中药水提物促进黑素生物合成的研究

中药水提物促进黑素生物合成的研究

黑素是一种重要的纤维蛋白化合物，主要用于决定人体的毛发和皮肤颜色。在人体内,黑色素由酪氨酸酶(tyrosinase)作用于酪氨酸形成多巴,去氢后形成多巴醌,并重排成5,6-醌吲哚,聚合后与黑素体内的结构蛋白结合形成黑素蛋白即黑素。黑素分为优黑素(eumelanin)和褐黑素(pheomelanin)两类。优黑素,褐色,是不溶的多聚体,耐各种化学处理;而褐黑素为红色和黄色色素,能溶于碱性溶液。红色和金色头发中为褐黑素。毛发颜色是由毛囊内黑素细胞产生黑素的质和量所决定的;表皮内的黑色素能吸收大部分紫外线,减少UVA和UVB波的透射,保护和减轻日光引起的皮肤急性和慢性损伤。研究中药活性成分促进黑色素生物合成,是21世纪美发、防晒化妆品的前沿课题,它将造福于成千上万头发早白和皮肤易被晒伤的人们。1试剂及仪器中药:薄荷、降香和复方中药七宝美髯组方[源自(本草纲目)]为大连市药材公司购得。试剂:酪氨酸酶、左旋多巴为日本和光纯药工业株式会社产品;其余试剂均为分析纯。仪器:紫外可见分光光度计UV-3100(日本岛津公司)和HP8553(美国惠普公司)。2方法2.1制备生药膏状将薄荷、降香于80℃干燥30min,稍加粉碎,取5g用50mL蒸馏水煎煮45min,过滤后再加30mL蒸馏水煎煮30min过滤,合并两次滤液,浓缩成膏状。将膏状物溶于蒸馏水中,制成每mL溶液相当于生药100mg,放入冰箱备用。测试时再按需配制成不同浓度。2.2七宝米旭群中药水提取物的制备2.2.1七宝美赞群的组成首乌、牛膝、枸杞、茯苓、菟丝子、补骨脂和当归。2.2.2粗水提物的制备首乌2.05g,其余六中药各为0.5g,稍加粉碎,倒入100mL的圆底烧瓶中,加入50mL的蒸馏水,浸泡,100℃回流40min,抽滤药液,剩余的药渣再加入30mL蒸馏水继续回流30min,再次抽滤,合并滤液,滤液反复抽滤3次,保存于锥形瓶中,即为七味中草药的粗水提物。在90℃下,减压蒸馏粗水提物,呈膏状,置于25mL容量瓶中,用蒸馏水定容至25mL,得到每mL溶液相当于生药200mg的溶液,作为配制各种浓度溶液的母液,置于冰箱中,冷藏备用。测试时取一定量的母液,加入适当的蒸馏水配制成不同质量浓度的复方中药水提物。2.2.3水浴加热反应(1)将酪氨酸酶1mL(100单位)与0.15%左旋多巴液1mL混合,25℃恒温水浴中孵育5min。(2)加入不同质量浓度中药液1mL,置于25℃超级恒温水浴中继续孵育60min。(3)用1mol/L盐酸0.2mL终止反应。将反应混合物以3000r/min,离心分离15min,去上清液,沉淀物用6mol/L的盐酸洗1次,蒸馏水洗2次,最后用1mol/L的氢氧化钠水溶液3mL充分溶解试管底部的团块,可以适当加热以促进溶解速度。调试分光光度计,特定波长下测量溶液的吸光度值An。2.2.4黑素生产率的计算黑素生成上调率用加药组An占空白对照组An的百分率表示:黑素上调率(%)=(An加药组/An空白组-1)×100%3结果与讨论3.1薄薄水提物对黑素合成调度系统的影响由表1显示,薄荷水提物在较低质量浓度对酪氨酸酶促黑素生物合成已经有明显的作用,质量浓度为40mg/mL、波长280nm的紫外光使酶促黑素合成的上调率达237%。随着紫外区入射光波长的增加上调率增加,质量浓度为100mg/mL薄荷水提物,波长330nm的紫外光使酶促黑素合成的上调率从229%提高到617%,说明薄荷水提物促黑素生物合成上调的影响并非是唯一因素。薄荷水提物浓度对促黑素合成上调的影响不明显,而紫外光的波长对黑素合成上调率的影响却很显著。同时还可看出薄荷水提物促黑素生物合成物在UVB、UVA区都具有强的吸收。3.2降精油提物质量对黑素合成调湿的影响由表2可见降香水提物在较低质量浓度对酪氨酸酶促黑素生物合成已有明显的作用,质量浓度为40mg/mL,波长280nm的紫外光已使酶促黑素合成的上调率达205%,质量浓度为100mg/mL,波长280nm的紫外光已使酶促黑素合成的上调率达340%。随着紫外区入射光波长增加上调率增加,质量浓度为100mg/mL降香水提物,波长330nm的紫外光使黑素合成的上调率从340%提高到685%。降香水提物质量浓度对本课题促黑素生物合成上调率的影响明显,而紫外光的波长对黑素合成上调的影响更为显著。同时由表2还可看出降香水提物促黑素生物合成物在UVB、UVA区具有较强的吸收,也有望成为新的防晒剂。3.3水提物质量对黑素生物合成调湿结果的影响由表3可见七宝美髯膏组方水提物在较低质量浓度对酪氨酸酶促黑素生物合成有一定的上调作用,质量浓度为50mg/mL,波长280nm的紫外光使酶促黑素合成上调率为63%,水提物质量浓度对本课题促黑素生物合成上调率的影响明显。质量浓度为200mg/mL,波长280nm的紫外光已使黑素合成的上调率达328%;而紫外光的波长对黑素合成上调率有较大影响,在低浓度随着波长的增加上调率有所降低,如质量浓度为50mg/mL组方水提物,波长330nm的紫外光使黑素合成上调率从63%下降到44%,在高浓度则相反,其原因作者将在另文中给予解释和讨论。表3中看出七宝美髯膏组方水提物促黑素生物合成物在UVB段同样具有较强的吸收,在UVA段的吸收有所减弱。4