顺苯磺阿曲库铵的测定

顺苯磺阿曲库铵的测定

苯磺阿托唑胺是1996年首次在英国上市的非除异质结肌松弛剂。顺式阿曲库铵是阿曲库铵(atracuriumbesylate)1R顺式-1R’顺式异构体,约占阿曲库铵混合物总量的15%,相较于阿曲库铵,不容易诱发组织胺释放,对于健康成人或冠状动脉疾病患者具有较佳的心血管安全性。本实验通过对顺苯磺阿曲库铵有关物质及异构体检查的方法学研究,旨在建立一种简易准确的符合工业化生产需要的杂质检测方法,并为原料药的质量控制提供数据支持。1紫外质谱检测岛津LC-10Avp高效液相色谱仪系统,包括LC-10ATvp泵,SPD-10ATvp紫外检测器,N2000色谱工作站;顺苯磺阿曲库铵(南京正大天晴制药有限公司,批号081101,081102,081201);顺-顺阿曲库铵对照品、反-反和顺-反异构体由制备液相分离自制;乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂为分析纯。2测定条件及检测限取样品和对照品适量,精密称定,分别用甲醇、水、0.1mol·L-1盐酸溶液及0.1mol·L-1氢氧化钠溶液溶解并稀释制成每1mL中含50μg顺苯磺阿曲库铵的溶液,在200～400nm的波长范围内扫描,结果在280nm波长处均有特征吸收。并参考相关文献,确定检测波长为280nm,见图1。参考文献中有关物质检查方法,采用KrornasilC18(4.6mm×250mm,5μm)柱、280nm为检测波长、柱温30℃,0.075mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节至pH3.1)-甲醇-乙腈(75∶5∶20)为流动相A,0.075mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节至pH3.1)-甲醇-乙腈(50∶20∶30)为流动相B,流速为1.0mL·min-1,进行梯度洗脱。取苯磺阿曲库铵消旋体适量,加流动相A溶解并稀释制成每1mL中约含0.2mg的溶液,精密量取20μL注入液相色谱仪,调节检测器灵敏度,使主成分峰的峰高为满量程的20%～25%,记录色谱图。理论塔板数按顺苯磺阿曲库铵峰计约为18750。精密称取反-反和顺-反异构体适量,加流动相A溶解,精密量取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,见图2。取有关物质检查项下的供试品溶液,置(6±2)℃密闭放置,分别于放置后0,2,4,6,8h进样,测定有关物质及顺苯磺阿曲库铵峰面积,结果以峰面积计RSD为0.33%,有关物质基本无变化。精密称取样品适量3份,置10mL量瓶中,分别加0.1mol·L-1盐酸溶液、0.1mol·L-1氢氧化钠溶液、10%过氧化氢溶液5mL,置室温放置2h后,调pH至近中性;另取2份,加水5mL,置强光条件下(7000Lx)放置2h、100℃水浴60min,再加流动相A稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,精密量取续滤液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明:样品在光照、酸、碱、氧化、高温条件下均有不同程度的破坏,在主峰前后产生数个降解产物峰,各降解产物峰与主峰分离较好。取顺-顺对照品适量,用流动相A逐级稀释,分别精密量取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。S/N=10∶1作定量限,结果为3ng;S/N=3∶1作检测限,结果为1ng。取本品适量,置10mL量瓶中,加流动相A溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液5mL,置100mL量瓶中,加流动相A稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液(1)。另取苯磺阿曲库铵消旋体适量,加流动相A溶解并稀释制成每1mL中约含0.2mg的溶液,作为对照溶液(2)。取对照溶液(2)20μL注入液相色谱仪,各组分出峰顺序依次为苯磺阿曲库铵的反-反、顺-反和顺-顺异构体。再精密量取对照溶液(1)及供试品溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,量取所有杂质峰峰面积的总和与对照溶液主峰面积,与对照溶液(1)的主峰面积相比较,计算总有关物质;供试品溶液的色谱图中如有与对照溶液(2)中相应保留时间的色谱峰,量取其峰面积并计算其峰面积和,与对照溶液(1)的主峰面积相比较,得相应顺-反、反-反异构体含量。结果见表2。根据文献中流动相条件,选择硫酸-三氟醋酸-甲醇(1∶4∶1000)与乙腈-10%磷酸-水(90∶10∶6)2种流动相,流速1.0mL·min-1,恒流洗脱,进行比较。结果表明:梯度条件下顺苯磺阿曲库铵与异构体之间分离效果最好,且柱效最高,因此确定为流动相条件。顺苯磺阿曲库铵在室温下极不稳定,因此采用(6±2)℃密闭放置条件试验溶液稳定性。反-反、顺-反异构体均通过制备液相获得,产量较低,因此称量时不很准确,导致峰大小差异较大。2.1检测波长的选择2.2流量选择2.3系统适用性测试2.4溶液稳定性2.5急性试验2.6试验和定量限制2.7样品测定3讨论3.1流量选择3.