慢性酒精中毒大鼠脑啡肽与水迷宫成绩的关系

慢性酒精中毒大鼠脑啡肽与水迷宫成绩的关系

在本研究中，我们使用了大鼠慢性酒精中毒模型，并使用了一种莫哈布西翁法来观察诺基诺韦恩对慢性酒精中毒大鼠学习和储存能力的影响。此外，在放射免疫法中，我们检测了不同脑区域中甲脑钠和黎明脑咖啡因的含量变化。研究了参与慢性酒精中毒后的氧化神经机制。材料和方法一、分组及处理方法3周龄雄性SD大鼠,体质量80～110g。随机分为4个组:A饮酒/生理盐水组、B酒精/纳洛酮处理组、C饮水/生理盐水组,D饮水/纳洛酮处理组;各10只。二、方法1.慢性酒精中毒模型的建立A、B饮酒组以酒精水溶液作为大鼠唯一水来源,以6%酒精浓度开始,逐日递增1%至15%以后一直维持该浓度持续8周。2.给药第9周开始,A、B组大鼠继续饮酒的同时,B、D组腹腔注射盐酸纳洛酮1.0mg/kg;A、C组腹腔注射等量的生理盐水,连续10d。3.行为测试用Morris水迷宫检测动物的空间学习记忆情况;具体方法见文献。4.海马、严格生长监测完成行为学实验后断头取出全脑,置沸生理盐水中煮5min,取出分离各脑区(前额叶、海马、下丘脑、纹状体)分别称重,放入1ml的1mol/L醋酸中充分匀浆,室温搁置100min,再加入1NNaOH,离心(4000×g)20min,取上清液-70℃保存待测。采用放射免疫法,试剂盒由第二军医大学神经生物学中心提供。5.数据处理采用SPSS11.0统计软件进行分析。数据采用方差检验和非参数检验,两两比较采用LSD;相关分析利用Pearson相关。结果一、第二至七八时段a、b组c逃避刑期经过7d的寻找隐匿平台训练,四组动物的逃避潜伏期均迅速下降,第二至第五个时段A、B组较正常对照组C逃避潜伏期延长(P<0.01或P<0.05);与A组比较,B组纳洛酮处理后其中第三至第五个时段逃避潜伏期缩短(P<0.05)。二、c的不同程度c的变化A组和B组下丘脑和海马内的MENK水平较对照组C均出现不同程度的升高,差异有显著性;而给予纳洛酮处理后,B组大鼠海马内MENK含量的变化较A组有部分逆转,差异有显著性(P<0.05)。三、显著性和显著性A组海马内的LENK水平较正常对照组C出现升高,差异有显著性(P<0.05);而给予纳洛酮处理后,B组海马内LENK含量的变化较A组出现完全逆转,差异有显著性(P<0.05)。四、脑咖啡因浓度与水迷宫逃避潜伏期的相关分析表4下丘脑、海马、纹状体内的脑啡肽水平与逃避潜伏期呈显著正相关(P<0.05)。阿片对大鼠学习记忆能力的影响本研究结果显示慢性酒精摄入后,动物的空间学习记忆能力受损;同时下丘脑和海马内的MENK水平以及海马内的LENK水平均出现不同程度的升高;进一步相关分析显示脑啡肽水平的变化与逃避潜伏期呈显著正相关;说明脑啡肽水平的变化与水迷宫成绩损害存在相关性。实验结果提示长期酒精摄入改变了部分脑区内阿片肽的合成及释放,进而改变了阿片系统的活动。国外研究发现大鼠穿梭回避训练前给予MENK和LENK(δ受体激动剂)不但会损害回避性的操作表现,而且还会损害记忆保持能力。本实验也进一步证实脑内脑啡肽水平的变化与动物学习成绩损害相关。本实验还显示纳洛酮能完全或部分逆转脑区内阿片肽水平的变化,与其改善慢性酒精摄入大鼠学习记忆能力减退的效应一致。目前认为其治疗慢性酒精中毒大鼠空间学习记忆减退可能的神经机制为:1.脑内阿片样物质增多会使大脑处于高代谢状态,并抑制了GABA中间神经元的活动,产生兴奋性神经毒性。纳洛酮还能调节核酸代谢并由此促进神经元的成熟分化及相关蛋白的合成,纳洛酮通过阻断阿片受体的作用防止或逆转酒精病理效应。2.空间学习记忆能力依赖于海马的乙酰胆碱(Ach),Ach水平高则此能力强。纳洛酮能明显增加大鼠