生化检测常识

生化检测常识

1整理ppt

目录

第一章生化检测根本常识

1.1标本的获得第二章常规生化检测工程简介

2.1生化工程的临床意义第三章生化仪参数测量原理

3.1自动生化仪的分类

3.2分立式生化仪结构

3.3生化检验的原理和方法3.4生化分析仪测定方法的分类及应用度的计算3.5.测定值计算方程

3.6定标参数和浓度的计算

第四章几个重要概念

5．1试剂空白5．2样本空白

5．3水空白

5．4样本

5．5质控物质

5．6底物控制2整理ppt生化检测根本常识

生化检测是医院检验科〔或化验室〕常用的检测手段，通常以人的血清为标本，通过测量血清中各生化成份的含量，为临床诊断提供依据。

3整理ppt1.1标本的获得

一般要求病人空腹时采静脉血〔全血〕。全血经过离心机离心，分层为血清和血细胞，正常情况下，上层颜色浅且透明〔血清〕，下层颜色深且不透明〔血细胞〕。有的血清较为特殊，或分层不明显〔融血〕，或血清不透明〔脂血，呈牛奶状〕。4整理ppt第二章常规生化检测工程简介

5整理ppt2.1生化工程的临床意义丙氨酸氨基转移酶〔ALT〕：又称为谷丙转氨酶〔GPT〕是衡量肝功能的重要指标，许多低端医疗机构在做体检时仅测此一项生化工程。正常人一般在40U/L以内。干粉试剂复溶后为单试剂，液体试剂一般为双试剂，应用动力学法可计算结果。6整理ppt蛋白蛋白：通常测白蛋白〔ALB〕和总蛋白〔TP〕，终点法。一般用单试剂，有的TP试剂为双试剂，可用两点终点法测。蛋白质是血清的主要成份，大部份由肝细胞合成。通过蛋白的测定可以协助某些疾病的诊断。7整理ppt血糖血糖：血液中的葡萄糖简称血糖〔GLU〕。常用于糖尿病的诊断。正常人空腹血糖一般为3.9～6.1mmol/L。市场上单、双试剂的商品化试剂盒都有，可用终点法〔单试剂〕或两点终点法测量〔双试剂〕。8整理ppt门冬氨酸氨基转移酶〔AST〕门冬氨酸氨基转移酶〔AST〕：又称为谷草转氨酶〔GOT〕，主要用于心肌和肝胆疾病及骨骼肌病的诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人一般在40U/L以内。同ALT一样，无论单、双试剂，用动力学法可计算结果。9整理ppt碱性磷酸酶〔ALP〕碱性磷酸酶〔ALP〕：主要用于肝胆疾病及骨骼病的诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人一般在240U/L以内。用动力学法计算结果。

10整理pptγ-谷氨酰转移酶〔GGT〕γ-谷氨酰转移酶〔GGT〕：主要用于肝胆疾病诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人一般在50U/L以内。用动力学法计算结果。11整理ppt胆红素〔BiL〕胆红素〔BiL〕：胆红素的测定，能准确反映黄疸的程度，判断黄疸的类型。一般测量总胆红素〔TBil〕和直接胆红素〔DBil〕。12整理ppt甘油三酯〔TG甘油三酯〔TG〕：其含量测定是血脂分析的重要内容之一。

13整理ppt总胆固醇〔CHOL〕总胆固醇〔CHOL〕：是游离胆固醇和胆固醇酯的总称，其测定对高脂蛋白血症和冠心病的诊断及发病机理的研究有一定意义。14整理ppt高密度脂蛋白胆固醇〔HDL-C〕高密度脂蛋白胆固醇〔HDL-C〕：主要在肝脏中合成，是血清中颗粒数最多的脂蛋白。其含量是冠心病诊断的重要依据之一。15整理ppt肌酐〔CREA〕肌酐〔CREA〕：是肌酸代谢的最终产物，由肾脏排出。是肾功能的重要指标之一。

16整理ppt尿素〔Urea〕尿素〔Urea〕：是蛋白质分解代谢的终产物。血尿素测定是肾功能的最敏感指标。

17整理ppt载脂蛋白A1(APOA1):载脂蛋白A1(APOA1):

是高密度脂蛋白的主要组成成分，临床上主要用于脑血管病风险度的估计。18整理ppt载脂蛋白B(APOB):载脂蛋白B(APOB):

是低密度脂蛋白的主要组成成分，临床上主要用于冠心病的风险度的估计。19整理ppt肌酸激酶〔CK〕肌酸激酶〔CK〕：肌酸激酶通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。可用于早期诊断急性心肌梗，常见肌病(如进行性肌营养不良发作期、病毒性心肌炎、多发性肌炎、挤压综合征等严重肌肉损伤)及脑血管疾病的诊断。

20整理pptα-羟丁酸脱氢酶〔HBDH〕α-羟丁酸脱氢酶〔HBDH〕：与肌酸激酶相同，用于诊断心肌梗死。α-淀粉酶〔AMY〕：在临床应用方面，α-淀粉酶活力升高与急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹内疾病、流行性腮腺炎及细菌性腮腺炎。

21整理ppt钙、氯、铁、钾、钠、镁、磷：这7项都属于离子组合，用于诊断人体中离子的含量。22整理ppt常用检测工程表

序号工程名称缩写组合参考值白蛋白：ALB，肝功能35～55g/L总蛋白：TP，60～80g/L碱性磷酸酶：ALP，15～112U/L门冬氨酸氨基转移酶：AST〔GOT〕，8～37U/L丙氨酸氨基转移酶：ALT〔GPT〕，0～65U/Lγ-谷氨酰转移酶：GGT，0～50U/L直接胆红素：DB，0～6umol/L总胆红素：TB，0～18umol/L肌酐：CREA肾功能：53～115μmol/L尿酸：UA，210～430umol/L尿素：UREA，2.5～6.4mmol/L23整理ppt胆固醇：CHOL

血脂：3.6～6.5mmol/L

甘油三酯：TG，0.45～1.81mmol/L

高密度脂蛋白：HDL，0.9～1.68mmol/L

低密度脂蛋白：LDL，2.7～3.1mmol/L

载脂蛋白：A1APOA，11.0～1.6g/L

载脂蛋白：BAPOB，0.6～1.1g/L

脂蛋白：Lp〔a〕，0～30mg/dL

肌酸激酶：CK，心肌酶类21～190U/L24整理ppt肌酸激酶同工酶：CK-MB，0～25U/L

α-羟丁酸脱氢酶：HBDH，70～180U/L

乳酸脱氢酶：LDH，114～240U/L

钙：Ca离子，2.0～2.6mmol/L

氯：Cl，95～105mmol/L

铁：Fe，9～30μmol/L

钾：K，3.5～5.5mmol/L

镁：Mg，0.6～1.1mmol/L

钠；Na，135～145mmol/L

磷；P，0.8～1.6mmol/L

α-淀粉酶：AMY，其它100～220U/L

葡萄糖：GLU，3.9～5.8mmol/L25整理ppt生化仪参数测量原理

26整理ppt3.1自动生化仪的分类

27整理ppt3.1.1连续流动式自动化分析仪

连续流动式自动化分析仪也叫管道式分析仪，其特点是测定工程相同的各待测样本与试剂混合后的化学反响，是在同一管道中经流动过程完成的。这类仪器一般可分为空气分段系统式和非分段系统式。所谓空气分段系统是指在吸入管道的每一个样品、试剂以及混合后的反响液之间，均由一小段空气间隔开；而非分段系统是靠试剂空白或缓冲液来间隔每个样品的反响液。在管道式分析仪中，以空气分段系统式最多，且较典型，整套仪器是由样品盘、比例泵、混合管、透析器、恒温器、比色计和记录器几个部件所组成。管道内的圆圈表示气泡，气泡可将样品及试剂分隔为许多液柱，并起一定的搅拌作用。但气泡影响比色，必须在比色前除去。

将几个单通道管道式分析仪结合起来，对一个样品同时测定几个工程。著名的有12通道分析仪，命名为顺序多项自动分析仪〔sequentialmultipleautoanalyzer〕简称SMA12/60。同时开展为SMAC，C为计算机〔computer〕的缩写。这类大型分析仪至今仍有使用者。它对每个样品可同时分析12个工程，每小时可分析60个样品。后来发现不参加空气泡，更有利于结果的检测，开展为流动注射分析法〔flowinjectionanalysis〕。试剂的流动仍用比例泵驱动，样品用转动阀参加液流，反响后比色检测。

28整理ppt3.1.2离心式生化分析仪

离心式分析仪是1969年以后开展起来的一种分析仪，由Anderson设计，其特点是化学反响器装在离心机的转子位置，该圆形反响器称为转头，先将样品和试剂分别置与转头内，当离心机开动后，圆盘内的样品和试剂受离心力的作用而相互混合发生反响，最后流入圆盘外圈的比色槽内，通过比色计进行检测。

离心式分析仪主要由两局部组成，一为加样局部，二为分析局部。加样局部包括样品盘、试剂盘、吸样臂〔或管〕、试剂臂〔加液器〕和电子控制局部〔键盘和显示器等〕。加样时转头置于加样局部。加样完毕后将转头移至离心机上。分析局部，除安装转头的离心机外，还有温控和光学检测系统，并有微机信息处理和显示系统。29整理ppt1．3分立式生化分析仪

所谓分立式，是指按手工操作的方式编排程序，并以有节奏的机械操作代替手工，各环节用传送带连接起来，按顺序依次操作。分立式分析仪与管道式分析仪在结构上的主要区别为：前者各个样品和试剂在各自的试管中起反响，而后者是在同一管道中起反响；前者采用由采样器和加液器组成的稀释器来取样和加试剂，而不用比例泵；前者一般没有透析器，如要除蛋白质等干扰，需另行处理。恒温器必须能容纳需保温的试管和试管架，所以比管道式分析仪的体积要大。除此以外，其它部件与管道式的根本相似。分立式分析仪的根本结构如以下图所示。Depout公司还推出一种袋式分析仪，即试管变为塑料袋，反响在袋内进行，也以袋作比色杯。这种袋只能一次性使用。30整理ppt3.1.3干片式分析仪

干片式分析仪是80年代问世的。首先Eastmankodak公司以其精湛的化学工艺造出了测定血清中血糖、尿素、蛋白质、胆固醇等的干式试剂片。当加上定量的血清后，在干片的前面产生颜色反响，用反射光度计检测即可进行定量。这类方法完全革除了液体试剂，故称干化学法。BoehringerMannheim公司推出了用全血的干征试剂。即将血细胞排除于滤膜之外，而血浆与试剂发生反响后显色检测。

31整理ppt3.1.4模块式自动化系列

7600系列全自动生化分析仪是日立公司于1998年开发出来的系列分析仪。它是由各种不同功能的模块组合而成，功能模块包括有样本投入部、电解质测定的ISE模块、常规实验工程测定的D模块、特殊实验工程测定的P模块、复查样本缓冲部和样本收纳部。根据D模块和P模块数目组合成不同型号的分析仪。

模块组合式实验室自动化系统包括：

样品前处理系统，样品输送系统和样品后处理系统〔生化分析，电解质分析，血液分析等〕。样品前处理系统由能独立工作，不同功能的各模块以同一标准来连接，通过计算机控制运行。由样品投入部，离心别离部，开栓部，在线分注部，非在线分注部，贴条码部，盖栓部，样品分注收存部，标本接收部等模块构成前处理系统，每一模块既是系统的一局部，又是独立的单元，可根据不同需要选择使用，具有灵活性和扩展性。

后处理系统有电解质分析系统，生化分析系统以及血液分析系统等。32整理ppt1．6全实验室自动化分析系统

从检验标本处理开始，即标本的识别、传输、处理〔别离血清等〕、分注、分类〔按工程分类〕、检测和收费的自动化流水作业，到分析后自动储存标本，检验结果的自动分析、报告与传送，自动提示异常值或危险值，申请检验医师随时查询检验结果的全过程实现自动化、网络化。

33整理ppt3.2分立式生化仪结构

全自动生化分析仪一般由以下局部构成：探针系统、搅拌和冲洗系统、恒温系统、反响盘、光路系统构成。

34整理ppt2．1探针系统

液面检测技术：通过检测阻抗或电容、电流的变化，感知到空气和液面，可保证探针的感应装置至液面时会自动停止下降，即可增加速度也可减少污染，防止堵塞。35整理ppt2．2搅拌和冲洗系统

搅拌系统是让样品和试剂混合后迅速分布均匀，保障测试正常进行。常用的搅拌方法为冲入空气、搅拌、振荡等，但是都容易产生气泡和外溢等问题。目前最好的方法是螺旋式搅拌棒附着特富龙涂层，一方面减少气泡，另一方面减少携带和污染。

清洗系统一般包括试剂针的内外臂清洗、样本针的内外臂清洗、比色杯的清洗。36整理ppt2．3恒温系统

全自动生化仪一般都设有30和37度两种温度。目前常见的有水浴、空气浴，最新的是恒温液循环加温方式。

水浴的优点是温度均匀、稳定；缺点是升温缓慢，开机预热时间长，因水质化〔微生物、矿物质沉积〕影响测定，因此要定期换水和比色杯。

空气浴的优点是升温迅速，无需保养；缺点是温度易受外界环境影响。

恒温液循环加温集干式空气浴和水浴的优点，即有水浴温度稳定、均匀的优点，又有空气浴升温迅速、无需维护保养的优点。37整理ppt2．4反响盘

现在大多数采用硬质玻璃比色杯〔石英杯〕，其透光性好，易清洁，不易磨损。38整理ppt2．5光路系统光源：光源分为卤素灯和高压闪烁氙灯。相对而言卤素灯寿命长，价格低，是大局部生化仪的首先。

39整理ppt3.3生化检验的原理和方法

临床生化检验，主要在技术方面的应用方面上探讨生化检验新技术以及新的标记物的选择和评价，用于帮助诊断，又称“诊断生化〞。主要应用于以下技术：光谱技术、电化学分析技术、层析技术、电泳技术、离心技术、抗原抗体特异性反响和标记技术、核酸扩增、杂交及序列分析技术等，其中生化分析仪主要运用了光谱技术中的吸收光谱法和比浊法。40整理ppt分别介绍如下41整理ppt3．1吸收光谱法

42整理ppt3．1．1光谱范围和电子跃迁

波长从200nm—400nm的电磁辐射，称为紫外光，波长从400nm—760nm的电磁辐射，称为可见光。43整理ppt3．1．2吸收曲线

以波长〔λ〕为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘制出的一条曲线称为吸收曲线。

在一段波长范围内，有最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin在最大吸收波长处测定可获得最大的测定灵敏度。44整理ppt3．1．3吸光度的定义

一束强度为IO的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质、厚度为L的吸收池时，如上图，一些光子被吸收，光强从IO衰减为It，那么该溶液的吸光度A等于：

45整理ppt3．1．4Lamber-Beer定律

A=єCL

其中є为吸光系数，有两种表示方法摩尔吸光系数和比吸光系数，摩尔吸光系数的意义为1摩尔浓度的溶液在厚度为1cm时的吸光度，比吸光系数的意义为浓度为1%〔w/u〕的溶液在厚度为1cm时的吸光度；C为溶液的浓度；L为吸收池的厚度〔单位为cm，亦称光径〕。

Lamber-Beer定律的意义为：某溶液的吸光度等于该物质的吸光系数є、浓度C和光径L〔cm〕的乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比，这是生化分析仪利用吸收光谱法进行定量测定的根底，见以下图：

Lamber-Beer定律成立的前提条件是：〔1〕被吸收光为单色平行光，〔2〕待测定溶液为稀溶液。

除特种蛋白外的大局部临床生化工程，配以相应的试剂，均可利用吸收光谱法在生化分析仪上进行测定。如：

酶类：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。

底物/代谢产物类：包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、NH4+、CO2等。

无机离子类：包括Ca、P、Mg、Cl等。

46整理ppt3．2比浊法

47整理ppt3．2．1比浊法分两类：透射比浊法和散射比浊法。带有小粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光的性质，当一束平行光通过含有悬浮质点的悬浮液或胶体溶液时，同时受到散射和吸收两个因素的影响，使光的强度减弱。在光源的光路方向上测量透射光〔实际上还包括散射光〕强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为投射比浊法；在光路的其他方向上测量散射光强度，从而测定出悬浮液或胶体溶液中质点的浓度，称为散射比浊法。48整理ppt3．2．2测定原理

49整理ppt透射比浊法

颗粒大小与光源波长接近，一束强度为I0的平行单色光通过一个含有悬浮质点〔颗粒大小与光源波长接近〕的悬浮液或胶体溶液时，如上图，其透射光强度I可用下式表示：

I=IOe-τL

式中,L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，那么：

该式与Lamber-Beer

颗粒大小远小于光源波长

定律相似，这是生化分析仪利用投射比浊法进行定量测定的根底，该法可以与吸收光谱法共用一个检测器，所以生化分析仪，不需增加任何部件，均可利用此法进行测定。大局部特种蛋白，如载脂蛋白类〔apoAI,apoB等〕、补体类〔C3，C4等〕免疫球蛋白类〔IgG,IgM等〕等，配以相应的试剂，可利用此法在生化分析仪上进行测定。50整理ppt散射比浊法

一束强度为IO平行单色光通过一个含有悬浮质点〔颗粒大小远小于光源波长〕的悬浮液或胶体溶液时，如上图，与入射光垂直方向上，其散射光强度I可用下式表示：

式中，n1,n2分别表示质点与介质的折射率，V表示单位体积内的质点数，r表示质点半径。可见散射光强度与悬浮质点的浓度成正比，这是利用散射比浊法进行定量测定的根底，因另需在光路垂直方向上增加一检测器，目前只有极少数生化分析仪可利用散射比浊法进行定量测定，而几乎所有的特种蛋白分析仪、免疫分析仪等都能利用散射比浊法进行定量测定。51整理ppt3．2．3方法学分析

〔1〕散射比浊法与透射比浊法：

散射比浊法灵敏度高，线性范围宽，但干扰因素多。

〔2〕比浊法与吸收光谱法：

比浊法特异性差，灵敏度低。52整理ppt3.4生化分析仪测定方法的分类及应用度的计算

53整理ppt4.4.1终点法

54整理ppt4.4.1概述

指经过一段时间〔一般为10分钟左右〕的反响，整个反响到达平衡，由于反响的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反响液的吸光度不在增加〔或降低〕，吸光度的增加〔或降低〕程度与被测定物的浓度成正比。如以下图：

如下图：t1时刻参加试剂〔体积为V〕，t2时刻参加样本〔体积为S〕，然后搅拌并反响，之后测量反响液的吸光度，在t3时刻反响到达终点。T2—t3为测定时间。

55整理ppt4．4．2反响度R〔Response〕的计算

结果的计算包括三个局部：反响度R〔Response〕的计算、定标参数的计算和浓度〔或活性〕的计算。这里仅介绍R的计算，定标参数的计算和浓度〔或活性〕的计算在后面专门讨论。

1〕单试剂单波长终点法

反响度R=t3时刻吸光度-t2前一时刻吸光度ⅹ〔体积校正因子)

或R=t3时刻吸光度-单试剂空白吸光度。

2〕双试剂单波长终点法

t1时刻参加第一试剂〔体积为V1〕，t2时刻参加样本〔体积为S〕，之后搅拌，t3时刻参加第二试剂〔体积为V2〕并立即搅拌，t4时刻反响打到终点。t3-t2为孵育时间，t4-t3为测定时间。

反响度R=t4时刻吸光度-双试剂空白吸光度

56整理ppt4.4.2一级动力学

57整理ppt4.4.2概述

一级动力学是指在被测物参与反响的条件下，在一定的反响时间内，反响速度与反响物浓度的一次方成正比，由于反响物在不断的消耗，因此整个反响速度在不断的减小，表现为吸光度的增加〔或降低〕速度越来越小，由于这类反响到达平衡的时间很长，且平衡常数不算很大，必需在特定时间段内进行监测，该段时间内吸光度的增加〔或〕降低与被测定物的浓度成正比，见以下图。一级动力学法又被称为初速率法、固定时间法、二点动力学等。

如下图：t1时刻参加试剂〔体积为V〕，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻参加样本〔体积为S〕，t3时刻反响稳定，t4时刻停止对反响进行监测；t2-t3为延迟时间，t3-t4为测定时间。

58整理ppt4.2.2反响度R的计算〔单、双试剂相同〕

反响度R=t4时刻吸光度—t3时刻吸光度

59整理ppt4.4.3零级动力学法

60整理ppt4.4.31概述

指反响速度与被测定物浓度的零次方成正比，也就是与被测定物浓度无关，因此，在整个反响过程中，反响物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度〔∆A/min〕与被测物的活性或浓度成正比。零级动力学法即通常所说的动力学法，也被称为连续监测法，主要用于酶活性的测定。

实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反响的进行，底物消耗到一定的程度后，反响速度不再与酶活性成正比，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定，见以下图中的t3-tn:

t1时刻参加试剂〔体积为V〕，t2时刻加如样本〔体积为S〕，t3时刻反响稳定，tn时刻停止对反响进行监测；t3到tn之间的时间内，吸光