雷醋酸乙酯提取物对大鼠肾上腺的保护作用

雷醋酸乙酯提取物对大鼠肾上腺的保护作用

雷公藤对下肢-肾上腺轴的影响被认为是“模仿hpa的人体内存在一种激素作用的效果”。然而,文献报道主要通过光镜水平探讨雷公藤对肾上腺的影响。本实验从电镜超微结构水平,结合光镜和放射免疫分析检测血清皮质酮含量,从形态和机能两方面综合评价雷公藤醋酸乙酯提取物(ethylacetaeextractofTripterygiumwilfordii,TWEE)对大鼠肾上腺的影响。1材料和方法1.1大鼠皮质酮放射免疫检测试验剂TWEE(为含1g·L-1雷公藤甲素的干燥粉末,湖北省中医药研究院);泼尼松(5mg·片-1,湖北省宜昌制药厂,批号941202);大鼠皮质酮放射免疫检测试剂盒(美国DPC公司)。1/万电子天平(日本产);H-300电镜(日本产);SN-682型放射免疫γ计数器(上海核福光电仪器有限公司);HERMLE-Z360K低温高速离心机(德国产)。Sprague-Dawley大鼠,♂,体重(214.28±19.19)g(同济医科大学实验动物中心提供)。1.2方法1.2.1动物组30只♂SD大鼠适应性喂养3d后,完全随机分为对照组(10只),泼尼松组(10只)和TWEE组(10只)。1.2.2twee的用量对照组给予5g·L-1羧甲基纤维素钠(CMC)悬液2ml,po,bid。泼尼松组用5g·L-1CMC将泼尼松配成混悬液(0.5mg·ml-1),2mg·kg-1,po,bid。TWEE组用5g·L-1CMC将TWEE配成混悬液(5mg·kg-1),25mg·kg-1,po,bid。实验期间每3d称体重1次,以调整用药剂量,动物自由饮水进食。上述处理30d后,于第31d断头处死动物,收集血液及取出两侧肾上腺。1.3观察指标和实验方法1.3.1一般状况观察生长发育、外观、反应性、活动性、食欲、摄食量及体重变化情况。1.3.2器官系数器官重量和重量实验结束时称大鼠体重,摘取肾上腺并去除被膜周围脂肪及结缔组织,称重,计算脏器系数。1.3.3低温高速离心室温下大鼠快速断头取血(1min内完成)于冷冻塑料试管内,低温高速离心(3500r·min-1,20min,4℃),分离的血清-40℃保存。实验前,室温下轻柔搅拌或反向混匀样本。其余按试剂盒说明书操作。1.3.4相当束状带位置右侧肾上腺用Carnoy液(冷)固定,常规HE染色;左侧肾上腺于最大面切开,在相当束状带位置取材。先用体积分数为2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液4℃固定1.5h,再用锇酸固定液4℃固定2h,漂洗后,升级酒精脱水,丙酮浸透,Epon812包埋,超薄切片,醋酸铀及枸橼酯铅进行双重染色,H-300型透射电镜观察。2结果2.1驳岸的生长对照组大鼠生长发育良好,皮毛光洁,反应灵敏,活泼好动,食欲好,摄食正常,体重稳步增加。泼尼松组生长发育略差,皮毛略蓬松状,光泽度较差,反应性较低下,不喜动,食欲一般,摄食略差,体重增加略慢。TWEE组生长发育较差,皮毛蓬松,光泽度较差,易脱落,反应较迟钝、衰弱、嗜睡、眼角分泌物增多,食欲下降,摄食差,体重轻于前两组。2.2两组大鼠脏器系数的变化经Student-Newman-Keuls(SNK)Test法统计分析,各组大鼠实验前、后体重无显著性差异。TWEE组的肾上腺重量高于泼尼松组;脏器系数大于对照组及泼尼松组。而对照组与泼尼松组之间的肾上腺重量和脏器系数比较均无显著差异。2.3血清皮质酮含量表2经SNK法统计分析,3组大鼠血清皮质酮含量相互之间比较有显著性差异,TWEE组>对照组>泼尼松组。2.4大鼠肾上腺形态的观察2.4.1肾上腺素皮质结构对照组肾上腺皮质球状带、束状带、网状带及髓质结构清楚。束状带外2/3区细胞浆内含类脂质空泡,分布均匀,较清晰;内1/3区类脂质空泡较少、较模糊。泼尼松组肾上腺皮质结构不清。束状带细胞胞浆嗜酸性增强,仅外2/3区见少量类脂质空泡。TWEE组肾上腺皮质明显增厚,结构清晰。束状带外2/3区细胞浆充满类脂质空泡,呈疏松透亮区;内1/3区胞浆也可见较多类脂质空泡。球状带细胞浆内亦见疏松淡染区。2.4.2皮质束状带胞浆的脂质和脂质分析对照组肾上腺皮质束状带细胞胞浆线粒体丰富,线粒体嵴呈空泡状,有较多光面内质网及较大脂滴。泼尼松组皮质束状带细胞核周间隙增宽,胞核周边线粒体结构模糊,界限不清;远离胞核处的线粒体结构较正常;胞浆中可见光面内质网,但脂滴较少、较小。TWEE组肾上腺皮质束状带细胞胞浆中富含线粒体、光面内质网及大小不等的脂滴。线粒体嵴呈空泡状,边界清楚。3twee对大鼠肝肾皮质束状带细胞功能的影响本实验结果显示,TWEE组肾上腺重量大于泼尼松组、脏器系数显著高于对照组及泼尼松组。表明TWEE组肾上腺有轻度增生,至少没有萎缩。光镜下,TWEE组肾上腺皮质明显增厚,束状带外2/3区及内1/3区胞浆均见较多类脂质空泡。结果与李玉敏等、ZhangMing-Min等一致。提示TWEE可刺激大鼠肾上腺皮质增生。有报道雷公藤及其同属植物昆明山海棠抗炎作用与HPAA无关。这可能因给药时间长短不同所致;我们认为可能还与雷公藤的化学组成相当复杂有关。各组分在体内可引起多种生物学效应,最终出现何种效应与多种因素如药材产地和部位、采药季节、药物剂型和剂量、用药方式和时间、动物种属等有关。此外,雷公藤可能存在多种抗炎和免疫抑制途径(直接途径、间接途径如经过HPAA)。本实验TWEE组的大鼠肾上腺皮质束状带细胞胞浆中含丰富的线粒体,线粒体嵴呈空泡状,边界清楚,也含丰富的光面内质网及大小不等的淡染而均质的脂滴。电镜下具有这些典型的分泌类固醇的超微结构,表示肾上腺皮质束状带功能活跃。相反,泼尼松组则可见束状带细胞核周间隙增宽,核周边线粒体结构模糊,界限不清;胞浆虽亦可见光面内质网和脂滴,但数量较少,且脂滴较小、浓染而不均匀,表示肾上腺皮质束状带功能不活跃。上述变化从超微结构亚细胞水平再次表明,TWEE在整体实验条件下能促进大鼠肾上腺皮质束状带细胞功能。SD♂大鼠血皮质酮正常值报道不一,分别为(4.20±1.39)μg·dl-1[(121.21±40.11)nmol·L-1](血浆);(10.70±4.41)μg·dl-1[(308.80±127.27)nmol·L-1](血浆);(19.08±0.68)μg·100ml-1(血清)。本实验为(112.79±19.27)ng·ml-1(血清)。从表2可知,TWEE可使血清皮质酮水平明显上升,显著