蒿甲醚贴剂的制备及体外透皮速率常数的测定

蒿甲醚贴剂的制备及体外透皮速率常数的测定

抗癫痫药物（art）是抗癫痫药物，比抗凝剂更具有抗癫痫活性。ART难溶于水,生物利用度较低、代谢快、作用时间短,且复燃率较高。ART每日剂量80～100mg,连续服用4～7d,患者使用顺应性差。目前ART的剂型有片剂,ART注射剂、ART胶丸等,有关ART透皮吸收的研究笔者尚未见文献报道。经皮给药系统(TDDS)是近年来研究较多的给药系统,其给药剂型一般为贴片(patch),它可使药物避开肝脏的首关效应及胃肠道的破坏,维持稳定的血药浓度,减少给药次数,提高患者的依从性。适宜透皮的药物一般应满足半衰期短,日用剂量小等特点,但由于近年来药剂学方法,物理方法及化学方法等各种促渗技术的开发运用,制成经皮给药的药物日益增加。本实验采用聚丙烯酸酯压敏胶作为基质材料,配以高效的复合透皮吸收促进剂,制备出体外具有零级动力学特征的ART贴剂,并对其进行了小鼠体内的药效学研究。1材料和机器1.1药品化学品测定ART(重庆华立武陵山制药有限公司,批号20060502,纯度为98.5%);ART标准品(中国药品生物制品检定所,批号100271-200502,纯度为99.2%);聚丙烯酸酯压敏胶(DURO-Tak87-2677,美国国民淀粉公司);月桂氮酮(Azone,药用,湖北南星化工总厂);丙二醇(PG,药用,云南省玉溪市天山化工有限公司)。乙腈(色谱纯),其他试剂均为分析纯,水为双蒸水。1.2透皮扩散试验Agilent1100高效液相色谱仪(美国HP公司);TK-60B透皮扩散试验机(上海楷凯科技贸易有限公司);UV757CRT紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂)。1.3动物育苗中心ICR小鼠,雄性,体重(22±1)g(北京维通利华实验动物繁育中心,合格证号:2002-0003);疟原虫虫株,NK173(中国军事医学科学院微生物流行病研究所)。2实验方法2.1主体材料的处理称取丙烯酸酯类压敏胶,按处方比例加入ART及促渗剂,混合均匀,真空脱气,控制涂布厚度,使含药压敏胶均匀涂布在背衬上,加热挥干溶剂,覆以保护膜,即得实验用贴片。空白贴片除不含ART外,其余组成与含药贴剂相同。2.2专业材料的外透皮吸收实验2.2.1脱敏皮肤准备用电动剃毛器将小鼠腹部毛剃光后,拉颈处死,去除皮下脂肪、筋膜、血管,用生理盐水洗涤后,置冰箱中-4℃保存备用。实验前自然解冻。2.2.2扩散介质的制备采用改良Franz透皮实验扩散仪,接收室容积为6.0mL,扩散面积为2.92cm2。将皮肤平整置于扩散池的结合部,角质层面向供给池,将贴剂贴于鼠皮上,接受室加满扩散介质,真皮层面向接受池,恒温37℃。扩散介质为30%的乙醇水溶液,使用前超声脱气。磁力搅拌子以400r·min-1的速度搅拌,分别于2,4,6,8,24h取出全部接收液,同时立即补加新鲜扩散介质。接受液以0.45μm的微孔滤膜过滤,备用。2.2.3贴剂累积渗透量测定Cromasi色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以十八烷基硅烷键合硅胶为填合剂;以乙腈-水(65∶35)为流动相;检测波长为254nm;流速为1.0mL·min-1。精密吸取接收液适量,于10mL量瓶中,加入1mol·L-1的盐酸乙醇溶液至刻度,置70℃恒温水浴中保温1.5h,放冷至室温,微孔滤膜过滤,测定。结果表明,ART的裂解产物在254nm有最大吸收,故选择254nm为检测波长。选择其中一稳定峰,用外标一点法计算接收液中ART的浓度。该法峰面积和ART浓度线性关系良好,r=0.9998,线性范围0.124～49.6mg·L-1,回收率为97.1%,且样品在24h稳定,RSD为2.48%。计算贴剂的累积渗透量(Q)。以Q对t作曲线,并对曲线中的直线部分进行回归,求出直线斜率dQ/dt,计算药物的稳态渗透速率J(μg·cm-2·h-1)。2.3合理的涂层设计2.3.1促进剂用量对透皮速率的影响固定贴剂中ART的含量为15%,调节促进剂的用量,使其浓度分别为1%,3%,5%,7%,选择对透皮速率有显著影响的促进剂用量,再考察两者配合使用时,对ART透皮速率的影响。2.3.2药物浓度的选择固定Azone与PG的配比为3∶1时,调节ART的用量,考察药物浓度分别为13%,14%,15%,16%,17%时对透皮速率的影响。2.4小鼠红细胞传播方式的检测ICR小鼠,雄性,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型对照组、阳性对照组(192.2mg·kg-1)、空白贴剂阴性对照组(2cm2)、贴剂低剂量组(0.5cm2;37.5mg·kg-1)、贴剂中剂量组(1cm2;75mg·kg-1)、贴剂高剂量组(2cm2;150mg·kg-1)。贴剂组小鼠提前1d用脱毛剂在小鼠背部皮肤脱毛。次日,各组小鼠腹腔内定量接种含有1000万个感染鼠疟原虫的红细胞,接种量每只0.2mL。接种当日,贴剂组在小鼠背部皮肤给药一次,并用医用胶带固定;阳性对照组,每天灌胃ART悬浮水溶液1次,剂量为192.2mg·kg-1,连续4d;模型对照组正常饮食,不作处理。3结果3.1元或多元促渗剂的筛选计算透皮速率J(μg·cm-2·h-1)。结果表明,当Azone的浓度为1%和3%时对药物有明显促渗作用(P<0.01);PG对ART的促渗作用有最佳浓度范围,当浓度为3%和5%时,对药物有明显促渗作用(P<0.01)。二元或多元促渗剂有时往往会得到比单一促渗剂更好的效果,有研究证实一定比例PG和Azone联合使用可以提高促透效果。本实验在上述单一促透剂的考察基础上对PG和Azone的联合促透作用进行考察。本实验以“1%-Azone+3%-PG,1%-Azone+5%-PG,3%-Azone+3%-PG,3%-Azone+5%-PG”为复合促渗剂,结果表明,复合促渗剂均能显著提高ART的透皮速率(P<0.01),但当系统中PG的含量大于5%,贴剂的黏性下降,故本贴剂选择“1%-Azone+3%-PG”为最佳促渗剂。结果见表1。3.2透皮速率l与15%的浓度相比,低浓度(13%和14%)时,透皮速率明显减少(P<0.01);但当浓度继续增加(16%和17%),透皮速率不再增加(P>0.05)。结果见表2。3.3互相配合治疗给药4d后,第5天从尾部取血染片,吉姆萨染色,并计数1×103红细胞中原虫数,计算红细胞的感染率(%)。以查2.5×104个红细胞未见疟原虫者定为阴性,按公式(3)计算各给药剂量组疟原虫转阴率(%);停药后隔日涂1次薄血膜(每周3次),直到30d。血检原虫并计数,以50个油镜视野(×1000,约2.5万个红细胞)查不到原虫者定为阴性血片,到30d仍为阴性血片者定为治愈,阳性血片者定为复燃,按公式(4)计算各给药剂量组疟原虫的复燃率(%)。结果见表3。4aike的溶解度及溶剂对经皮渗透的影响一般而言,透皮吸收实验中,接收液中药物的浓度较低,故建立灵敏度高,准确的含量测定方法是首要任务。ART分子在近紫外区无吸收,直接测定接收液中的ART,灵敏度低,不易测出。ART在盐酸乙醇溶液中加热一定时间,在254nm处有最大吸收。我们以254nm为检测波长,选择其中较稳定的分解产物用HPLC测定,这样不仅提高了灵敏度,而且可以消除鼠皮中成分的干扰。溶解度实验表明,ART是一种脂溶性较强的物质,在水中的溶解度仅为0.415mg·L-1,几乎不溶,为了满足漏槽条件,更好地考察ART的渗透性,本实验采用30%乙醇水溶液为接受介质。Azone促渗作用较强,促渗能力往往不随浓度的增加而提高。丙二醇可单独作为促渗剂,亦可与其他促渗剂合用,以增强促渗效果。实验结果表明,当丙二醇和Azone以4%浓度按3∶1比例合用时,对ART的促进作用最大。可能是因为本实验制得的黏胶型贴剂,透皮促进剂要先从基质中缓慢扩散至皮肤表面,然后再与角质层发生作用,丙二醇增加氮酮在角质层的溶解度,从而使角质层的有序性下降,扩散速率提高。以蒸馏水为释放介质进行释放度实验,以累积释放率对时间进行线性回归,得r=0.996,表现出零级释放的特征。研究表明,药物通过皮肤的渗透是被动扩散过程,所以随着皮肤表面药物浓度的增加,渗透速率提高,但不会随着药物的浓度无限地增大,这表明皮肤的吸收过程会饱和,在固定面积的皮肤上吸收量是有限的。同时,Higuich曾证实药物的热力学活性是透皮给药制剂经皮渗透的主要推动力。因此,药物在压敏胶中的浓度和热力学活性是2个十分重要的参数,可以用于预测药物的经皮渗透。浓度选择实验表明,当药物含量大于等于15%时,ART被饱和于黏胶材料中,热力学活性基本不变