化妆品微生物的检验流程

艳庄化妆品微生物检验操作方法文件编号：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z页号：1/51：本方法包括化妆品微生物检测的五项指标：细菌总数、霉菌和酵母菌总数、粪大肠菌群、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌。2：样品的采集以及注意事项:2.1所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml,包装量小于20g的样品，采集量应适量增加，其总量应大于16g。2.2供检验样品，应严格保持原有的包装状态，进口产品应为市售包装。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。2.3接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检测。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。2.4若只有一份样品而同时需做几种分析，如微生物、理化等，则先做微生物检验，再将剩余样品作其它的分析。2.5在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。3：供检样品的制备：3.1液体样品3.1.1水溶性的液体样品，量取10ml加到90ml灭菌生理盐水中，混匀后，制成1：10的检液。3.1.2油性液体，取样品10ml，先加5ml灭菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。3.2膏、霜、乳剂半固体状样品3.2.1亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的三角瓶中（也可以在试管中进行），充分振荡混匀，静置15min，用其上清液作为1：10的检液。3.2.2疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵（或试管）中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在40~44℃水浴中充分混合，制成1：10检液。3.2.3固体样品，称取10g，加到90ml灭菌的生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置，取上清液作为1：10的检液。注：如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加到90ml灭菌生理盐水，均质1~2min，疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10ml灭菌液体石蜡，10ml灭菌吐温80，70ml灭菌生理盐水，均质3~5min确定日期核准审核拟案艳庄化妆品微生物检验操作方法文件编号：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z页号：2/54：微生物检验操作：4.1菌落总数4.1.1定义：菌落总数是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），1g(ml)检样中所含有菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学说总评论的综合依据。4.1.2菌落总数检验程序：检样↓做成几个适当倍数的稀释液↓选择2~3个适宜稀释度，各以1ml分别加入灭菌平皿内↓每皿内加入适量卵磷脂吐温80营养琼脂37℃培养48±2h↓菌落计数↓报告4.1.3结果报告：应选择菌落数在30~300个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g(ml)检样中所含的细菌菌落数。以CFU/g(ml)表示。4.2霉菌和酵母菌4.2.1定义：霉菌和酵母菌总数是指化妆品检样在一定条件培养后1g(ml)化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落总数，籍以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃培养72h，计算所生长的霉菌和酵母菌数。4.2.2霉菌和酵母菌检验程序：确定日期核准审核拟案艳庄化妆品微生物检验操作方法文件编号：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z页号：3/5检样（1：10）↓若菌较多可做成几个适当倍数的稀释液↓选择1~3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿内↓每皿内加入适量虎红培养基28℃培养72h↓霉菌和酵母菌计数报告4.2.3结果报告：判定结果时，应选取菌落数在5~50个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g(ml)检样中所含有的霉菌和酵母菌总数，以CFU/g(ml)表示。4.3粪大肠菌群4.3.1定义：粪大肠菌群系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌，在44.5℃培养24~48h能发酵乳糖产酸产气。改菌来之人和温血动物粪便，是重要的卫生指示菌。4.3.2粪大肠菌群检验程序检验（1：10）↓乳糖胆盐发酵管44±0.5℃，24~48h↓↓↓不产酸产气产酸产气↓↓粪大肠菌群阴性↓↓↓报告EMB平板37℃18~24h蛋白胨水44±0.5℃24h↓↓↓↓观察靛基质反应革兰氏染色典型菌落↓↓↓报告确定日期核准审核拟案艳庄化妆品微生物检验操作方法文件编号：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z页号：4/54.3.3结果报告：根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验为阳性，则可报告检样中检出粪大肠菌群。4.4铜绿假单孢菌4.4.1定义：铜绿假单孢菌属于假单孢菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等.4.4.2绿脓杆菌检验程序检样（1：10）↓增菌培养：SCDLP37℃培养18~24h↓分离培养：十六烷基三甲基溴化铵琼脂37℃18~24h↓↓↓↓↓↓↓革兰氏染色氧化酶试验绿脓菌素试验硝酸盐产生试验明胶液化试验42℃生长试验4.4.3结果报告4.4.3.1用十六烷甲基溴化胺琼脂平板分离的疑似绿脓杆菌菌落，经染色色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，氧化酶阳性并产生绿脓菌素的，应报告检出绿脓杆菌。4.4.3.2如果分离的疑似菌株为革兰氏阴性并产生绿脓菌色素，而能液化明胶，硝酸盐还原产气和42℃生长试验皆为阳性的，也应报告检出绿脓杆菌。4.5金黄色葡萄球菌：4.5.1定义：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽孢，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。4.5.2金黄色葡萄球菌检验程序检样（1：10）↓增菌培养：SCDLP37℃培养24h↓分离培养：BairdParker平板（或血琼脂平板）37℃培养24~48h）↓↓↓↓革兰氏染色甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验4.5.3结果报告：4.5.3.1经增菌培养后，在分离平板上有典型或可疑菌落生长，经染色镜