产几丁质酶枯草芽孢杆菌g3菌剂对番茄的田间防效

产几丁质酶枯草芽孢杆菌g3菌剂对番茄的田间防效

根据上述报道，产聚酶沿线酶善草芽菌（b.surtilis）能够抑制多种植物致病性病原体，并具有成为生物活性剂的潜力。1990年以来,用枯草芽孢杆菌制备生防制剂防治多种植物病害成了研究热点。国内有大量研究报道;国外已有商品生产。例如,美国Agraquest公司用枯草芽孢杆菌QST713菌株开发出活菌杀菌剂SerenadeTM,并于2000年通过美国环保局(EPA)的登记,用于防治多种作物的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等病害。本文报道G3菌剂防治菜豆炭疽病、茄子菌核病和番茄叶霉病的盆栽试验结果以及G3菌剂对黄瓜和茄子苗期的促生作用。1材料和方法1.1干草芽菌实验菌剂的制备1.1.1病毒枯草芽孢杆菌(B.subtilis)G3为本课题组所分离并保存。1.1.2湿料灭菌方法市售新鲜麦麸以等重量肉汤培养液(w/w)混匀,分装于500mL三角瓶中,每瓶湿料200g,121℃灭菌30min。用50mL无菌水将培养好的克氏瓶斜面菌种洗出制成芽孢悬浮液,每瓶接种5mL,拍瓶后于30℃培养3d(中途拍瓶二次),培养结束,挖瓶置室内风干,塑料袋内保存并测定每克活芽孢数。1.2真菌菌株的培养1.2.1病毒油菜菌核病菌(Sclerotiniasclertiorum,简写Scl.s),由本课题组分离并保存。1.2.2菌种培养和培养麦麸用等重量的PD培养液混匀,分装于500mL三角瓶中,每瓶湿料200g,灭菌后接入斜面菌种一块,25℃培养10d,菌丝长满培养基后冰箱4℃保存备用。1.3蔬菜和豆类碳疽病防治试验1.3.1疾病场地准备蚕豆花季,在炭疽病明显的病株根部共取病土12kg(含水量约20%)。1.3.2加快芽孢杆菌gf的放养、育苗取底部留孔的塑料箱(长、宽、高:40cm×30cm×20cm)2只,每箱加病土5kg(10cm厚),摊平,播种菜豆种籽40粒,同时均匀撒入20gG3菌剂(活芽孢数136亿/g,下同),最后覆土1kg(2cm厚),拍平。一层地膜封口后置温室20～25℃发芽。5d后种子大部分破土,揭膜,塑料箱移至室外10～20℃出苗,15d后植株8～10cm高时起苗检查发病情况,分0级(无病斑)、1级(有病斑,病斑长度小于1cm)和2级(病斑长度大于1cm)三个等级。以不加G3菌剂的箱作对照。1.4在碱性土壤中，g3菌剂对茄子幼苗的影响1.4.1scl.s固体菌种的制备3月底在塑料大棚发菌核病的菜豆根部取病土5kg,加堆肥1kg和1瓶刚培养好的Scl.s固体菌种(长有大量的菌核)混合均匀,装入密闭塑料箱中,置温室25℃自然发酵10d。1.4.2自然发酵方法100gG3菌剂加100mL水湿润后混入5kg肥沃菜园土中(含水量20%左右),用手充分拌匀置密闭塑料箱中于温室25℃自然发酵10d。1.4.3覆土、泥质、种子覆盖物的覆盖塑料箱(同“1.3.2”)内加菜园土5kg,摊平(10cm厚底土)。1kgG3带菌土(含20gG3菌剂)与1kg菌核病土混匀,覆盖于底土上。100粒茄种子撒播于土面上,用手稍加翻动土层,使种子处于土层1～2cm处,拍平,塑料箱覆盖一层地膜保湿,于室温15～20℃培养出苗。空白对照箱用1kg菜园土替代G3带菌土,其余同G3菌处理箱。1.4.4死苗数试验播种后逐日观察和记录箱内的变化(Scl.s菌丝萌发、繁殖和消亡,茄种子的萌发、出苗以及死亡),统计死苗数,第32天时起苗,测量株高和株干重。株高和株干重数据经方差分析、t测验,确定差异显著性。1.5在碱性土壤中，g3菌剂对黄瓜幼苗的促进作用1.5.1细菌根的制备同“1.4.1”。1.5.2s3菌土制备同“1.4.2”。1.5.3营养钵黄瓜培养菌核病土和G3菌土分别以4∶0、3∶1、2∶2、1∶3和0∶4比例混合(5个处理),每处理重复4次,每重复为1营养钵,装入上述混合土200g。自然土200g为对照。营养钵置瓷盘中,盘中加水以毛细管效应使钵中土壤吸饱水分,自然晾干1d,每钵插播刚破口的黄瓜种子5粒,温室内20～25℃培养。第13天时起苗检查出苗率、株高和株干重。1.6番茄霉病的防治1.6.11%细菌溶液的制备5g固体菌剂加500mL水浸泡10min,双层纱布过滤,滤渣在滤液中挤捏数次后弃去,滤液滴加两滴沾着剂OP,搅匀。1.6.2叶霉病的发生室内钵栽的番茄苗6棵,苗高15～20cm,自然发生严重的叶霉病。用小喷雾器全株喷药3棵,另3棵喷清水作对照,喷药后置室外遮光处培养,第3天和第7天先后二次检查喷药效果。1.6.3方法和疗效计算每株4张复叶的全部小叶数为调查对象,按文献进行病叶分级和防治效果计算。2结果与分析2.1g菌剂对菜豆出苗的影响播后15d起苗检查,发现G3菌剂抑制菜豆炭疽病有一定的效果,无病斑的0级苗17株,占58.6%,明显高于CK36.8%(14株),防效主要表现为1级病苗数比CK大大下降(表1)。但从成苗率看,G3处理比对照下降22.5%,说明菌剂对菜豆出苗有一定的影响。从平均株高看,G3处理的29株为7.91cm,CK的38株为7.37cm略有提高。因此,G3菌剂防治菜豆炭疽病有一定效果但对出苗有一些不良影响。在烧杯内加入1%、5%和10%G3菌液(以脱脂棉吸附)所做的菜豆发芽试验表明,三个浓度的菌液对菜豆发芽无影响,但5%和10%菌液对菜豆破口后胚根和胚茎的伸长有明显的抑制作用。2.2葡萄种子萌发、死亡播种后第3天,Scl.s接种菌丝块菌丝开始萌发,由于箱内温湿度适宜,Scl.s菌丝在土面扩散,形成多个菌丝团,第7天菌丝团开始消退。第12天部分种子开始出苗,塑料箱移至室外(15～25℃),每天揭膜一次换气。第18天茄苗两片子叶3cm高时,出现死苗高峰(Scl.s菌在茄苗茎基部定殖,引发倒苗死亡)。之后,G3菌处理箱基本无死苗而CK箱死苗不断,第32天起苗中止观察,死苗和活苗以及两箱中最高的15株苗的株高和株干重的结果见表2。2.3g带菌土黄瓜菌核病土中黄瓜苗不象茄子苗那样易引发菌核病,但土中的某种未知因子会能强烈地抑制黄瓜种子破土和生长。100%的菌核病土完全抑制种子破土,G3菌剂加入可明显解除病土中的抑制因子,改善出苗率、增加株高和株干重(表3)。G3带菌土比例越高,出苗率、株高和株重就越好。表3还表明,100%G3带菌土黄瓜的出苗率与普通土相同,但株高和株重略胜一筹。在随后的补充试验中,在200g普通土中分别加入G3菌剂0,1,2,3,4g,结果出苗率基本接近(90%～100%),平均株高在9.5cm左右,但平均株干重则分别为0.045,0.049,0.059,0.062,0.065g,菌剂越多,干重越重。以上事实说明,在普通土壤中,加入G3菌剂对黄瓜苗期亦有增加干重的促生作用。2.4有霉斑叶片对3dG3菌剂对叶霉有良好的防治效果(表4)。喷药前,3株处理株共有120片小叶,有霉斑叶片35片,药后3d,有霉斑叶片为11片,7d有霉斑叶片仅存7片,3株对照小叶片亦120片,药前病叶31片,但3d后增加到43片,7d后为65片。根据文献的计算公式,G3菌剂3d和7d的防效分别为78.8%和89.7%。3g菌株对植物病害的防治3.1枯草芽孢杆菌用于防治植病的作用已受到国外厂商的充分重视,作为生物杀菌剂在美国已有3家厂商进行了登记。在我国台湾省,光华化工股份有限公司于2000年以商品名“台湾宝”完成了登记,这是台湾第一个有自主知识产权的农药。以上产品登记的杀菌范围以气传病害为主的白粉病、霜霉病、灰霉病、早疫病和晚疫病,涉及的作物有瓜类、叶菜、辣椒、葡萄、核桃和马铃薯等陆生作物。初步的盆栽试验表明,G3菌株对气传病害番茄叶霉有良好