SP试剂盒、显色剂DAB购自北京中山公司。免疫组化染色按SP试剂盒说明书进行,PBS代替一抗作阴性对照,已知阳性片作阳性对照。Chk1、Chk2和Plk1均主要表达于胞核,部分表达于胞质。根据着色程度分别记0分、1分、2分、3分。阳性细胞<10%记0分,10%～24%记1分,25%～49%记2分,50%～74%记3分,≥75%记4分。综合判定取着色强度和阳性细胞百分数分值之积:0分记为(-),1、2分记为(+),3、4分记为(++),6、8分记为(+++),9、12分记为(++++);(-)和(+)定义为阴性即低表达,(++)～(++++)定义为阳性即高表达。1.3统计处理采用SPSS11.5软件进行χ2检验及Spearman等级相关分析,取α=0.05为显著性校验水平。2结果2.1%表达情况43例宫颈癌病变组织中,Chk1阳性33例,占76.7%,Chk2阳性26例,占60.5%,Plk1阳性14例,占32.6%,表达情况见图1及表1。20例慢性宫颈炎病变组织中Chk1、Chk2和Plk1的阳性分别为6例、7例和0例,占总例数的30.0%、35.0%和0,表达情况见图2及表1。Chk1、Chk2和Plk1在宫颈癌组织中的阳性率均高于宫颈良性病变,其中Chk1和Plk1的表达差异有显著性(P<0.01),但Chk2的表达差异无显著性(P>0.05,见表1)。2.2患者年龄、组织病理学类型和临床分期关系统计分析显示,Chk1、Chk2和Plk1的表达与宫颈癌患者年龄、组织病理学类型和临床分期无关(P>0.05,见表2)。但Chk1和Plk1的表达在不同分化程度宫颈癌患者中的差异有显著性(P<0.05,见表2)。2.3chk1、chk2表达的关分析将43例宫颈癌病变组织的Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表达水平做Spearman等级相关分析发现:Chk1与Chk2的表达呈正相关,相关系数r=0.492,P=0.001;Chk1与Plk1及Chk2与Plk1间无相关关系(统计学参数分别为r=0.283,P=0.066和r=0.151,P=0.335)。说明Chk1与Chk2蛋白在表达上存在着密切的联系。3激酶蛋白的表达与妊娠机制中的发挥作用Chk1、Chk2均为丝氨酸/苏氨酸激酶,是ATM(ataxia-telangiectasiamutated,共济失调毛细血管扩张症突变基因)及ATM相关基因的下游效应基因,位于细胞周期检测点激活途径的终端,当细胞DNA受到放射线或化疗药物作用而损伤时,Chk1、Chk2通过调控CDC25(A、B、C)、Weel、14-3-3蛋白,激活DNA损伤检测点,使细胞周期阻滞于G1/S、S和G2/M期,进行受损DNA的修复。Plk1是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,参与细胞周期中的中心体的成熟、纺锤体的形成以及染色体的分离等过程,当DNA受损时,Plk1在M期检测点发挥作用,从而使细胞阻滞于M期。在肿瘤放疗或化疗后,肿瘤细胞DNA受损后将阻滞于上述各个周期检测点,客观上为细胞的生存提供了条件,这也是临床上肿瘤放疗抵抗和化疗耐药产生的重要机制。因此,将这些周期检测点激酶作为放化疗增敏的靶点,可能可以成为一条比较理想的肿瘤治疗策略。通过免疫组化检测后发现,3个激酶蛋白在宫颈癌组织中的表达均高于宫颈良性组织,特别是Chk1和Plk1,良恶性组织的表达差异有显著性,与先前报道相符,说明这两个蛋白具有相对意义上的肿瘤选择性表达,具有更好的靶向特异性,且Chk1在宫颈癌组织中有76.7%的高表达,Plk1在良性病变中无明显表达,说明Chk1和Plk1更有可能成为较理想的宫颈癌治疗靶点。将3种激酶蛋白的表达与宫颈癌患者各临床病理特征进行统计分析后得出,Chk1和Plk1的表达在不同分化程度宫颈癌患者中的差异有显著性,分化越低,表达越高,提示这2个激酶可能在宫颈肿瘤的发生发展中发挥了某些作用。Chk1、Chk2在宫颈癌组织的表达有相关性,这与两者均为ATM/ATR下游效应基因,发挥相似作用的事实相符。但两者在表达水平和与宫颈癌患者各临床病理特征的关系上却有不同,说明两者还存在差异,这与多位学者的报道一致。综上所述,Chk1和Plk1在宫颈恶