复燃戒断法评价吗啡成瘾模型大鼠的抑郁行为

复燃戒断法评价吗啡成瘾模型大鼠的抑郁行为

药物依赖是指在反复使用含糊剂的药物的过程中，在身体和药物之间相互作用形成的特定状态。这种状态包括心理状态和生理状态，其中特定的心理状态也被称为心理欲望和精神依赖。这是药物依赖的主要表现。药物依赖又称药物滥用(drugabuse)、药物使用不当(drugmisuse)、药物成瘾(drugaddiction),WHO在1964年正式命名为药物依赖。药物依赖形成的核心机制是中脑-边缘-皮质系统奖赏环路的激活。在此环路中伏隔核(nucleusaccumbens,NAc)内的多巴胺水平改变,是药物依赖形成和反复发作的关键。而中脑腹侧被盖区(ventraltegmentalarea,VTA)的多巴胺神经元与NAc区神经元间突触联系的兴奋程度将直接影响多巴胺在NAc区的释放,进一步影响药物依赖形成的几率。精神依赖指依赖者的心理觅药渴求与通过重复用药所达到的许多欣快或愉快的内心体验,主要表现为持续性觅药行为,在成瘾过程中表现为奖赏作用,这能起到正性强化的作用。临床上,阿片依赖患者容易出现后续的戒断症状,包括自主的、躯体的以及情绪情感症状,如狂躁、抑郁、焦虑、高度激惹。这种负面不稳定情绪是危害人类身心健康、社会稳定的严重问题。国外研究表明精神药物滥用患者在药物戒断后可引起焦躁抑郁相关的情绪紊乱在实验动物上也得到了验证。同时,精神抑郁症都涉及到大脑奖赏环路和奖赏效应的主要神经递质-多巴胺(dopamine,DA),说明抑郁和慢性药物依赖的神经解剖、神经生物学基础有着高度的关联性;目前,国内外对实验动物药物依赖模型的建立,多数以腹腔注射或皮下注射为主,并不能很好的解决与人类自发觅药相似性的问题。本文采用自身给药系统对大鼠建立自发性觅药的成瘾模型,更准确地模拟人的自发性觅药和复吸,评估小剂量复燃后的戒断和焦虑抑郁样行为表现,为药物依赖戒断后抑郁模型的建立及其后续更深入的研究打下基础。材料和方法一、实验动物及动物健康清洁级雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠(16只),体重230～250g,由第四军医大学实验动物中心提供。大鼠随机分为对照组和模型组,每组各8只。行为学测试前,适应性和蔗糖水饲养5d,自由摄食饮水。二、药物和设备注射用盐酸吗啡(青海制药厂)大鼠静脉自身给药系统(宁波安来)。三、实验方法1.甲基麻醉管理右侧颈外静脉置管术(16只全部手术)大鼠经8%水合氯醛(4mg/kg)腹腔麻醉,颈静脉置管,经皮下隧道穿出,给大鼠穿上马甲用于连接给药箱。术后大鼠单笼饲养,每日给予10万U头孢呋辛(0.75g×1)抗感染;管道注入肝素,保持通畅;给药期间大鼠限食(15g/d),饮水不限。术后恢复7d。2.次有效注射第8d(d8)开始自身给药训练(3h/d),保持室内安静,暗光。采用固定模式为1的程序FR1(固定比率,fixedradio,FR=1),即大鼠触碰一次有效触鼻,给药箱自动给予一次药物注射。对照组给予生理盐水,模型组给予盐酸吗啡(1mg/ml);设定给药程序,一次有效注射后20s为不应期。在此程序下,进行7d自身给药训练(d8～d14)。主要观察d11～d14,当大鼠连续3d触鼻率最高与最低差值小于均数标准差的1/4并且触鼻数趋于稳定后,可认为FR1模式大鼠给身给药训练成功。四、复燃后戒断症状评分d15～d21为戒断期,模型组给药箱给予生理盐水,自然戒断。复燃期d22～d24,模型组给药箱给予吗啡溶液,诱导复燃。于d27观察大鼠复燃后戒断症状,用改良Gellert-Holtzman法进行戒断症状的评分。戒断症状评分:①湿狗样抖动、跳跃、直立,直接计算次数,每2次计1分,计算30min内各项症状总得分;②呼吸急促、振齿、上睑下垂、竖毛、异常姿势、激惹、舔阴,每种症状记1分,每3min评1次,共评5次;③流泪、流涕、流涎、腹泻,每种症状记5分,30min内评1次。五、观察体重和食物量分组前应测量基础体重,记录d15和d27的体重和饮食量。六、大鼠一般情况测试复燃后第3d(d27)用常见的抑郁模型评价方法进行评估1.旷场实验(open-fieldtest):旷场实验记录大鼠水平运动总路程和垂直运动。每次测定3min,记录大鼠水平活动,大鼠穿越1格为1分;以直立次数为垂直运动得分,每只大鼠进行1次。大鼠在规定时间内水平、垂直得分减少,说明动物表现出抑郁状态,兴趣丧失和快感缺乏。2.1%蔗糖水偏爱测试:实验前禁水24h;每只大鼠给予1瓶1%蔗糖水和1瓶水,计算大鼠24h后2h内饮用1%蔗糖水和水的量以及蔗糖水偏爱百分比[偏爱百分比=(糖水消耗/总液体消耗)×100%]。大鼠糖水消耗量与糖水偏爱百分比较对照组下降。说明动物对幸福事件反应能力下降,快乐体验能力缺乏。3.取脑对比大脑系数:实验d27称重后随即处死大鼠,迅速摘取大脑,计算大脑系数(大脑系数=[大脑湿重(g)/体重(g)]×100%)观察大脑变化。七、统计处理数据均以x¯±SDx¯±SD表示,每一项行为学测试结果单独用t检验,采用SPSS18软件。P<0.05具有统计学差异。结果一、自己的药物模型的构建大鼠自身给药训练中,模型组触鼻频率与对照组相比显著增加(P<0.05)并趋于稳定,建模成功(表1)。二、模型组体重和体重增加量的比较两组在分组前体重无明显统计学差异。戒断复燃期d15-d27,模型组体重下降明显,而对照组体重增加明显。模型组大脑系数降低明显。饮食方面,模型组饮食量明显下降,戒断复燃后平均饮食为21g/d,而对照组平均饮食量为36g/d。三、两组大鼠湿狗样症状比较在复吸后戒断第3d,测试30min内模型组大鼠与对照组大鼠相比,出现湿狗样抖动、振齿、激惹、舔阴、毛发直立、跳跃、流涕等症状,戒断症状明显(P<0.05)(图1)。四、组大鼠活动情况复燃后戒断第3d,相对于对照组,戒断模型组水平运动明显减少,垂直运动明显减少(P<0.05),表明戒断组大鼠活动度降低,探究行为减少(图2)。复燃后戒断第3d,蔗糖水饮用百分比存在显著差异(P<0.05)。模型组大鼠蔗糖水饮用量较少(图3)。3.所有行为测试完成后，立即开始大脑测试，并计算大脑系数表2药物依赖模型及其在复吸行为中的应用药物依赖患者在撤除药物时,焦虑、抑郁和失眠是主要特征,尤其在戒断后期,焦虑、抑郁等精神情绪逐渐占主导地位。药物戒断后的精神情绪症状是目前成瘾药物相关神经心理缺陷研究的一个重要方面,也是导致复吸的重要原因之一。对于已完成药物戒毒的药物依赖患者,复吸率仍高达90%以上,其中一个重要原因是他们存在情绪情感障碍,即对毒品强烈的心理渴求难以抑制并且容易受生活中负性事件(包括社会歧视、就业困难、家庭厌弃、恋爱婚姻失败等)的应激影响产生焦虑抑郁情绪从而诱发复吸行为。药物依赖模型的建立是研究药物依赖戒断后抑郁样行为的前提,而自身给药以及复吸模型的建立很好的解决了过去的动物模型比较单一的问题,虽然无法模拟人类社会环境、家庭环境多种因素的综合影响,但是能够很好的观察大鼠自发性觅药行为和复吸后的行为学特征,反应了成瘾药物的激发作用,可以广泛应用于成瘾后脑区功能以及情绪变化机制的研究。自身给药模型对实验技术和系统准确性有着较高的要求,由于小剂量吗啡使成瘾模型的建立更加稳定,给药系统要很精确地把小剂量药物泵入实验动物体内,所以在模型建立的过程中存在的问题也很多,这样就对大鼠的手术细节、术后维护以及给药装置的维护与设定提出了较高的要求。自身给药复吸模型的建立,模拟人类药物成瘾后复吸行为并自然戒断诱导内源性核心症状-快感缺失。行为学评估显示,复吸后戒断期的药物依赖大鼠出现体重饮食量下降、蔗糖