【分子生物学技术在医学检验技术中的有效应用6000字（论文）】

分子生物学技术在医学检验技术中的有效应用研究目录TOC\o"1-3"\h\u11693前言 128915第一章文献综述 113229§1.1分子生物学的兴起与发展概况 16736§1.1.1分子生物学的兴起 17331§1.1.2分子生物学技术发展 127364§1.1.3技术复杂以及仪器要求过高 222696§1.1.4监测管理力度不够 215669§1.1.5分子生物纳米技术 28110§1.2分子生物学技术在临床医学的应用 215061§1.2.1免疫测定和培养鉴定 32272§1.2.2病原微生物检验 319118§1.2.3诊断肿瘤及遗传疾病 38739§1.2.4分子蛋白组学在医学检验中的应用 48983第二章材料和方法 412400§2.1样本 49528§2.2主要试剂 418458§2.3主要仪器 55302§2.4实验方法 59287§2.4.1聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR) 55587§2.4.2采样量 67968§2.4.3采样过程中的防污染 627994§2.4.4标本的运送 630847§2.4.5标本验收、拒收 66409§2.4.6标本的预处理和保存 619563参考文献 9前言现在我国的科学技术在现代化的进程中有了很大的发展，当然现代化的进程也带动了现代医学的发展。现代分子生物学的应用越来越广泛，在某种意义上，现代分子生物学在医学的可持续发展中起着无可替代的作用。总之，基因克隆等现代分子生物学技术的出现对现代医学的发展产生了深远的影响，随着基因序列的完成，以前没有解决的问题也得到了解决。进入后遗传学时代以来，数学科学在生物学领域得到了广泛的应用，为生物学的发展提供了新的方向，也为分子诊断技术的应用提供了可能性。因此，分子生物学技术在现代医学中占有非常重要的地位。加强现代分子生物学技术在医学检查中的有效应用，对各种疾病的有效诊断和治疗具有重要意义。第一章文献综述§1.1分子生物学的兴起与发展概况§1.1.1分子生物学的兴起分子生物学：是研究核酸，蛋白质等生物大分子的结构与功能的，并从分子水平上表明蛋白质与蛋白质，蛋白质与核酸之间的相互作用以及它的基因表达调控机理的学科。从20世纪50年代以来分子生物学是生物学的前沿和生长点，包括蛋白质系统、蛋白质系统和核酸系统。图1.11953年沃森、克里克提出DNA分子的双螺旋结构模型标志着分子生物学就此诞生。分子生物学检测是分子生物技术在临床实验室诊断中的高级应用。它以疾病为中心，以生物标志物为新一代检测手段的临床诊断技术，能够快速检测并微型化微生物样本、生物力学和微生物，是疾病风险分析的重要手段，目前在生物实验中有多种分子生物学技术，包括由一组生物固定技术组成的分子生物传感器。分子生物传感器是一种对生物物质敏感并能将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。它是一个完整的分析系统，由冷冻的生物分子作为检测元件，由合适的理化传感器和信号放大器组成，分子生物传感器可广泛应用在小分子有机化合物的检测，为疾病诊断和工作环境监测提供可靠的分析数据。§1.1.2分子生物学技术发展分子生物学的发展经历了准备与酝酿建立与发展和深入发展三个主要阶段，并且随着临床分子生物学检测技术的不断提高，尤其是临床医学各学科与分子遗传学，分子生物学和仪器分析学等，其他学科不断的交叉和互相渗透，下面就分子生物学的发展不足之处与今后的发展进行探讨。§1.1.3技术复杂以及仪器要求过高分子生物学是一门新兴的医学传感技术，目前分子生物学传感技术的发展存在着许多需要改进的问题，其中分子生物学传感技术过于复杂。对检测仪器的质量要求也很高，用于检测的药物和反应容器价格昂贵，这些条件严格制约了分子生物学的发展。为了解决这些问题，需要合理的医学研究项目，提高医学分子生物学检测技术的灵敏度，但在提高医学筛选标准方面还有很多工作需要做，例如：如果种植结核杆菌，则无需选择昂贵的培养容器。临床疾病调查不应过分依赖分子生物学技术的临床证据，虽然分子生物学技术可以提高医生的诊疗效率，但也存在技术错误。因此，应结合临床调查得出结论。§1.1.4监测管理力度不够分子生物学技术中存在着许多问题，其中，各部门间的检验管理不充分，按照国际医学检验规则，对重要任务进行监督管理，医院必须尽管分子生物技术仍然存在许多问题，但发展速度不容忽视，但随着技术的飞速发展，应加强管理。积极推进分子生物学实验室建设，建立专门的管理和监督机制，保障分子生物学临床试验的可持续发展。§1.1.5分子生物纳米技术在医学实验室中，大多数设施被称为生物活性物质，虽然抗体是最重要和最常见的生物活性物质，但将抗原或特异性抗体固定在磁性纳米臭氧的表面是纳米技术的基础，纳米技术可包括荧光材料、放射性同位素、生物活性物质等，生物技术分子纳米技术更方便、更灵敏，与传统微重力技术相比，一些缔约方将抗体相关的磁性纳米探针用于临床医学检查，并与化学发光免疫分析有效结合，这是个好结果。自动免疫分析能快速有效地检测1型和2型抗体，可用于形成人的胰岛素。§1.2分子生物学技术在临床医学的应用分子生物学是诊断和治疗疾病的重要手段，进入21世纪以来，分子生物学在医学发展中发挥了重要作用，并被广泛应用于科学实验中。药物的作用机制和新药的研发是从理论到实践的一大步，分子生物学是以核酸生物化学为基础的研究方法。该技术的发展为益生菌筛选、癌症诊断与评估、遗传性疾病诊断和免疫系统疾病诊断提供了重要依据和创新思路。§1.2.1免疫测定和培养鉴定与传统的免疫分析和培养方法相比，生物芯片技术采用PCR技术检测致病微生物，添加到反应管中的特定物质同时从PCR中发现的多种或单一病原体中鉴定出来，结果的准确性不受大量死亡细菌或微生物和混合样品生长时间的影响。结果灵敏度和有效性高，可同时检测出数百种病原微生物。癌症和遗传病已被相应疾病的诊断所证实。这两种疾病基本上都有一定程度的遗传缺陷。它们的精确诊断是建立在遗传和人类相互作用的基础上的。肿瘤抑制基因可以通过微阵列进行识别，肿瘤特异性标记物可以通过生物传感器进行有效的诊断§1.2.2病原微生物检验分子生物学技术在医院临床微生物学检查中的应用可用于液体中导体蛋白、小分子蛋白和微量元素的检测。应用分子生物学技术可以检测物质，医院健康，并能消灭大量活菌，具有很大的优势。从技术上讲，它不影响液体中的其他微生物，可确定正确的治疗原因，提高分子生物学在医院微生物学研究中的应用。PCR可提高临床病理检测的有效性，并可用于检测液体物质、微量蛋白质、蛋白质、小分子物质等。作为一种健康的分子医院生物技术，分子生物技术可用于大量细菌，其最大的技术优势是不受其他微生物的干扰。分子生物技术可以提高疾病的检测和诊断效率，生物微电路和pcr技术比传统的免疫和文化检测更敏感。病原微生物多为劳动密集型、规模大；生物芯片在医学检测中的应用显示出高效、灵敏的特点。这使得同时发现数百种致病微生物成为可能，并为快速发现基因提供了有效的临床建议.§1.2.3诊断肿瘤及遗传疾病在肿瘤和遗传疾病的临床诊断中，我们使用分子生物学技术时，基因片段分析是分子科学的一个研究领域，合理利用分子生物学技术，就能迅速发现有缺陷的基因短篇。利用基因芯片鉴定靶基因P53是否有抑制癌症的突变，以及是否有生物传感器，细胞仪器等技术可以有效地识别肿瘤的象征物，分子生物技术可以识别遗传疾病家庭基因中的特异性多集成体，单链聚合、DNA限制性短篇长度分析、荧光原位杂交染色体分析、酶微排列和控制技术。需要注意的是，DNA结构非常复杂，尤其是双螺旋结构。免疫系统疾病诊断是利用分子生物技术对免疫系统疾病进行识别和诊断，可以快速判断免疫系统疾病中是否存在基因缺陷，从而研究人类免疫系统短基因的自然状态。比如抗体、免疫分析、磁性修饰材料检测、同位素、荧光、酶固化、特异性抗原、磁性纳米粒子的纳米生物技术检测出HIV；1型抗体、2型抗体的自动检测，免疫系统疾病有几种类型，所以要用分子微生物学技术来识别其中一些类型的疾病。§1.2.4分子蛋白组学在医学检验中的应用越来越多的病原菌和成功的人类基因组阵列将蛋白质组织学的研究推向了新的高度，同时将遗传因子排列在研究开发过程中更准确地进行了编码，人们的兴趣主要集中在蛋白质组织学的研究上。制定了比较先进的早期诊断和检查指标，为疾病的发展和药物的应用提供了研究目标。现在的癌基因在分子水平上可以尽量说明疾病的发展，但在发病、早期诊断、治疗方面却不足。特别是蛋白质组织学法的研究比起其他的研究方法更适合人类的生活，能够检测、诊断、发现新的生物标志物，尽快进行目标治疗，指导疾病的诊断和治疗。通过各种蛋白质组织学研究方法获得的数据可以解释与不同条件下蛋白质的变化对应的变化水平，但是蛋白质直接检测技术在临床上是不可缺少的。研究人员要求根据病情进行蛋白质反应。通过分析不同病害中的化合物和溶解状态，获得特定的蛋白质水平和细胞活性。现在正在研究最有目标性的络合物，研究其功能蛋白质组织学。材料和方法§2.1样本在临床PCR中，血清（血浆）、血液、外周血单核细胞、痰、棉片、脓液等体液（胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液等）、乳液、运输和保存对检测结果有影响。因此，为了验证试验结果的正确性，必须制定收集、运输和保存临床样品的标准程序。§2.2主要试剂卫生棉条和其他收集的材料必须是一次性的，运输容器还必须是密封的一次性消毒器。材料中使用的抗凝剂和相关试剂不应妨碍基因的扩大和测试。棉拭子

在检测性病病原体的PCR程序中，临床样本通常是棉絮，可将棉絮棒置于室温下适量的生理盐水溶液中，完全摇匀洗净，然后在室温下放置5至10分钟。立即离心残余物，随后的沉淀可用于提取DNA。如果不立即使用胶囊提取核酸，则应将其储存于-70℃下。30%储备胶溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g，亚甲双丙烯酰胺(Bis)1.0g,混匀后加ddH2O，370C溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室温。§2.3主要仪器冷冻离心机。低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-II型(上海安亭)，落地式。配有角式转头:6X50ml、12X10ml和12X1.5ml。极限转速20000rpm。§2.4实验方法§2.4.1聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)反应总体积为50μ,其中含有:模板DNA0.5μlPCR缓冲液(不含MgCl2)5μl10xMgCl2溶液5μldNTP(2.5mmol/L)0.5μl引物1(50umol/L)0.5μl引物2(50umol/L)0.5μlTaqDNA聚合酶0.5μl无菌去离子水加至50μl上层用25μl液体石蜡油覆盖。循环参数为:94°C变性10min94。C变性1min56。C退火1min72。C延伸2min共30个循取环，PCR结束后，取2μlPCR扩增产物，经1%琼脂糖凝胶电泳，在紫外检测仪上观察并拍照。§2.4.2采样量样本的类型和数量应根据已经识别出的引起疾病的微生物来确定，一般要根据引起充足数量疾病的微生物样本来确定，用于提取核酸和测量此后的增长。在病原体含量低的样品中，样品的尺寸是测量的关键。例如，PCR用于血液检查，血液中的特异性抗原或抗体一般含有较少的病原体，因此需要更多的样本。§2.4.3采样过程中的防污染最好使用一次性材料，而不是直接治疗；采集时应特别注意防止污染，混入作业人员皮肤细胞、痰盂等；如果使用玻璃器皿，则必须在0.1%高压水下处理，以使核糖核酸酶能够存活和降解，这可以抑制聚合酶链反应。§2.4.4标本的运送一旦收集了所有的PCR样品，就应暂时储存在2-8℃之下，然后再送往实验室。应尽快将其送到实验室。在无菌条件下收集的DNA靶标样品应在室温下交付实验室8小时；如果核酸是RNA，它可以在室温下运输10分钟。如果需要很长的时间，它应该在冰上运输。§2.4.5标本验收、拒收采集的样本必须从原容器中采集，不能与生化、免疫学等其他样本混用，因为它们之间感染的可能性很高。应拒收溶血或高脂血症等血样。对于沙眼衣原体的扩张，应在显微镜下观察表皮，因为病原体是在上皮细胞中形成的，如果下一层上皮没有或很少，如果在显微镜下观察到的白细胞很少，说明没有收集到合格标本。§2.4.6标本的预处理和保存血清(浆)标本如果血清样品用于DNA提取和检测，请遵循血清样本的一般处理程序。如果EDTA更适合RNA捕获检测，则严禁使用海洛因。因为它抑制了PCR的增加，在核酸提取过程中很难完全清除，防止凝固后1h内分离血清，4h内分离血浆，放入1.5ml无菌离心管保存。外周血单个核细胞外周血单个核细胞可以在抗凝剂中产生。主要有两种方法：一种是用淋巴细胞分离液分离产生外周血单个核细胞，另一种是用红细胞溶解液分解全血中的红细胞，用生理盐水反复洗涤可获得单核细胞。痰属于分泌物，临床上经常使用DNA检测结核，痰中含有大量粘稠杂质，DNA提取需要初步处理在室温下用NaOH或变性剂液化约三十分钟，如果液体样品不能立即用于DNA提取，可以保存在-70℃下。脓液脓液如用于分枝杆菌测定的标本，黏液可采用痰标本的处理方法来处理，先液化，再离心取沉淀提取DNA;水样的脓液则直接离心沉淀用生理盐水洗2-3次后，即可用于DNA提取。3.结论也就是说，分子生物学技术广泛应用于医学、标准化、质量管理等领域。由卫生部开发，对分子生物学的发展起到了重要作用。交叉污染的医疗检查在一定程度上得到了解决。分子生物学的应用主要与完全自动化的医疗系统的发展有关。可有效处理聚氯乙烯污染问题的检查。此外，分子生物学技术。例如，由于自扩增系统等技术的发展，得到了人们的认可。分子生物技术的广泛应用和医学实验室的标准化大大减少了医学检验过程中交叉污染的相关问题，使得医学检验难度大，可以提高整体效率。分子生物学检验技术的临床应用，主要指应用分子生物学检验技术对人类疾病进行诊断和研究的过程。包括病原微生物的诊断、人类基因组相关疾病的诊断恶性肿瘤个体化治疗靶点的选择以及在移植配型和个体识别方面的应用。分子生物学检验技术通过检测病原微生物的特征性基因位点以及患者自身基因结构的变化或表达异常的存在，获得疾病的诊断依据，完成疾病的分子诊断。随着分子生物学检验技术的飞速发展,分子诊断、基因诊断正日渐成为临床上快速、准确的进行疾病诊断的重要途径和手段。参考文献[1]王海英.分子生物学技术在医学检验中的应用进展[J].当代医学,2011,17(06):16.[2]李鹏.现代分子生物学技术在医学检验中的应用[J].临床和实验医学杂志,2007,(03):161.[3]杨振华.为21世纪中国检验医学事业崛起而奋斗——写于本刊更名之际[J].中华检验医学杂志,2000,(01):4.[4]姚均,何忠平,张福杰,等.核酸序列扩增早期诊断人类免疫缺陷病毒感染[J].中华检验医学杂志,2002,(06):42.[5]胡颂恩.分子生物学与检验技术[M].北京:人民卫生出版社,2018.[6]武卫杰,冷远逵,沈梦飞等.基于功能纳米材料的液相生物芯片检测技术[J].化学