白藜芦醇提取分离与生理活性研究进展

白藜芦醇提取分离与生理活性研究进展

白俄罗斯林是一种含有糊精素的非黄酮类多酚类化合物。它的化合物为c14h12o3，相对分子量为228.25。化学名称为3、4、5-3羟基-1和2-2苯乙烯，具有顺和逆两种结构（见图1）。在自然界中，反性质主要存在于反性质中，其反性质异构体的生物活性高于顺状异构体。白藜芦醇早在1924年就被发现,于1940年被人们首次从毛叶藜芦的根部分离而得到。白藜芦醇广泛存在于许多天然植物体中,目前至少已经在21个科,31个属的72种植物中发现了白藜芦醇。如葡萄科的葡萄属(VitisL)、蛇葡萄属(AmpelosisMichx)、豆科的落花生属(ArachisL)、决明属(CassiaL)、槐属(SophoraL)、百合科的芦醇属(VeratrumL)、蓼科的蓼属(PolygonumL)等。1白俄罗斯油提取白藜芦醇是一种植物体中次生代谢产物,在植物中含量较低,以虎杖(GiantKnotweed)、葡萄中含量相对较高。1.1超声波辅助提取康彦芳等用超声波法对从葡萄穗轴废渣中提取白藜芦醇的工艺进行了研究,超声提取6min的提取率与有机溶剂加热提取4h的提取率相当。曾里等用超声波辅助提取虎杖中白藜芦醇,探讨超声波的占空比(占空比是指在一个周期内方波为高的时间与为低的时间的比例)的改变对白藜芦醇含量的影响,结果发现占空比较小的超声波辅助提取有利于保持较高的白藜芦醇相对含量。刘树兴等人以虎杖为样品比较了回流提取、热水浸提、索氏提取以及超声波提取这4种方式的提取效果,发现回流提取与超声波提取的效果较好,得率分别为3.17%和3.21%。1.2确定最佳提取条件有机溶剂提取法是利用白藜芦醇易溶于有机溶剂特性而采用的一种方法。姚宝书等人以乙酸乙酯为提取剂,考察浸提时间、浸提温度、浸提次数、料液比对提取效果的影响,确定最适的浸提条件是:提取时间40min,温度60℃,提取次数2次,料液比(g∶ml)1∶30。张洁等对葡萄穗轴中白藜芦醇提取条件进行优化,得出60%乙醇溶液为提取剂,固液比为1∶20,在80℃下提取2h为最佳提取条件,在此提取条件下,白藜芦醇提取率为0.083。1.3初始萃取条件初支萃取周锦珂等采用超临界CO2萃取虎杖中的白藜芦醇,获得最佳的实验条件为:萃取温度50℃,萃取压力25MPa,萃取时间90min,萃取物中白藜芦醇的含量高达33%。曹庸等采用超临界CO2流体技术对虎杖中白藜芦醇进行萃取,获得了初步萃取条件为:萃取釜压力25MPa,温度50℃;解析釜(又称分离釜)压力5.7Pa,温度46℃。1.4白起白的优势酶酶解可通过加入生物酶或利用植物内微生物进行。向海艳等利用纤维素酶将虎杖中的白藜芦醇苷酶解成白藜芦醇,使白藜芦醇得率比直接醇提法提高近5倍。黄志芳等采用纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、复合酶提取虎杖中的白藜芦醇,得到复合酶的水解效果最佳,酶解后的提取物经分步溶解沉淀得白藜芦醇粗品,含量可达65%,工艺稳定可行。2白俄罗斯醇的分离和精制2.1大孔吸附树脂瞿卫林等比较研究18种树脂对虎杖白藜芦醇吸附量和脱吸率,选择适于工业化生产的HPD–500型树脂。研究发现,该树脂对白藜芦醇吸附量可达58.67mg/g,解吸率为92.6%,经大孔吸附树脂吸附与解吸,白藜芦醇含量由粗提物中9.25%提高至39.5%。刘丹等测定6种树脂的静态吸附量和解吸率,筛选出D10树脂对虎杖各有效成分具有较好的吸附分离性能。最佳工艺条件是:虎杖样品溶液1BV,吸附流速2.4BV·h-1,上样后静置30min,先用2BV水洗涤,再用20%、50%、70%、95%乙醇各2、5、2、5BV进行梯度洗脱,流速2BV·h-1,合并50%和95%乙醇洗脱液,总有效纯度为36.87%。经树脂吸附法提取的产物其纯度和获得率高,因此,它是一种大有前途的分离方法。2.2中药虎回归测定中白垩系统集成变化高速逆流色谱技术是一种不用任何固态载体或支撑体的液-液色谱技术,它具有分离效率高、产品纯度高、没有载体对样品的吸附和污染、制备量大且溶剂消耗少等特点。Chu等使用高速逆流色谱技术分离、纯化了中药虎杖中的五种成分,其中包括白藜芦醇,通过HPLC法检测其纯度超过95%。刘树兴等利用高速逆流色谱分离纯化虎杖中白藜芦醇,选择溶剂体系为氯仿∶甲醇∶水=4∶3∶2,均为转速850r/min,流速2ml/min;此条件下,白藜芦醇得率为0.186%,纯度大于96%。2.3最佳条件的确定柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。张凌燕等使用LH-20凝胶层析柱分离虎杖中白藜芦醇,确立最佳优化条件是:当以甲醇为洗脱液,浓度为60%,流速为0.5ml/min时,白藜芦醇样品的分离效果最好。苏文强等采用中压柱层析法进行提取分离,白藜芦醇粗提物经乙酸乙酯萃取后采用中压硅胶柱层析分离,以石油醚―乙酸乙酯梯度洗脱,产物重结晶后,白藜芦醇含量可达99%以上。3白俄罗斯醇的生理活性3.1白陇芦醇作用的心血管疾病流行病学调查发现,法国人虽对动物性脂肪摄取量很大,但冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病率和死亡率相比有些国家要低得多,经过研究发现是红葡萄酒中所含成分白藜芦醇作用的结果。白藜芦醇在心血管系统方面有抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集、调节血脂、防止动脉粥样硬化等作用。李国洪等研究发现,白藜芦醇对Ox-LDL诱导的内皮细胞氧化损伤具有明显的保护作用,并能减少内皮细胞的凋亡。白藜芦醇能减少血小板生成TXA2,抑制由血栓素,ADP,凝血酶和胶原诱导的血小板聚集。王世君等研究发现,白藜芦醇通过上调NO-cGMP信号通路对AngⅡ诱导的cFs增殖及细胞肥厚有抑制作用。3.2白黎芦醇诱导妊娠合并心脏病细胞毒性变化大量的离体或动物实验表明白藜芦醇对多种肿瘤具有拮抗作用。对白藜芦醇抗肿瘤活性机制的研究后揭示,白藜芦醇在肿瘤起始、促进和发展3个阶段都有抑制效果。廖纪元等通过研究白黎芦醇诱导宫颈癌细胞株Hela的细胞生长和发育的改变,以及细胞周期的进行和凋亡等,结果显示,白藜芦醇作用后,Hela细胞的增殖速度减慢,DNA合成减少。李科等将人肝癌细胞系HepG2经不同浓度白藜芦醇(0、25、50、100μmol/L)培养24、48、72小时,发现白藜芦醇可抑制肝癌HepG2细胞,其作用有一定的时间和浓度的依赖性。张生军等发现白藜芦醇可抑制人胃癌细胞株SGC7901的增殖作用。3.3传统激素des和传统激素des白藜芦醇的结构类似于雌激素己烯雌酚。体外研究发现,白藜芦醇具有调节雌激素样作用,但其作用方式和作用强度与己烯雌酚(DES)或雌二醇等传统雌激素不同。刘兆平等给刚断乳小鼠分别皮下注射和灌胃不同剂量的白藜芦醇,研究发现白藜芦醇可明显促进未成熟小鼠阴道开口和阴道上皮角化,显著增加子宫重量及其系数,并可使子宫内膜柱状上皮增厚或腺体增生。3.4白陇芦醇对大鼠肝胰腺组织中的作用根据白藜芦醇的雌激素样作用,有的学者推测白藜芦醇对骨代谢可能具有潜在影响。细胞培养、动物实验和人体试验均不同程度地证实了白藜芦醇在骨代谢中的重要作用。李文仙等将大鼠卵巢切除后,每日灌胃给予白藜芦醇0.7mg/kgBW,持续12周,发现白藜芦醇能显著增加卵巢切除大鼠股骨重量、钙含量和股骨干骺端的骨密度。肖本熙等研究表