鸡蛋中黄体酮类化合物的测定

鸡蛋中黄体酮类化合物的测定

黄体酮是一种天然的酪氨酸酶。它对雌激素刺激的子宫内膜具有显著的形态影响。为了维持妊娠所需的生理效果和临床治疗，它发挥了广泛的作用。黄体酮的生理作用和体内代谢规律的研究还在不断深入。但激素在食品中的残留可能会危及消费者的健康,具有潜在的致癌性。黄体酮作为一种激素,目前尚未查到相关的研究资料表明其是否与食品安全有关,相关的国家食品标准亦没有对其进行限量的规定。鸡蛋中黄体酮含量的分析文献很少,因此测定鸡蛋样品中黄体酮含量,将有利于科研人员掌握和分析鸡蛋中黄体酮的含量。目前测定黄体酮的方法,有放射免疫法、高效液相色谱法和高效液相色谱质谱联用法等方法,该研究采用超高效液相色谱串联质谱法对采自不同产地的鸡蛋和不同孵化天数的孵化鸡蛋进行黄体酮等激素含量的检测,并对检测出的鸡蛋中黄体酮的浓度进行分析,以期了解我国不同产地的鸡蛋和孵化蛋中黄体酮浓度的含量,为食品安全提供参考依据。1试验过程1.1不同种类鸡蛋的养殖在广州一家专门从事生产孵化的企业中分别取到不同孵化周期的鸡蛋样品;孵化第1天的鸡蛋、孵化第2天的鸡蛋……孵化第12天的鸡蛋、孵化第14天的鸡蛋、孵化第15天的鸡蛋、孵化第17天的鸡蛋和孵化第18天的鸡蛋共16份;在广州一批发市场上买到来自全国不同地区不同品牌的新鲜鸡蛋共14份;在肉鸡中取到一份仍留在鸡胸的未生出来的鸡胸蛋1份;总共有31份样品,每批次样品约8个鸡蛋,对以上的鸡蛋样品进行分析研究。1.2种激素的回收率和测定限采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MSMS)同时测定鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮4种激素。试样在碱性条件下用叔丁基甲醚提取,冷冻离心脱脂净化,以乙腈和甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,反相液相色谱分离。采用电喷雾离子化、多反应监测方式(MRM),对4种激素进行定性定量测定。鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中黄体酮检出限为3.0μg/kg,己烯雌酚为0.5μg/kg,睾酮为0.8μg/kg,甲基睾酮为1.0μg/kg。在鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中分别添加1倍、2倍及10倍检测限含量的药物回收检测水平试验中,黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮的回收率均在55%~105%之间,相对标准偏差为0.25%~16.00%。4种激素在1~100μg/L范围内,线性关系良好,相关系数都大于0.99。对所有样品进行以上相关步骤的检测分析,在鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中进行黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮4种激素的检测,大部分样品中检测出黄体酮,所有样品中另外3个项目,即己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮均没有检出。2黄体酮的检测根据对鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮4种激素含量情况进行的检测分析。由于己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮3个项目均没有检出,因此笔者对检测出黄体酮的情况进行分析研究,数据统计和分析如下。不同孵化天数的孵化蛋中黄体酮含量的情况见表1,鲜蛋、鸡胸蛋中黄体酮含量的情况见表2;不同孵化天数的孵化蛋中黄体酮含量的柱形图分析见图1,鲜蛋、鸡胸蛋中黄体酮含量的柱形图分析见图2。2.1不同孵化天数的孵化蛋之间黄体酮含量的差异性不同孵化天数的孵化蛋中黄体酮的检测结果见表1和图1。由表1和图1可看出,不同孵化天数的孵化蛋中黄体酮的含量具有很大差异,表明不同孵化天数的孵化蛋之间存在很大的个体差异性;相同孵化天数不同的孵化蛋中黄体酮的含量也具有很大差异,表明相同孵化天数不同的孵化蛋之间也存在很大的个体差异性。从图1还可以看出,孵化蛋随着孵化天数的增加,黄体酮的含量呈降低的趋势,孵化到第14天以后均检测不到黄体酮的含量。2.2不同鸡蛋黄体酮含量的比较不同产地不同品牌的鸡蛋和鸡胸蛋中黄体酮的检测结果见表2和图2。由表2和图2可看出,不同产地不同品牌的鸡蛋中黄体酮的含量具有很大差异,表明不同鸡蛋之间存在很大的个体差异性;同一品牌的鸡蛋中黄体酮的含量也具有很大差异,表明同一品牌的鸡蛋之间也存在很大的个体差异性。从图2还可以看出,不同鸡蛋之间黄体酮的含量有高有低,各不相同,保持一定的水平。鸡胸蛋中的黄体酮含量相对较低,结合各鸡蛋中黄体酮的不同含量,推测刚生出来的蛋中黄体酮含量可能随着鸡蛋的形成最终达到最高值。3鸡体内黄体酮的变化情况鸡蛋在孵化过程中,其内部进行着很大的变化,随着天数的增多,鸡蛋慢慢地形成胚芽,形成胚胎,一直到形成小鸡。该过程是物质的转化吸收过程,特别是鸡蛋中的蛋白、蛋黄作为营养物质不断地被转化吸收,最终全部被利用形成了小鸡。从以上试验可以看出,黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮作为一类激素在鸡蛋中,只有黄体酮有残留,其余的激素均未检出。所有鸡蛋的检测结果表明,黄体酮在鸡体内有一定的生理作用,同时推测黄体酮可能是由卵巢分泌进入鸡蛋中,并随着鸡蛋的形成最终达到最高值,但在不同的鸡蛋个体中,黄体酮的含量有高有低,存在很大的个体差异,没有一定的规律性。在孵化过程中,随着孵化天数的增加,黄体酮不断被转化,残留量不断降低,在孵化第14天后,黄体酮的残留量已经不能检测出来,可以推测黄体酮在小鸡的孵化过程中,对小鸡的孵化过程有很大的作用。该试验只是针对鲜蛋、孵化蛋和鸡胸蛋中黄体酮、己烯雌酚、睾酮和甲基睾酮4种激素的含量情况进行了分析研究,孵化蛋中是否存在其他不安全因素,还有待进一步的研究,该试验也未对黄体酮在鸡体内的代谢过程进行全面的研究,黄体酮在鸡体内有着哪些生理变化,以及如何进入鸡蛋,鸡蛋孵化过程中黄体酮的转化机理等一系列的问题还有