几种药剂对南方根结线虫的生物活性测定

几种药剂对南方根结线虫的生物活性测定

南方根结线虫是致癌的重要生化生物之一。南方根结线虫分布广,在我国南方各省及北方蔬菜生产大省均有分布,如山东、河北、河南、辽宁、黑龙江、新疆等省。南方根结线虫寄主范围广,超过3000种植物,分属于114科,其中以茄科、葫芦科、十字花科等植物受害尤为严重。为害时受害根部产生大小不等的瘤状物或根结,地上部分生长缓慢,叶片变黄,植株矮小,甚至枯死。为害严重时可造成减产10%~20%,严重时可达30%~40%,甚至绝产。目前我国对南方根结线虫的防治以化学防治为主,但以往可用于防治农作物线虫的药剂多为毒性高、残留期长的药剂,如甲基异柳磷、涕灭威、氯唑磷等,而且可供选用的药剂种类少,导致连续单一使用,杀线虫产生抗药性,防治效果差等问题。随着灭线磷、克百威等高效杀线虫剂的禁止或限制使用,寻找安全、高效防治药剂,是防治南方根结线虫面临的重要问题。在杀线剂研究与应用方面,国内研究对生防菌复配、阿维菌素与辛硫磷复配做了一些研究,而不同类型杀虫剂对南方根结线虫的活性尚缺少系统的研究和评价。为此,本研究对阿维菌素、有机磷、生物源、新烟碱类4类共9种不同作用机理杀虫剂对南方根结线虫卵囊及2龄幼虫(J2)进行毒力测定及二元复配,以期选出防治南方根结线虫的高效药剂及复配组合,为生产上科学合理地用药提供依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1大学昆虫在番茄体内的分布南方根结线虫采自广西南宁市武鸣地区危害严重的番茄病根,经单卵纯化后由广西大学昆虫所保存和繁殖于番茄根部。取接种50d的番茄根,置于0.5%次氯酸钠中消毒3min,用无菌水冲洗干净后挑取卵囊,置于25℃培养箱中孵化3~4d,收集2龄幼虫(J2)配制成400条/mL的悬浮液备用。1.1.2毒树叶片83.5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐原药(简称:甲维盐,河北威远生物化工股份有限公司);92%辛硫磷原油(邢台市农药有限公司);97%毒死蜱原药(江苏常隆农化有限公司);98%噻虫嗪原药(瑞士先正达作物保护有限公司);90.2%阿维菌素原药、95.00%噻虫胺原药(河北威远生物化工股份有限公司);42.75%印楝素原药(云南潞西市光明印楝产业开发有限公司);89.10%噻唑膦原油(日本石原公司);81%多杀菌素原药(美国陶氏益农公司)。1.2测试方法1.2.1不同药物的毒性试验1毒力检测试验室内毒力测定采用浸泡杀线虫法。试验药剂用少量丙酮溶解,然后用1%吐温水溶液配成有效成分含量为10000mg/L的母液,再用0.1%吐温水溶液稀释成设计质量浓度。各药剂对2龄幼虫的处理浓度经预备试验后确定。取24孔细胞培养板,将各稀释药液加入每孔有1mL的400条/mL悬浮液中混匀,每处理设3个重复,设无菌水溶液处理为对照。置于(25±2)℃培养箱中,于处理后24h观察,镜检线虫死亡情况,计算校正死亡率,建立毒力回归方程并计算LC50值。参考万树青的方法判断线虫死亡与否。2封口膜封严法在每个经高温灭菌的培养皿(直径6.0cm)中加入3枚大小、发育一致的卵囊(2000粒卵左右),再分别加入4mL药液,用封口膜封严,以减少液体的蒸发。置(25±2)℃条件下恒温培养。5d后在倒置显微镜下镜检各处理2龄幼虫孵化数。计算不同质量浓度对卵孵化的相对抑制率。1.2.2药剂配比对毒力检测结果的影响根据单剂室内毒力测定结果,选择对线虫和卵囊有较高活性及具有不同作用机制的毒死蜱、阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、噻唑膦4种药剂,采用交互测定法,测定其不同配比对线虫2龄幼虫(J2)的毒力。各处理中2个单剂的比例见表1,以各自LC50值为100%,然后8等分,分别计算在各比例中的含量。各处理测定结果计算预期死亡率和毒效比,公式如下。毒效比>1.25,表现增效作用;毒效比<0.75,表现拮抗作用;毒效比在1左右为相加作用。根据毒效比筛选具有增效作用的最佳配比组合。1.2.3联合毒力的计算及增效作用选择毒效比大,增效作用明显的配比制剂,测定其对线虫2龄幼虫(J2)及卵囊的联合毒力,采用Sun等(1960)的方法计算共毒系数(CTC),依据共毒系数评价药剂复配后的增效作用。当CTC≥120时为增效作用;当CTC≤80为拮抗作用;当80<CTC<120时为相加作用。2结果与分析2.1南方根结线虫j2对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和噻虫胺的敏感性各药剂对南方根结线虫J2及卵囊的毒力测定的结果见表2。从表2中可看出:测试的药剂中,对南方根结线虫2龄幼虫(J2)的毒力大小依次为甲氨基阿维菌素苯甲酸盐>阿维菌素>噻唑膦>毒死蜱>辛硫磷>多杀菌素>印楝素>噻虫嗪>噻虫胺,即南方根结线虫J2对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐最敏感,其次是阿维菌素、噻唑膦、毒死蜱,而对辛硫磷、多杀菌素、印楝素、噻虫嗪敏感度较低,其对噻虫胺敏感性最低。不同药剂对卵囊孵化率的抑制作用大小依次为甲氨基阿维菌素苯甲酸盐>噻唑膦>阿维菌素>多杀菌素>印楝素>辛硫磷>毒死蜱>噻虫嗪>噻虫胺,即甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对南方根结线虫卵囊的毒力,其次是噻唑膦、阿维菌素、多杀菌素、印楝素,而辛硫磷、毒死蜱、噻虫嗪毒力较低,以噻虫胺毒力最低。综合药剂对南方根结线虫J2及卵囊的毒力测定结果,表明阿维菌素类药剂甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、阿维菌素对南方根结线虫活性最高,其次是有机磷类药剂噻唑膦、毒死蜱、辛硫磷,再次是生物源类药剂多杀菌素和印楝素,新烟碱类药剂噻虫嗪、噻虫胺的效果最差。2.2增效作用的比较不同药剂按不同比例混配后对线虫2龄幼虫(J2)毒力测定结果见表3。结果表明:甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与噻唑膦混配中,第(5)、(6)组的实际死亡率明显高于预期死亡率,毒效比分别为1.26、1.54,均大于1.25,具有增效作用,其中第(6)组增效作用明显;甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与毒死蜱混配中,第(4)组的实际死亡率明显高于预期死亡率,毒效比为1.38,大于1.25,具有明显的增效作用;阿维菌素与噻唑膦混配中,第(3)、(4)组的实际死亡率明显高于预期死亡率,毒效比分别为1.55、1.37,均大于1.25,表现出明显的增效作用;毒死蜱与噻唑膦混配中,第(5)组的实际死亡率明显高于预期死亡率,毒效比为1.41,大于1.25,增效作用明显。2.3阿维菌素和噻唑膦混配组合几种高毒效比的药剂配比(组合)对南方根结线虫J2和卵囊的联合毒力测定结果见表4。结果表明,对南方根结线虫J2,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与噻唑膦混配组合(6)(有效成分配比25∶75)、阿维菌素与噻唑膦混配组合(3)(有效成分配比70∶30)的共毒系数均大于120,表现出明显的增效作用;对南方根结线虫卵囊,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与噻唑膦混配组合(6)、阿维菌素与噻唑膦混配组合(3)的共毒系数也均大于120,亦表现出明显的增效作用。说明按这2个药剂组合配比混配对南方根结线虫均有增效作用,其中以阿维菌素与噻唑膦混配组合(3)(有效成分配比70∶30)的增效作用最显著,共毒系数达159.37。3对南方根结线虫2龄幼虫、2南方根结线虫是我国很多农作物的病原线虫,近年来危害日趋严重,其防治方法虽然有农业防治、物理防治、生物防治和化学防治等多种方法,但化学防治一直是防治南方根结线虫的重要手段。以往防治南方根结线虫的药剂多为高毒、高残留药剂,生产上迫切需要寻找新的高效、安全药剂。本研究通过室内生物活性测定,筛选出对南方根结线虫具有较高活性的药剂种类,并通过交互混配,筛选出有显著增效作用的混配组合及混配比例,为南方根结线化学防治虫提供了新的药剂选择,同时也为了进一步开发复配型杀线剂打下了基础。本研究中,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对南方根结线虫2龄幼虫(J2)和卵囊均表现出很高的生物活性,其对2龄幼虫(J2)的毒力为阿维菌素的5.36倍、噻唑膦的5.56倍,对卵囊的毒力是阿维菌素的1.56倍、噻唑膦的1.08倍。有关其对南方根结线虫卵囊的生物活性尚未见有研究报道。在以往的研究报道中,邹雅新等报道阿维菌素和硫线磷对南方根结线虫的卵和卵块的孵化以及2龄幼虫均有很强的抑制作用,并且阿维菌素的活性较强;漆永红等采用浸渍法测试得到3%阿维菌素EC和10%噻唑膦GR对南方根结线虫的卵、卵囊孵化均有抑制作用,其中10%噻唑膦GR对卵囊的孵化率抑制效果较好,3%阿维菌素EC对线虫2龄幼虫的杀灭活性较强;丁晓凡等研究结果表明甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对南方根结线虫2龄幼虫(J2)毒力高于阿维菌素,本研究中,上述2种药剂的表现基本相似。表明在南方根结线虫化学防治过程中,可优先选用甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、阿维菌素和噻唑膦作为防治药剂。这些药剂与以往常用的一些杀线剂相比,毒性较低,安全性更好。目前市面上防治南方根结线虫应用较多的药剂主要为有机磷类和阿维菌素类,但品种少,且长期单一使用,致使防效下降,同时也将面临着根结线虫抗药性的问题。新药剂开发难度大、成本高、周期长,因此,从现有杀虫剂中筛选对线虫具有较高活性的药剂种类用于防治南方根结线虫,尤其是通过复配,筛选具有增效作用的复配型杀线剂,可以提高防治效果,降低单位面积用药量,从而降低成本,延缓抗药性,具有重要的现实意义性。本研究通过交互混配,筛选出来甲氨基阿维菌素苯甲酸盐与噻唑膦、阿维菌素与噻唑膦混配的两个组合,