DNA的粗提取和鉴定课件高二下学期生物人教版选择性必修3

DNA的粗提取与鉴定一、实验原理：1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。

(1)不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。二、材料用具1.选材：注意：2.试剂：①研磨液②体积分数为95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺试剂⑤蒸馏水——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl——析出DNA——溶解DNA——鉴定DNA，要现配现用(2)以鸡血为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，

防止血液凝固。三、方法步骤（视频）1．称取约30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨。三、方法步骤加入研磨液后，必须充分研磨，否则细胞核不会充分破碎，释放出的DNA量就会减少。利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：

动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。研磨的目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min的转速下离心5min，再取上清液三、方法步骤为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。

抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？可能含有核蛋白、多糖等杂质②低温放置几分钟的作用：的析出方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干三、方法步骤搅拌时应轻缓、并沿一个方向：减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子1.提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。预冷的酒精具有以下优点：①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。2.实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。的析出的鉴定取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶解于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。实验组水浴加热对照组注意事项：①先溶解再加二苯胺②沸水浴加热目的：加快颜色反应速率DNA耐高温例1

若从植物细胞中提取DNA，发现实验效果不好，如看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定时不显示颜色反应等，其可能的原因是①植物细胞中DNA含量低②研磨不充分③过滤不充分④95%冷酒精的量过大A.①②

B.③④

C.①④

D.②③√选项试剂操作作用A研磨液与生物材料混合提取溶解DNAB2mol·L－1NaCl溶液与提取出的DNA混合溶解DNAC冷却的酒精加入到离心后的上清液中溶解DNAD二苯胺试剂加入到溶解有DNA的NaCl溶液中鉴定DNA√粗提取与鉴定实验中所依据的原理是①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同②DNA易被甲紫溶液染成紫色③溶解有DNA的NaCl溶液加入二苯胺试剂沸水浴后会呈现蓝色④加入体积分数为95%的冷酒精，DNA会从溶液中析出⑤加入体积分数为70%的冷酒精，DNA会从溶液中析出A.①②③

B.①③④C.②③④

D.①③⑤跟踪训练12345√62.(2021·山东日照高二期中)下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是A.用蒸馏水使家兔的红细胞涨破，可获取富含DNA的滤液不溶于95%的冷酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液C.新鲜的洋葱和猪肝可作为实验材料提取DNA，而菠菜不能用于提取

DNAD.鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中并进行沸水浴12345√63.(2021·山东聊城高二期中)下列与DNA粗提取与鉴定过程有关的叙述中，错误的是A.将鸡的成熟红细胞置于清水中，红细胞涨破后将DNA释放出来B.用2mol/L的氯化钠溶液溶解提取物并离心后，须保留上清液C.在提取液中加入75%的冷酒精后蛋白质会与DNA分离并析出与二苯胺溶液在沸水浴加热条件下会呈现蓝色12345√64.在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，甲、乙、丙、丁四个小组除表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均正确，但实验结果却不同。下列有关叙述不正确的是12345组别实验材料提取核物质时加入的溶液去除杂质时加入的溶液DNA鉴定时加入的试剂甲鸡血蒸馏水体积分数为95%的酒精(25℃)二苯胺试剂乙菜花蒸馏水体积分数为95%的酒精(冷却)双缩脲试剂丙猪血蒸馏水体积分数为95%的酒精(冷却)二苯胺试剂丁鸡血蒸馏水体积分数为95%的酒精(冷却)二苯胺试剂6A.实验材料选择错误的组别是丙B.沸水浴后试管中溶液颜色变蓝的组别是甲、丁C.甲组实验现象不明显的原因是25℃的酒精对DNA的凝集效果差D.乙组实验不成功仅因为在鉴定时加入了双缩脲试剂12345√65.(2021·山东潍坊高二期中)多种实验材料都可以用于DNA的粗提取与鉴定，用香蕉也可以取得较好的实验效果，下列操作正确的是A.向剪碎的香蕉果肉组织中加入蒸馏水，以释放核DNAB.经研磨后，将研磨液离心5min，取沉淀物进行下一步操作C.冷却的体积分数为95%的酒精可以溶解某些蛋白质，得到粗提取的

DNAD.将DNA溶于NaCl溶液后，加入现配的二苯胺试剂，混合均匀即可出

现蓝色12345√6123456.实验中对DNA进行鉴定时，做如下操作，分析回答下列问题：试管序号AB1加2mol·L－1的NaCl溶液5mL加2mol·L－1的NaCl溶液5mL2不加加入提取的DNA丝状物并搅拌3加4mL二苯胺试剂，混匀加4mL二苯胺试剂，混匀4沸水浴5min沸水浴5min实验现象

实验结论

(1)根据上图，完成表格空白处的实验内容。溶液不变蓝色溶液逐渐变蓝色DNA在沸水浴的情况下遇二苯胺试剂会被呈现蓝色6(2)对于B试管，完成1、2、3的操作后溶液颜色如何变化？

。(3)在沸水浴中加热的目的是